Спосіб серологічної діагностики лейкозу великої рогатої худоби

Спосіб серологічної діагностики лейкозу великої рогатої худоби, що включає виявлення специфічних антитіл проти вірусу лейкозу великої рогатої худоби за допомогою реакції імунодифузм (РІД) в гелі агару, який відрізняється тим, що до 1мл сироватки крові, що досліджується, вносять як компонент-підсилювач 0,1 мл стандартної з титром антитіл 1 6 сироватки крові, одержаної від імунізованих або інфікованих вірусом лейкозу корів, і при підвищенні концентрації антитіл в досліджуваній сироватці в 1,6 рази діагностують лейкоз великої рогатої худоби О Винахід відноситься до ветеринарної медицини, зокрема до серологічних методів діагностики лейкозу великої рогатої худоби Реакція імунодифузм (РІД) в гелі агару - реакція, яка у ВІДПОВІДНОСТІ з ГОСТ 25382-82 використовується для серологічної діагностики лейкозу великої рогатої худоби (ВРХ) В основі реакції лежить виявлення в сироватці крові тварин преципітуючих антитіл проти антигенів вірусу лейкозу (ВЛ) ВРХ Для постановки цієї реакції використовують стандартний набір реагентів (специфічний антиген, розріджувач антигену, контрольна сироватка крові з відомим до даної серії антигену титром антитіл проти ВЛ, сольова суміш агару, розріджувач сольової суміші агару) Спочатку в чашки Петрі розливають розплавлений 0,8% розчин агару, який при застиганні утворює прозору поверхню товщиною 2-Змм При допомозі спеціального штампу в поверхні застиглого агару роблять лунки, в які в подальшому вносять компоненти реакції в ПОСЛІДОВНОСТІ представленій на схемі в центральну лунку вносять антиген (А), в дві діаметрально розміщені сироватки - контрольні сироватки (КС), решту лунок заповнюють досліджуваними сироватками (ДС) Схема постановки реакції імунодифузії ю ю Чашки Петрі закривають кришками і шкубують при температурі +18 - +27°С в термостаті Облік результатів реакції проводять через 48 - 72 години по наявності або відсутності лінії преципітації в гелі між лунками з А і ДС Наявність чіткої лінії преципітації в гелі між лунками з А і КС виступає як контроль правильності виконання всіх елементів постановки РІД 59454 Існуючий спосіб діагностики лейкозу в РІД має низький рівень (поріг) чутливості, що не дозволяє виявити наявність антитілу всіх сироватках крові інфікованих вірусом лейкозу тварин В зв'язку з цим в неблагополучному стаді постійно залишаються заражені ретровірусом тварини, які обумовлюють довготривалість епізоотичного процесу Для усунення цього недоліку РІД в основу винаходу поставлена задача підвищити чутливість діагностичного тесту Суть винаходу полягає в тому що у способі діагностики лейкозу великої рогатої худоби, в якому для серологічної діагностики лейкозу великої рогатої худоби (ВРХ) застосовують реакцію імунодифузм (РІД) в гелі агару, згідно винаходу, до 1мл досліджуваної сироватки крові вносять 0,1 мл компонента-підсилювача, в якості якого використовують стандартизовану з титром антитіл 1 6 сироватку крові, одержану від імунізованих або інфікованих ВЛ корів, що дає можливість виявляти більшу КІЛЬКІСТЬ інфікованих тварин порівняно з прототипом Додавання до досліджуваної сироватки крові компонента-підсилювача у співвідношенні 1 10 (1 об'єм компонента-підсилювача і 10 об'ємів досліджуваної сироватки) підвищує концентрацію антитіл в 1,6 рази що, дозволяє на таку ж величину посилити результативність (чутливість) РІД Тому при наявності в досліджуваній сироватці крові низької концентрації антитіл проти ВЛ великої рогатої худоби, яку неможливо виявити стандартним способом РІД, внесення компонентапідсилювача підвищує концентрацію антитіл на Комп'ютерна верстка В Рябиця 60%, що достатньо для виявлення тварин у яких розвиток лейкозного процесу знаходиться на початковій стадії, а в сироватці крові концентрація антитіл мінімальна Контроль на відсутність реакції антигену з підсилювачем, розбавленим фізіологічним розчином 110 теж ставлять саме для того, щоб переконатися, що при змішуванні досліджуваної сироватки і підсилювача в реакцію вступають сумарні антитіла проти ВЛ ВРХ досліджуваної сироватки і підсилювача, а не тільки підсилювача Постановку РІД при запропонованому способі виконують таким чином в пробірки з компонентом підсилювачем добавляють досліджувану сироватку у співвідношенні 1 10 і після ретельного перемішування інкубують при кімнатній температурі не менше 1 години За цей час при допомозі спеціального штампу в поверхні застиглого в чашці Петрі 0,8% розчину агару роблять лунки, у які в подальшому вносять компоненти реакції в центральну лунку вносять антиген (А), в дві діаметрально розміщені - контрольну сироватку (КС) решту лунок заповнюють досліджуваними сироватками (ДС), змішаними з компонентом-підсилювачем Чашки Петрі закривають кришками і інкубують при температурі +18 - +27°С в термостаті Облік результатів реакції проводять через 48 - 72 години по наявності або відсутності лінії преципітації в гелі між лунками з А і ДС Наявність чіткої лінії преципітації в гелі між лунками з А і КС і и відсутність між лунками А і КП виступає як контроль правильності виконання всіх елементів постановки РІД Підписано до друку 06 10 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна