Спосіб гіпотермічного зберігання еритроцитів барана

Реферат: Спосіб гіпотермічного зберігання еритроцитів барана передбачає розміщення клітин у консервуюче середовище, що містить хлорид натрію, маніт в концентрації 50 г/л на фосфатному буфері, рН=7,4. Еритроцити перед розміщенням у консервуюче середовище обробляють озонованим фізіологічним розчином. UA 106241 U (12) UA 106241 U UA 106241 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Корисна модель належить до галузі кріобіології і кріомедицини і може бути використана для вивчання механізмів гіпотермії. Відомий спосіб гіпотермічного зберігання еритроцитів барана у інертному газі - гелії [1]. Недоліком цього способу є те, що еритроцити після зберігання втрачають здібність до розеткоутворювання. Крім того спосіб потребує великих витрат через використання дорогого газу, що обмежує його застосування. Найбільш близьким аналогом до способу, що запропонований, є спосіб гіпотермічного зберігання еритроцитів барана у середовищі Олсвера, яке має склад: глюкоза - 20,5 г/л, цитрат натрію - 8 г/л, лимонна кислота - 0,522 г/л, хлорид натрію - 4,2 г/л [2]. Недоліком цього способу є те, що він не забезпечує тривалого зберігання клітин. Після 8 тижнів гіпотермічного зберігання знижується осмотична стійкість еритроцитів (гемоліз 71 %) і втрачається здібність до розеткоутворювання. В основу корисної моделі поставлена задача створити такий спосіб гіпотермічного зберігання еритроцитів барана, який би за рахунок зміни складу середовища і попередньої обробки еритроцитів забезпечив можливість збільшити строк зберігання клітин. Поставлена задача вирішується тим, що в способі гіпотермічного зберігання еритроцитів барана, який передбачає поміщення клітин у консервуюче середовище, що містить хлорид натрію, згідно з корисною моделлю, в середовище додатково вводять маніт в концентрації 50 г/л на фосфатному буфері, рН=7,4, а еритроцити перед поміщенням в консервуюче середовище обробляють озонованим фізіологічним розчином. Попередня обробка еритроцитів озонованим фізіологічним розчином та зміна складу консервуючого середовища дають можливість збільшити термін зберігання еритроцитів до 12 тижнів. При цьому зберігається їхня здатність до розеткоутворювання і підвищується осмотична стійкість. Спосіб пояснюється прикладами. Приклад 1 Кров барана, забрану на цитраті натрію (3,8 %) у співвідношенні 9:1, центрифугували протягом 10 хв. при 800 g і збирали плазму. Отриманий осад еритроцитів змішували в об'ємному співвідношенні 1:1 з озонованим фізіологічним розчином. Озонування фізіологічного розчину здійснювали шляхом барботування його озоно-кисневою сумішшю при температурі танучого льоду до досягнення концентрації озону 0,16 мг/л. Після обробки озонованим фізіологічним розчином клітини центрифугували 10 хв. при 800 g та збирали надосад. Цю процедуру повторювали двічі. Отриманий осад еритроцитів змішували 1:1 з консервуючим середовищем, що містить маніт 50 г/л і хлорид натрію 0,9 г/л на фосфатному буфері, рН=7,4. Клітини зберігали при температурі 4-6 °C протягом 12 тижнів. Через 12 тижнів зберігання виміряли осмотичну стійкість еритроцитів, для чого їх розмішували у розчин хлориду натрію і вимірювали гемоліз. Осмотична стійкість оброблених озоном еритроцитів після зберігання становила 50 %. Коефіцієнт осмотичної стійкості складав для озонованих еритроцитів 0,54. Для визначення здатності еритроцитів до розеткоутворювання їх фарбували за методом Рамановського-Гімзе [3], за допомогою камери Горяєва визначали концентрацію клітин та підраховували кількість розеткоутворюючих клітин. На приведеному знімку видно, що еритроцити барана прикріпилися до лімфоциту людини, що свідчить про утворення розетки. Приклад 2 Спосіб здійснювали аналогічно прикладу 1 за винятком того, що еритроцити не обробляли озонованим фізіологічним розчином. Після 12 тижнів зберігання клітин в консервуючому середовищі з манітом гемоліз становив 68 %, коефіцієнт осмотичної стійкості - 0,61, розетки не утворювались. Приклад 3 Приклад здійснювали аналогічно прикладу 1 за винятком того, що використовували консервуюче середовище з різними концентраціями маніту. Результати наведені в таблиці. 1 UA 106241 U Таблиця Гемоліз еритроцитів барана в залежності від концентрації маніту в консервуючому середовищі (n=6) концентрація маніту, г/л 40 45 50 55 гемоліз, % 68±4,1 56±2,5 50±1,6 72±3,8 З таблиці видно, що при використанні маніту в концентрації 50 г/л відмічається найменший процент гемолізу для еритроцитів. 5 10 Джерела інформації: 1. Method for extending the useful shelf-life of refrigerated red blood cells by flushing with inert gas. Пат.США 5624794, МПК A01N 1/02; A61M 37/00. Опубл. 29.04.97. 2. Schjerning-Thiesen К. Experiments on the stability of sheep erythrocytes stored in Alsevers solution//Act. Phat. Microbiol. Scand. - 1953. - Vol. 32, № 1. - P. 198-203. 3. Лабораторные методы исследования в клинике. Справочник. Под ред.проф. В.В. Меньшикова. - М.: Медицина. - 1987, с. 48. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 15 20 Спосіб гіпотермічного зберігання еритроцитів барана, який передбачає розміщення клітин у консервуюче середовище, що містить хлорид натрію, який відрізняється тим, що в середовище додатково вводять маніт в концентрації 50 г/л на фосфатному буфері, рН=7,4, а еритроцити перед розміщенням у консервуюче середовище обробляють озонованим фізіологічним розчином. Комп’ютерна верстка О. Гергіль Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2