Спосіб моделювання середнього отиту у лабораторних тварин

Реферат: Спосіб моделювання середнього отиту у лабораторних тварин, при якому у середнє вухо у тимпанальну булу тварини вводять розчин гістаміну, суспензію мікроорганізмів та 5 % розчин хлориду кальцію (з метою розвитку альтерації слизової оболонки). При цьому гістамін вводять через 7-10 хв. після введення хлориду кальцію, а суспензію мікроорганізмів - через 20-30 хв. після введення гістаміну. UA 101763 U (54) СПОСІБ МОДЕЛЮВАННЯ СЕРЕДНЬОГО ОТИТУ У ЛАБОРАТОРНИХ ТВАРИН UA 101763 U UA 101763 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до медицини, а саме до експериментальної медицини, зокрема моделювання середнього отиту у лабораторних тварин, і може бути використана при дослідженні уражень слухової системи та визначення ефективності коригуючих впливів. Відомий спосіб моделювання середнього отиту, при якому для зниження мукоциліарного кліренсу слизової оболонки та розвитку її набряку в барабанну порожнину вводять розчин гістаміну, а потім у барабанну порожнину або носоглотку лабораторної тварини вводять суспензію мікроорганізмів [1]. Недоліком відомого способу є невеликий відсоток виникнення індукованого середнього отиту. Недостатня кількість мікроорганізмів не спричиняє розвитку захворювання, а надлишок може призвести до менінгіту або сепсису з наступною загибеллю тварини [2]. В основу корисної моделі поставлена задача вдосконалити відомий спосіб, в якому шляхом додаткового введення розчину хлориду кальцію до гістаміну та суспензії мікроорганізмів досягають істотного підвищення відтворюваності експериментальної моделі. При вирішенні технічної задачі було взято до уваги те, що розчин хлориду кальцію викликає альтерацію тканин у місці введення [3], а також те, що у деяких лабораторних тварин (морських свинок) важко ввести розчин у барабанну порожнину крізь зовнішній слуховий хід через його звивистість і довжину та врахувати концентрацію суспензії для різних видів мікроорганізмів при відтворенні різних форм середніх отитів [2]. Виходячи з наведеного, поставлена задача вирішується тим, що у відомому способі моделювання середнього отиту, який включає введення в середнє вухо лабораторної тварини розчину гістаміну з наступними введенням суспензії мікроорганізмів, відповідно до корисної моделі, гістамін і суспензію мікроорганізмів вводять не у барабанну порожнину, а у тимпанальну булу тварини, і додатково, з метою розвитку альтерації слизової оболонки, у тимпанальну булу вводять 5 % розчин хлориду кальцію. Спосіб застосовують наступним чином. Лабораторну тварину вводять у наркоз шляхом введення в черевну порожнину розчину кетаміну в розрахунку 0,18 мл на 100 г маси тіла тварини (чи іншим способом). За допомогою голки (23Gx1") виконують прокол шкіри та зовнішньої кісткової стінки тимпанальної були (позаду вушної раковини) та шприцом вводять в булу 0,2 мл 5 % розчину хлориду кальцію. Не видаляючи голки з були, у неї через 7-10 хв. вводять 0,2 мл 0,01 % розчину гістаміну, а ще через 20-30 хв. через цю ж голку вводять суспензію мікроорганізмів. За такої методики введення різних видів мікроорганізмів дозволяє викликати розвиток різних форм середнього отиту (гострий, ексудативний, хронічний) у всіх лабораторних тварин за порівняно невисокої концентрації збудників у суспензії і при цьому не викликати передчасної смерті тварини. Приклад 1. Статевозрілу морську свинку (самця вагою 650 г) вводили в наркоз шляхом введенням 0,6 мл розчину кетаміну у черевну порожнину. Після досягнення загального знечулення і знерухомлення тварини голкою в типанальну булу ввели 0,2 мл 5 % розчину хлориду кальцію. Не виймаючи голку, через 10 хв. через цю ж голку у тимпанальну булу ввели 0,2 мл 0,01 % розчину гістаміну, а ще через 30 хв. через цю ж голку ввели 0,4 мл суспензії 9 Haemophilus influenzae 0,4 × 10 КУО/мл. Через 24 години морську свинку умертвили шляхом декапітації після попереднього введення в наркоз 5 % розчином тіопенталу. При отомікроскопії спостерігали різке почервоніння барабанної перетинки, її випинання, розмитість контурів. Після розтину барабанної порожнини спостерігали різке потовщення слизової оболонки, появу водянистого ексудату, що свідчило про ексудативну фазу гострого середнього отиту. Приклад 2. Статевозрілу морську свинку (самка вагою 570 г) ввели у наркоз шляхом введення 0,5 мл розчину кетаміну у черевну порожнину. Після досягнення загального знечулення і знерухомлення тварини в середнє вухо ввели 0,5 мл 0,01 % розчину гістаміну, а 9 ще через 20 хв. через цю ж голку ввели 0,4 мл суспензії Streptococcus pneumoniae 0,7 × 10 КУО. Через 72 години морську свинкуумертвили шляхом декапітації після попереднього введення в наркоз 5 % розчином тіопенталу. При отомікроскопії спостерігали заповнення зовнішнього слухового ходу гнійними виділеннями, після туалету почервоніння та набряк барабанної перетинки, у нижніх квадрантах перфорацію розміром 2×1 мм. Після розтину барабанної порожнини спостерігали заповнення барабанної порожнини гнійним ексудатом, потовщення та гіперемію слизової оболонки, що свідчило про гнійну фазу гострого середнього отиту. Приклад 3. Запропонованим способом моделювали гострий середній отит у 6 морських свинок. Результати дослідження порівняли з наслідками застосування методики прототипу (контрольна група), ці дані наведено у таблиці. Із даних таблиці видно, що запропонований метод, при якому, шляхом введення в тимпанальну булу розчинів хлориду кальцію, гістаміну і суспензії мікроорганізмів, у всіх тварин розвинувся гострий середній отит без виникнення 1 UA 101763 U внутрішньочерепних ускладнень. У контрольній групі тварин (6), де проводилось введення гістаміну з суспензією мікроорганізмів, у 4 (66,7 %) морських свинок розвинувся гострий середній отит, у однієї тварини хвороби не виникло, а у однієї виникло внутрішньочерепне ускладнення, через що вона загинула. 5 Таблиця Група спостереження Дослідна Контроль 10 15 20 25 30 35 Розвиток ускладнень Розвиток індукованого Відсутність (смерть морської Всього середнього отиту хвороби свинки) 6 (100 %) 6 4 (66,7 %) 1 (16,7 %) 1 (16,7 %) 6 Морфологічні дослідження слизової оболонки барабанної порожнини морських свинок підтвердили виражені запальні явища, що мали місце у середньому вусі лабораторних тварин. Слизова оболонка середнього вуха була відшарована від окістя, у епітеліальній пластинці виявлені порушення структури війчастого епітелію та збільшення кількості келихоподібних клітин. Спостерігалось також нерівномірне кровонаповнення судин, повнокрів'я вен і капілярів, капіляростаз та периваскулярний набряк. Тобто при введенні різних мікроорганізмів можна моделювати різні форми середнього отиту. Отже, запропонований спосіб забезпечує вищий, порівняно із прототипом, рівень відтворення експериментальної моделі, і може бути застосованим у наукових дослідженнях. Таким чином, використання запропонованого способу дає змогу викликати гострий середній отит у всіх лабораторних тварин і при цьому не умертвити тварину, що є важливим для проведення подальших досліджень. Джерела інформації: 1. Leo Т. М. van der Ven, Germie P. J. M. van den Dobbelsteen, Bhawani Nagarajah, Harry van Dijken, Paul M. Dortant, Josephus G. Vos, Paul J. M. Roholl A New Rat Model of Otitis Media Caused by Streptococcus pneumoniae: Conditions and Application in Immunization Protocols // Infect Immun. 1999 Nov; 67(11): 6098-6103. 2. Moo Kyun Park, Byung Don Lee Development of Animal Models of Otitis Media // Korean J Audiol. 2013 Apr; 17(1): 9-12. 3. Чекман І.С., Горчакова Н.О. Казак JI.I. Фармакологія. Підручник для студентів медичних факультетів. Видання 2-ге - Вінниця: Нова книга. - 2011. - 784 с. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Спосіб моделювання середнього отиту у лабораторних тварин, при якому у середнє вухо вводять розчин гістаміну та суспензію мікроорганізмів, який відрізняється тим, що гістамін і суспензію мікроорганізмів вводять у тимпанальну булу тварини, додатково у тимпанальну булу вводять 5 % розчин хлориду кальцію (з метою розвитку альтерації слизової оболонки), причому гістамін вводять через 7-10 хв. після введення хлориду кальцію, а суспензію мікроорганізмів через 20-30 хв. після введення гістаміну. Комп’ютерна верстка І. Скворцова Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2