Штам campylobacter fetus subspecies fetus lbf для виготовлення біопрепаратів для діагностики кампілобактеріозу тварин

Реферат: Штам Campylobacter fetus subspecies fetus LBF, ізольований з аборт-плоду BPX, для виготовлення біопрепаратів для діагностики кампілобактеріозу тварин. UA 103255 U (12) UA 103255 U UA 103255 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до ветеринарної імунології та мікробіології та стосується штаму Campylobacter fetus subspecies fetus LBF для виготовлення біопрепаратів для діагностики кампілобактеріозу тварин. Існує штам Campylobacter fetus subspecies intestinalis (AC SU 1294009 C12 N1/20, K39/106), який застосовують для виготовлення діагностикуму та вакцини проти кампілобактеріозу ВРХ на території Російської Федерації. Вітчизняних штамів такого напрямку застосування бракує. В основу корисної моделі поставлено задачу одержати штам Campylobacter fetus subspecies fetus LBF шляхом селекціонування штаму кампілобактерій, який має стабільні типові біологічні характеристики щодо підвиду Campylobacter fetus subspecies fetus, зокремаг має специфічні антигенні властивості. Також важливою умовою було винайти штам із високими ростовими показниками для швидкого та ефективного накопичення бактерійної маси у виробничих умовах. Штам Campylobacter fetus subspecies fetus LBF ізольований з аборт-плоду ВРХ в лабораторії вивчення бруцельозу ННЦ "ІЕКВМ" в 1980 р. та зберігається в музеї лабораторії. Штам належить до відділу Gracilicutes, родини Campylobacteriaceae, роду Campylobacter, виду Campylobacter fetus підвиду fetus. Штам Campylobacter fetus subspecies fetus LBF має наступні характеристики. Морфо-тинкторіальні властивості. В мазках з напіврідкого м'ясопептонно-печінкового агару (НРМППА) та щільного м'ясопептонно-печінкового агару (МППА), зафарбованих за Грамом, штам має вигляд грамнегативних поліморфних клітин у вигляді "коми", літер "S" та "V", в одному полі зору зустрічається до 2-3 спіралевидних форм. Розмір клітин 1,5-8,0×0,2-0,5 мкм. При фарбуванні основним фуксином клітини мають блідо-рожевий колір. Культуральні властивості. Штам культивують за температури (37±0,5)°С в мікроаерофільних умовах. На МППНРА штам росте у вигляді сіро-білуватого диска товщиною 2-4 мм під поверхнею середовища, на МППА - у вигляді невеликих випуклих колонії з сіро-блакитним відтінком. Біохімічні властивості. Штам каталазопозитивний, рухливий, дає негативну трипафлавінову пробу. Штам росте на НРА із 1 % гліцину та на НРА з 4 % жовчі. Не росте на НРА із 3,5 % натрію хлориду. Штам формує H2S на НРМППА із 0,02 % цистину. Штам нечутливий до налідиксової кислоти, чутливий до цефалотину. Антигенні властивості. Штам має термостабільний соматичний антиген В, флагелярний антиген Н та термолабільний поверхневий антиген А-2. Згідно з класифікації Berg et al. (1972) штам належить до групи В (за О антигеном). Патогенні властивості. Штам ізольований з аборт-плоду ВРХ і є патогенним для цільових тварин. Окремі дослідження щодо інфікування рогатої худоби у виробничих умовах не проводили. Штам патогенний для лабораторних тварин. При зараження білих мишей 3 внутрішньочеревно в дозі 0,3 см (2 млрд. КУО) штам спричиняє пригнічення загального стану, лихоманку. На розтині (7 доба після інфікування) виявляли гострий спленіт та гепатит, геморагічне запалення кишечнику. Імуногенні властивості. Штам показав високу ефективність в дослідах щодо отримання позитивної кампілобактерійної сироватки шляхом імунізації кролів інактивованою суспензією штаму. Приклад 1 4 здоровим кролям у віці 6 міс. була введена інактивована суспензія штаму С. fetus subsp. 3 3 3 fetus LBF у наростаючих дозах - 2 млрд. КУО/см , 3 млрд. КУО/см , 4 млрд. КУО/см , 5 млрд. 3 КУО/см з інтервалом 4 доби. Через 7 діб після останнього введення кролі були піддані забою шляхом тотального знекровлення. Сироватка крові була перевірена в РА із стандартними кампілобактеріозними антигенами. При цьому встановлено, що сироватка дає позитивну РА на # із антигеном С fetus subsp. fetus в титрі 1:400 та не реагує із гетерологічним антигеном С fetus subsp. venerialis Приклад 2 Штами С. fetus subsp. fetus LBF висівали на МППА з 0,02 % цистину, 0,5 % дріжджового автолізату (режим інкубації 72 години за 37 °C в мікроаерофільних умовах). Бактеріологічну масу змивали 0,4 % формалінізованим фізіологічним розчином та витримували за 37 °C впродовж 48 годин для інактивації. Повноту інактивації перевіряли за стандартними методиками. 1 UA 103255 U 5 10 15 Суспензію кампілобактерій відмивали шляхом дворазового центрифугування за 2000 об./хв впродовж 15 хвилин. Осад бактерій ресуспендували стерильним фізрозчином із 0,4 % 3 формаліну та стандартизовали до концентрації 20 млрд. КУО/см за стандартом каламутності. Специфічність антигену перевіряли в СКРА із застосуванням гомо- і гетерологічних кампілобактеріозних сироваток. Показано, що антиген давав позитивну СКРА на # із сироваткою С fetus subsp. fetus та негативну реакцію із сироваткою С. fetus subsp. venerialis та негативною контрольною сироваткою. Таким чином, запропонований нами штам Campylobacter fetus subspecies fetus LBF має типові морфо-тинкторіальні, культуральні, біохімічні, антигенні та імуногенні властивості та може бути застосований як виробничий для отримання антигенів та позитивних сироваток для діагностики кампілобактеріозів тварин, спричинених кампілобактеріями підвиду С. fetus subsp. Запропонований штам знайде широке впровадження в біотехнологічній промисловості або наукових дослідженнях для створення вітчизняних активних та специфічних біопрепаратів для діагностики і контролю кампілобактеріозів серед продуктивних, племінних та декоративних тварин. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 20 Штам Campylobacter fetus subspecies fetus LBF, ізольований з аборт-плоду BPX, для виготовлення біопрепаратів для діагностики кампілобактеріозу тварин. Комп’ютерна верстка В. Мацело Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2