Спосіб визначення стадії лейкозного процесу у великої рогатої худоби

Спосіб визначення стадії лейкозного процесу у великої рогатої худоби, який базується на аналізі стану імунокомпетентної системи досліджуваних тварин шляхом біохімічних досліджень крові, який відрізняється тим, що в сироватці крові досліджуваних тварин визначають рівень імуноглобулінів IgGi, lgG 2 та IgM і за аналізом одержаних пока СО о со О) 11303 висока вартість реактивів, необхідних для його здійснення. Заявлений нами спосіб усуває недоліки прототипу і забезпечує ефективне визначення інтенсивності і характеру імунної відповіді організму у здорової, інфікованої і хворої лейкозом великої рогатої худоби на різних стадіях лейкозного процесу. При цьому встановлено, що ймовірність виявлення даних змін при дослідженні сироватки крові коливається в межах 78-85%. В основу корисної моделі покладено завдання розробити новий, об'єктивний, високочутливий спосіб визначення стадії лейкозного процесу у великої рогатої худоби, зручний у застосуванні, економічно вигідний для господарства, в якому використовується. Технічний результат досягають тим, що в сироватці крові досліджуваних тварин визначають рівень імуноглобулінів IgGi, lgG2 та IgM і за аналізом одержаних показників судять про стадію лейкозного процесу, при цьому вважають, що: - тварини, в сироватці крові яких рівень імуноглобулінів становить (в мг/мл) - IgGi - 9,7-9,9; lgG2 - 11,17-11,37 та IgM - 2,2-2,4 - перебувають в передлейкозній стадії лейкозного процесу; - тварини, в сироватці крові яких рівень імуноглобулінів становить (в мг/мл): IgGi - 7,96-8,0; lgG2 - 10,6-10,76 та IgM - 2,1-2,24 - перебувають в ранній стадії лейкозного процесу; - тварини, в сироватці крові яких рівень імуноглобулінів становить (в мг/мл): IgGi - 6,9-6,96; lgG2 - 8,3-8,38 та IgM - 1,6-1,66 - перебувають в активній стадії лейкозного процесу. Імунна система організму являє собою унікальний приклад синтезу численних ізотопів імуноглобулінів, які виконують визначені функції. Антитіла, утворені в результаті дії антигенів, відносяться до окремих ізотопів імуноглобулінів. У великої рогатої худоби встановлено 3 основних класи імуноглобулінів: IgG, IgA, IgM. Із загальної кількості всіх імуноглобулінів у сироватці крові більш як 70% припадає на білки класу G. У великої рогатої худоби ідентифіковано у сироватці крові і секретах молочної залози 2 підкласи IgGi і lgG2, які відрізняються за електрофоретичною рухливістю та біологічними функціями в організмі. Вірус лейкозу великої рогатої худоби інтегрується в геном В-лейкоцитів, які є попередниками плазматичних клітин, синтезуючих і секретуючих імуноглобуліни. Між кількістю імуноглобулінів в сироватці крові і розвитком лейкозного процесу на різних його стадіях є пряма залежність. Тому кількісна оцінка рівня імуноглобулінів на різних етапах розвитку лейкозного процесу дає можливість встановити ступінь порушення функції імунної системи. При проведенні патентно-інформаційного пошуку заявником знайдено технічне рішення, що містить найбільшу кількість ознак, спільних із заявленим способом [Патент України №61538 А], а саме: спосіб базується на аналізі стану імунокомпетентної системи досліджуваних тварин шляхом біохімічних досліджень крові. Але наявність згаданих, спільних з прототипом, ознак недостатня для одержання технічного результату, який забезпечує заявлений спосіб. Технічних рішень, які б за сукупністю ознак повністю співпадали б із заявленим - не виявлено. Це дозволяє зробити висновок про відповідність заявленого технічного рішення критерію винаходу (корисної моделі) "новизна". У патентній і науково-технічній інформації не знайдено технічних рішень, в яких були б описані відомості про ознаки, що відрізняють заявлений спосіб від прототипу і забезпечують досягнення технічного результату: в сироватці крові досліджуваних тварин визначають рівень імуноглобулінів IgGi, lgG2 та IgM і за аналізом одержаних показників судять про стадію лейкозного процесу, при цьому вважають, що: - тварини, в сироватці крові яких рівень імуноглобулінів становить (в мг/мл): IgGi - 9,7-9,9; lgG2 11,17-11,37 та IgM - 2,2-2,4 - перебувають в передлейкозній стадії лейкозного процесу; - тварини, в сироватці крові яких рівень імуноглобулінів становить (в мг/мл): IgGi - 7,96-8,0; lgG2 - 10,6-10,76 та IgM - 2,1-2,24 - перебувають в ранній стадії лейкозного процесу; - тварини, в сироватці крові яких рівень імуноглобулінів становить (в мг/мл): IgGi - 6,9-6,96; lgG2 - 8,3-8,38 та IgM - 1,6-1,66 - перебувають в активній стадії лейкозного процесу. Отже заявлене технічне рішення не випливає явним чином з рівня техніки, що дозволяє зробити висновок про відповідність його критерію винаходу (корисної моделі) "винахідницький рівень". Заявлена корисна модель відноситься до галузі ветеринарної медицини, зокрема епізоотології, а саме до способів визначення стадій лейкозного процесу у великої рогатої худоби. Спосіб може бути застосований ветеринарними спеціалістами в тваринницьких господарствах з різними формами власності для своєчасного визначення напрямку перебігу лейкозного процесу у великої рогатої худоби і прийняття відповідних заходів стосовно епізоотичної ситуації у господарстві, а тому відповідає критерію винаходу (корисної моделі) "промислова придатність". Таким чином, заявлене технічне рішення є новим, промислово придатним, має винахідницький рівень, тобто відповідає всім умовам патентоспроможності винаходу (корисної моделі) відповідно до розділу II, ст.7 Закону України "Про охорону прав на винаходи і корисні моделі" №1771-111, 2000р. В господарстві, в молочному стаді якого є підозрілі на лейкоз тварини, для встановлення ступеня порушення функції імунної системи заявлений спосіб здійснюють наступним чином: 1. Відбирають проби крові для дослідження. 2. Визначають кількісні показники імуноглобулінів в сироватці крові. 3. Аналізують одержані результати і встановлюють ступінь порушення функції імунної системи. При цьому стан тварин, в пробах сироватки крові яких виявлено кількість IgGi - 9,7-9,9мг/мл; lgG 2 - 11,17-11,37мг/мл та IgM - 2,2-2,4мг/мл вважають передлейкозним; IgGi - 7,96-8,0мг/мл; lgG2 10,6-10,76мг/мл та IgM - 2,1-2,24мг/мл вважають ранньою стадією захворювання; а стан тварин, в пробах сироватки крові яких кількість IgGi - 6,96,96мг/мл; lgG2 - 8,3-8,38мг/мл та IgM - 1,6 11303 1,66мг/мл вважають станом активної стадії лейкозу Ефективність заявленого способу, його переваги перед прототипом підтверджено прикладом конкретного виконання способу Дослідження проводились протягом 2000-2004 років в Інституті патологи крові та трансфузійної медицини Академії медичних наук України (м Львів) І В ЛЬВІВСЬКІЙ національній академії ветеринарної медицини імені С 3 Гжицького В неблагополучних щодо лейкозу господарствах "Тарасівка", "Поділля" І "Славутич" Збаразького району Тернопільської області Були проведені дослідження на 75 КЛІНІЧНО здорових і хворих лейкозом коровах чорно-рябої породи, віком 5-10 років Для дослідження брали кров з яремної вени, одержували сироватку, в якій проводили кількісне визначення імуноглобулінів методом радіальної імунодифузи в гелі В основі цього методу - метод Манчіні, який полягає у вимірюванні кільця преципітації, утворюваного при внесенні досліджуваної сироватки в лунки, вирізані в шарі агару, в який попередньо диспергувалась моноспецифічна антисироватка Було сформовано п'ять дослідних груп за результатами гематологічних досліджень Перша група - здорові тварини - КІЛЬКІСНІ показники крові коливались в межах фізіологічної норми (еритроцити - 7,04млн /мкл, гемоглобін - 9,63г%, лейкоци ти - 7,81 тис /мкл) друга група - інфіковані тварини - РІД-позитивно реагуючі, у яких КІЛЬКІСНІ показники крові були в межах фізіологічної норми Третя група - передлейкозна стадія - тварини цієї групи характеризувались лімфоцитозом - 9,58тис/мкл, КІЛЬКІСТЬ лейкоцитів коливалась від норми до 1215тис /мкл По цих показниках тварини згідно "лейкозного ключа" кваліфікувались як підозрілі в захворюванні лейкозом Еритроцити - 5,82млн /мкл, гемоглобін - 9,55г% четверта група - рання стадія лейкозу - до цієї групи відбирались тварини, які характеризувались сублейкемічним рівнем лейкоцитозу в крові КІЛЬКІСТЬ лейкоцитів - 29,06тис /мкл, лімфоцитів - 27,02тис/мкл, еритроцитів 4,92млн /мкл, гемоглобіну - 8,91 г% П'ята група активна стадія лейкозу - цю групу формували тварини, у яких виявили низькі показники еритроцитів - 4,80млн /мкл і гемоглобіну - 6,89г%, що відображає анемію КІЛЬКІСТЬ лейкоцитів - 97,56тис/мкл, лімфоцитів - 94,5тис /мкл Результати досліджень показують, що КІЛЬКІСТЬ імуноглобулінів в сироватці крові у інфікованих корів (РІД-позитивно реагуючі) незначно відрізняється від їх КІЛЬКОСТІ у здорових тварин (таблиця 1) В той час, зниження КІЛЬКОСТІ імуноглобулінів проходить паралельно з прогресуванням лейкозного процесу і розвитком постійного лімфоцитозу Таблиця 1 КІЛЬКІСНІ ЗМІНИ імуноглобулінів сироватки крові великої рогатої худоби при лейкозі (мг/мл), М±т, п=15 Імуноглобуліни IgGi lgG 2 IqM Здорові 10,7±2,3 14,08±1,7 2,52±0,38 Тварини Інфіковані 10,5±1,5* 13,43±2,74* 2,49±0,47* Стадії лейкозного процесу Передлейкозна Рання 9,8±1,1* 7,98±0,97 11,27±1,8* 10,68±2,5* 2,30±0,28* 2,17±0,33* Активна 6,93+1,2* 8,34±1,9*** 1,63+0,23** Примітка достовірність різниць з контрольною групою. *-3>0,1, ** - Р>0,05, *** - Р Q05 Так, у хворих тварин в активній стадії розвитку хвороби з високими гематологічними показниками КІЛЬКІСТЬ імуноглобулінів була значно понижена порівняно з здоровими тваринами Вміст lgG 2 в сироватці крові у цієї групи тварин знизився в середньому до 8,34мг/мл, IgGi - до 6,93мг/мл і ІдМ до 1,63мг/мл Одержані нами результати досліджень свідчать, що між КІЛЬКІСТЮ імуноглобулінів в сироватці крові і перебігом лейкозного процесу на різних його стадіях існує прямий зв'язок КІЛЬКІСТЬ імуноглобулінів в сироватці крові знижується у хворих тварин на 35-41 % порівняно з їх КІЛЬКІСТЮ у здороКомп ютерна верстка Л Литвиненко вих тварин Таким чином, при прогресуванні лейкозного процесу загальна КІЛЬКІСТЬ імуноглобулінів і їх окремих ІЗОТИПІВ, особливо lgG2, в сироватці крові хворих лейкозом тварин знижується В активній стадії захворювання КІЛЬКІСТЬ IgGi, lgG2, IgM знижується, ВІДПОВІДНО, на 35,2%, 40,8% і 35,3% порівняно з їх рівнем в сироватці крові здорових тварин, зміни синтезу, структури і функції імуноглобулінів при лейкозі великої рогатої худоби носять системний характер і залежать від перебігу хвороби Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул Урицького 45, м Київ, МСП, 03680, Україна ДП "Український інститут промислової власності" вул Глазунова 1,м Київ-42, 01601