Спосіб корекції функціонального стану лімфоїдних клітин

1. Спосіб корекції функціонального стану лімфоїдних клітин, який включає вплив фармакологічних речовин та оцінювання їх дії на апоптоз, який відрізняється тим, що як фармакологічну речовину використовують антигістамінні препарати. 2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що як антигістамінний препарат використовують, наприклад, фамотидин. Корисна модель стосується галузей біології і медицини та може бути використана для фармакологічної корекції функціонального стану клітин імунної системи при патологіях, що супроводжуються порушеннями протікання імунологічних процесів. В основі багатьох захворювань лежать процеси порушення клітинного та гуморального імунітету, що патогенетичне обґрунтовує доцільність використання препаратів , які впливають на різноманітні ланки імунного захисту [Ковальчук Л.В., Павлюк А.С., Каспаров А.А., Щигленко Н.А. и соавт. Анализ фармакологических средств на модели апоптоза лимфоцитов человека in vitro в норме и при иммунопатологии // Аллегрология и иммунология. - 2000. - Т.1, №2. - С.24-30.]. Універсальним явищем, пов'язаним з розвитком та функціонуванням імунної системи, є апоптоз, порушення якого призводить до розвитку різноманітних патологічних процесів, таких як імунодефіцит, СНЗД, рак, лімфопроліферативні, нейродегенеративні та автоімунні захворювання [Ярилин А. А. Апоптоз: природа феномена и его роль в норме и при патологии // Актуальные проблемы патофизиологии. Под ред. Б. Б. Мороза. - М.: Медицина, 2001.-С. 13-56.]. Відомі способи корекції функціонального стану лімфоїдних клітин за допомогою специфічної імунотерапії [Порядин Г.В., Салмаси Ж.М., Макаров А.И. Апоптоз лимфоцитов - один из механизмов специфической иммунотерапии атопических заболеваний // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -1998.-Т.125.-№4. - С.434-436], пептидів лімфоідної тканини [Тяготин Ю. В., Рыбакова Л. П., Тутова И.Ю., Гончарова СВ., Куликова И.Н. // Иммунология. - 1999. - №3. - С.36-38], тканинних пептидів тимусу та нирок [Пат. 48797А Україна, МКВ7 А61К38/00. Спосіб корекції функціонального стану лімфоцитів периферійної крові / Кайдашев І.П., Ножинова О.А., Рябенко В.В.]. Найбільш близьким до запропонованого за функціональним призначенням та технічним результатом є спосіб корекції апоптозу тимоцитів, шляхом використання пептидних комплексів з широким спектром біологічної дії- який прийнято за прототип [Пат. UA №62121 А, МКВ7 А61К38/00 опубл. Бюл. №12, 2003]. Відомий спосіб включає вплив фармакологічних речовин та морфологічну оцінку їх дії, в якому як джерело лімфоїдних клітин брали тимоцити свиней, а як фармакологічну речовину використовували тканинні пептиди з високою біологічною активністю, вплив яких триває 24год., а додаткову оцінку апоптозу здійснювали шляхом визначення р53 та bcl-2. Спосіб здійснюється наступним чином. Готували суспензії тимоцитів з тимусу свиней породи Полтавська біла. Суспензію культивували в середовищі RPMI-1640 з додаванням 10% телячої сироватки та антибіотику гентаміцину в центрифужних пробірках при 37°С у вологій атмосфері з 5% СОг- У першій серії дослідів вивчали протікання процесів апоптозу у інтактних тимоцитів в середовищі культивування. У другій та третій серії пептидний комплекс тимусу - тималін та пептидний комплекс нирок вносили у суспензії клітин. В четвертій серії дослідження апоптозу тимоцитів в умовах модуляції внутрішньоклітинних регуляторних систем, проводили шляхом обробки клітин з допомогою фармакологічних речовин відповідно: О) 10797 ни. Далі відбирали плазму в пробірки, клітини осадексаметазону, кальцієвого іонофору, форболоводжували центрифугуванням при 1500об/хв протяго ефіру, ЕДТА, ВАРТА та теофіліну. На оброблені гом 5 хвилин із наступною відмивкою клітини діяли тималіном або пептидним комплекфізіологічним розчином та подальшим ресуспенсом нирок та інкубували 24 години. Комплексну дуванням. Суспензії тимоцитів, спленоцитів та оцінку процесів апоптозу здійснювали морфологілімфоцитів готували за стандартними методикачним, молекулярно-біологічним та біохімічним меми. Загальну кількість клітин у суспензії підраховутодами. вали в камері Горяєва. Життєздатність клітин виЗагальними ознаками корисної моделі, що зазначали в тесті з трипановим синім. являється, і прототипу є: 1. вплив фармакологічних речовин; З метою оцінки функціонального стану лімфо2. оцінку дії фармакологічних речовин на апоїдних клітин визначали експресію апоптотичних птоз. маркерів за допомогою анексину V міченого FITC (виробництва Caltag, США), а також за допомогою Недоліком відомого способу є: флюорисцентного барвника пропідіума йодида 1. корекція апоптозу здійснюється in vitro, що (двохкольорове забарвлення) методом проточної не дає змогу проводити інтерпретацію результатів лазерної цитофлюорометрії (ПЛЦ). стосовно цілісного організму; 2. проводиться корекція апоптозу лише однієї Оцінка кінцевих стадій апоптозу (гіперхромлімфоїдної субпопуляції (тимоцитів); ність ядер, конденсацію й фрагментацію хромати3. використовуються препарати, які є сумішшю ну) включала морфологічний метод - забарвлення фізіологічноактивних речовин і не мають чіткої цитоцентрифужних препаратів за Майфармакологічної спрямованості, що ускладнює їх Грюнвальдом-Романовським-Гімзою (МГРГ). Підцілеспрямоване використання. рахунок клітин проводили за допомогою бінокулярного мікроскопу „Биолам Р11", (Ломо, Росія). В основу корисної моделі поставлено завданКомплексна оцінка апоптозу включала відсотковий ня створити такий спосіб корекції функціонального вміст клітин, що знаходяться в стадії апоптозу. стану лімфоїдних клітин шляхом удосконалення Статистичну оцінку отриманих результатів експевідомого, який дозволяє здійснювати корекцію рименту проводили за допомогою програми функціонального стану всіх субпопуляцій лімфоїд"STATISTICA", використовуючи непараметричні них клітин в умовах in vivo, використовуючи антигіметоди статистичних пакетів. стамінні препарати з метою модуляції функціонування імунної системи людини. Перевагами способу, що заявляється, є: Ця задача вирішується наступним чином: 1. корекція функціонального стану лімфоїдних У способі корекції функціонального стану лімклітин здійснюється in vivo, що дає змогу проводифоїдних клітин, що включає вплив фармакологічти інтерпретацію результатів стосовно цілісного них речовин та оцінку їх дії на апоптоз, згідно коорганізму; рисної моделі, в якості фармакологічних речовин 2. проводиться корекція функціонального ставикористовують антигістамінні препарати, наприну всіх субпопуляцій лімфоїдних клітин (тимоцитів, клад, фамотидін. спленоцитів, лімфоцитів та мононуклеарів периферійної крові); Відрізняльною ознакою є те, що в якості фармакологічних речовин використовують антигіста3. використовуються фармакологічні препарамінні препарати, наприклад, фамотидін. ти з чіткою фармакологічною спрямованістю. Результати досліджень показали, що лімфоїдСпосіб пояснюється конкретним прикладом ним клітинам інтактних тварин властивий базальйого здійснення. ний рівень апоптозу, який може бути пов'язаний з Експериментальні дослідження були проведефізіологічною загибеллю клітин. ні на самцях щурів лінії Вістар. Корекцію функціонального стану лімфоїдних клітин здійснювали Вивчення дії антагоністів гістамінових рецепшляхом перорального введення фармакологічної торів шляхом застосування Н2-блокатора фаморечовини - антагоніста Н2-гістамінових рецепторів тидіна в мінімальній, середній та максимальній фамотидіну («Фамотидин», КМП, Україна) щурам в дозах показало, що препарат призводив до достодозах 0,06мг/кг, 0,6мг/кг та бмг/кг маси тіла на провірної зміни функціонального стану лімфоїдних тязі 10 діб з інтервалом 24 години. Контрольну клітин шляхом індукції апоптозу у всіх клітинних групу складали інтактні щури. субпопуляціях. Як показано на діаграмі, найбільш чутливими виявилися мононуклеари периферійної У експериментальних тварин після забою під крові. Фамотидін не лише викликав індукцію апоптіопенталовим наркозом забирали тимус, селезінтозу, але і прискорював процес програмованої ку, периферичні лімфатичні вузли та кров з правозагибелі клітин. Процес індукції виявився дозозаго шлуночка серця з подальшим отриманням сулежним: з підвищенням дози препарату зростав спензії клітин. Суспензію мононуклеарів відсоток клітин, задіяних в апоптозі. периферійної крові отримували шляхом інкубації гепаринізованої крові при 37° С протягом 1,5 годи 5 10797 6 Фамотидін-індукований апоптоз лімфоїдних клітин «9 О. I CJ ^ *>К 20 15 Примітка: * - вірогідність відмін при порівнянні з апоптозом в інтактній групі, р