Спосіб діагностики мультирезистентного туберкульозу легень

Реферат: Спосіб діагностики мультирезистентного туберкульозу легень включає виявлення поліморфізмів генів. Дезоксирибонуклеїнову кислоту виділяють з лейкоцитів цільної венозної крові з наступним визначенням поліморфізмів T330G гена інтерлейкіну-2 (ІЛ-2), С589Т гена інтерлейкіну-4, G1082A гена інтерлейкіну-10 та С3872Т гена С-реактивного білка і при наявності гетерозиготного генотипу у трьох та більше перерахованих поліморфізмах діагностують мультирезистентний туберкульоз легень. UA 102481 U (54) СПОСІБ ДІАГНОСТИКИ МУЛЬТИРЕЗИСТЕНТНОГО ТУБЕРКУЛЬОЗУ ЛЕГЕНЬ UA 102481 U UA 102481 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до медицини, а саме до фтизіатрії, і може бути використана для діагностики мультирезистентного туберкульозу легень. Резистентність мікобактерій туберкульозу (МБТ) до антимікобактеріальних препаратів залишається однією із актуальних проблем у всьому світі. За даними літератури поширеність мультирезистентного туберкульозу (МРТБ) в усьому світі набула некерованого характеру, а деякими країнами навіть розглядається як загроза національної безпеки. У зв'язку з такою ситуацією боротьба з цим негативним явищем стала глобальною, про що свідчить як поява численних керівних та рекомендаційних видань, так й публікації окремих авторів. Зростання мультирезистентного та повторного захворювання на туберкульоз піддержують епідемію туберкульозу і таким чином ця хвороба залишається однією з основних загроз для людства. Таким чином, діагностика МРТБ легень є досить актуальною і складною. Розробка нових способів діагностики МРТБ легень є актуальною задачею фтизіатричної практики. Так, наприклад, відомий спосіб діагностики МРТБ легень [Using the Xpert MTB/RIF assay to detect pulmonary and extrapulmonary tuberculosis and rifampicin resistance in adults and children. /WHO recommendations. - Geneva, Switzerland, 2013. - 128 p.], який полягає у виявленні дезоксирибонуклеїнової кислоти (ДНК) МБТ та гена стійкості до рифампіцину за допомогою Xpert MTB/RIF Assay. Даний спосіб діагностики мультирезистентного туберкульозу легень є найбільш близьким до того, що заявляється, за технічною суттю та результатом, який може бути досягнутий, тому його вибрано за прототип. В основу корисної моделі поставлено задачу розширення арсеналу способів діагностики МРТБ легень. Поставлена задача вирішується тим, що у відомому способі діагностики МРТБ легень, який включає виявлення поліморфізмів генів, згідно з корисною моделлю, дезоксирибонуклеїнову кислоту (ДНК) виділяють з лейкоцитів цільної венозної крові з наступним визначенням поліморфізмів T330G гена інтерлейкіну-2 (ІЛ-2), С589Т гена інтерлейкіну-4 (ІЛ-4), G1082А гена інтерлейкіну-10 (ІЛ-10) та С3872Т гена С-реактивного білка (СРБ) і при наявності гетерозиготного генотипу у трьох та більше перерахованих поліморфізмах діагностують мультирезистентний туберкульоз легень. Технічний ефект способу, що заявляється, досягають завдяки тому, що активація поліморфізмів T330G гена ІЛ -2, С589Т гена ІЛ-4, G1082A гена ІЛ-10 та С3872Т гена СРБ впливає на вироблення відповідних біологічно активних речовин, які, у свою чергу, належать до медіаторів з прозапальним та протизапальним механізмом дії та визначають характер та направленість імунної відповіді організму. Спосіб виконують наступним чином: виділення ДНК проводять з цільної венозної крові (2,0 мл), яку збирають в суху стерильну пробірку типу Еппендорфф з 0,2 мл антикоагулянту (0,05 Μ розчин етилендіамінтетраоцтової кислоти). Проби зберігають при температурі -20 °C до 6 міс. Для виділення ДНК пробірки розморожують при кімнатній температурі, кров перемішують до однорідності. У суху пробірку Еппендорфф вносять 0,5 мл розмороженої крові і додають 0,5 мл реактиву "ДНК-ЕКСПРЕС-КРОВ" (набор фірми "Літех" (Росія)). Вміст пробірки ретельно перемішують на вортексі і центрифугують 2 хв. при 2000 об/хв. Потім проби поміщають в сухоповітряний термостат і прогрівають 15 хв. при температурі 99 °C. Після цього проби центрифугують в високошвидкісній центрифузі при 12000 об/хв. при кімнатній температурі. Отриманий супернатант (надосадова рідина) відбирають у сухі чисті пробірки типу Еппендорфф місткістю 0,5 мл і використовують як досліджуваного зразка ДНК. Проведення полімеразної ланцюгової реакції для виявлення поліморфізмів генів людини за допомогою набору фірми "Літех" (Росія) гена ІЛ-2 (T330G), гена ІЛ-4 (С589Т), гена ІЛ-10 (G1082A) та гена СРБ (С3872Т) виконують зі зразками виділеної ДНК. Паралельно проводять дві реакції ампліфікації - з двома парами алель-специфічних праймерів. Результати аналізу дозволяють дати три типи висновків: нормальна гомозигота, гетерозигота і мутантна гомозигота. При наявності гетерозиготного генотипу у трьох та більше перерахованих поліморфізмах діагностують мультирезистентний туберкульоз легень. Ефективність способу ілюструють наступні приклади: Приклад № 1. Хворий Α., 48 років, госпіталізований з діагнозом: МРТБ верхньої частки правої легені (інфільтративний), Дестр+ (наявність деструкції), МБТ+ (позитивний результат на мікобактерії туберкульозу), М+ (позитивний результат дослідження мазка на кислотостійкі бактерії), МГ+ (наявність ДНК МБТ у харкотинні), риф+ (наявність гена rpoB МБТ стійкості до рифампіцину), К+ (позитивний результат культурального дослідження), резист+ (наявність резистентності до протитуберкульозних препаратів), Η (ізоніазид), R (рифампіцин), Ε 1 UA 102481 U 5 10 15 20 25 30 35 (етамбутол), S (стрептоміцин), гіст 0 (гістологічне дослідження не проводили), кат (категорія лікування) 4, РТБ (діагностований рецидив туберкульозу), ког (когорта) 1. Скарги: загальна слабкість, сухий кашель, підвищення температури тіла до 38,3 °C, задишка при фізичному навантаженні. Об'єктивно: загальний стан хворого задовільний, температура тіла 37,3 °C. Аускультативно в легенях: під лопаткою з правої сторони сухі, одиночні хрипи. Дані лабораторних і інструментальних методів обстеження: У першу добу перебування хворого у стаціонарі було проведено дослідження поліморфізмів генів біологічно активних речовин. Отримано наступні результати: поліморфізм T330G гена ІЛ-2 (виявлений гетерозиготний TG генотип), С589Т гена ІЛ-4 (виявлений гетерозиготний СТ генотип), G1082A гена ІЛ-10 (виявлений гетерозиготний GA генотип) та С3872Т гена СРБ (виявлений гетерозиготний СТ генотип). У хворого визначається за даним дослідженням МРТБ легень. МРТБ у даного хворого підтверджено стандартними методами діагностики. При дослідженні харкотиння методом мікроскопії, посіву та генетичного дослідження на наявність ДНК МБТ - виявлені МБТ. Виявлено ген rpoB МБТ стійкості до рифампіцину. Бактеріологічним методом виявлена стійкість МБТ до Н, R, Ε та S. Рентгенологічне дослідження органів грудної клітини (ОГК): у зменшеної в об'ємі верхньої частки правої легені відмічаються вогнищеві тіні різних розмірів та інтенсивності, а також інфільтрація з порожниною розпаду на верхівці 1,2×1,6 см. Синуси вільні. Приклад № 2. Хворий Б., 44 ріки, госпіталізований з діагнозом: ВДТБ (вперше діагностований туберкульоз) верхньої частки правої легені (інфільтративний), Дестр+, МБТ+, М+, МГ+, риф. - (відсутність гена rpoB стійкості до рифампіцину), К+, резист (резистентністі до протитуберкульозних препаратів не має), гіст 0, кат 1, ког 1. Скарги: загальна слабкість, зниження ваги тіла на 2 кг за два тижні. Об'єктивно: загальний стан хворого задовільний, температура тіла 37,6 °C. Аускультативно в легенях: жорстке дихання. Хрипів не має. Дані лабораторних і інструментальних методів обстеження: У першу добу перебування хворого у стаціонарі було проведено дослідження поліморфізмів генів біологічно активних речовин. Отримано наступні результати: поліморфізм T330G гена ІЛ-2 (виявлений гетерозиготний TG генотип), С589Т гена ІЛ-4 (виявлений гомозиготний ТТ/мутаційний/генотип), G1082A гена ІЛ-10 (виявлений гомозиготний АА/мутаційний/генотип) та С3872Т гена СРБ (виявлений гомозиготний ТТ/мутаційний/генотип). У хворого визначається за даним дослідженням туберкульоз легень, але не спостерігається МРТБ, що підтверджено стандартними методами діагностики. При дослідженні харкотиння методом мікроскопії, посіву та генетичного дослідження на наявність ДНК МБТ - виявлені МБТ. Гену rpoB МБТ стійкості до рифампіцину не виявлено. Бактеріологічним методом не виявлено стійкості МБТ до Н, R, Ε та S. Рентгенологічне дослідження ОГК: у верхній частці правої легені у S1+2 вогнищеві тіні та інфільтрат 1,1×0,9 см, там же малі порожнини розпаду. Серце у нормі. 40 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 45 Спосіб діагностики мультирезистентного туберкульозу легень, який включає виявлення поліморфізмів генів, який відрізняється тим, що дезоксирибонуклеїнову кислоту виділяють з лейкоцитів цільної венозної крові з наступним визначенням поліморфізмів T330G гена інтерлейкіну-2 (ІЛ-2), С589Т гена інтерлейкіну-4, G1082A гена інтерлейкіну-10 та С3872Т гена Среактивного білка і при наявності гетерозиготного генотипу у трьох та більше перерахованих поліморфізмах діагностують мультирезистентний туберкульоз легень. Комп’ютерна верстка А. Крижанівський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2