Спосіб отримання асептичної культури експлантатів betula pendula roth. in vitro

Реферат: Спосіб отримання асептичної культури експлантатів Betula pendula Roth in vitro, до складу якої входять фрагменти пагонів, відібраних з насаджень природного походження, дезінфікуючі розчини, проточна Н2О та стерильна dH2O. Пагони з брунькою Betula pendula Roth., довжиною 2,5-5,0 см стерилізують у мильному розчині 15 хв., потім відмивають у проточній воді 10 хв. та переносять у стерильну dH2O, після чого поетапно здійснюють стерилізацію у розчинах: 70 % С2Н5ОН впродовж 30 сек., 25 % Н2О2 впродовж 10 хв. та відмивають у стерильній dH 2O впродовж 15 хв., після чого експлантати розділяють на фрагменти стебел, завдовжки 1,0-2,0 см з однією брунькою. UA 115873 U (12) UA 115873 U UA 115873 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Корисна модель належить до галузі сільського господарства, зокрема до садово-паркового господарства. Відомим аналогом способу розмноження є "Влияние состава гормонов в среде прекультивирования на регенерацию в каллусных культурах березы повислой (Betula pendula Roth.)" /A.B. Константинов. Modern Phytomorphology 4, 2013. P. 241-244. http://phvtomorphology.org/PDF/MP4/04241244.pdf, який складається з відбору пагонів з трьох плюсових дерев віком 50 років та пророщування пагонів зимуючих бруньок в лабораторних умовах, потім відмивання пророщених пагонів у розчинах: 1) 30 хв. у розчині "Domestos" ("Unilever", Великобританія, концентрація 0,01 % та "AOS" ("Невис косметике", Росія, концентрація 0,005 %); 2) 30 хв. у 0,005 % розчині "AOS". Після експлантати витримували протягом 3 хв. у 10 % розчині перекису водню (Η2O2) і промивали у проточній воді. Наступна стерилізація проводилась в умовах ламінарного боксу шляхом витримування 30-40 сек. у розчині 70 % етанолу, потім трихвилинна обробка 0,1 % розчином сулеми (HgCl2) з наступним триразовим відмиванням у стерильній dH2O. Недоліком відомого аналога є те, що спосіб отримання асептичної культури переобтяжений кількістю використовуваних розчинів для отримання стерильних експлантатів, що значно ускладнюють процес отримання асептичної культури, що добре росте. Також у способі використовуються стерилізуючий розчин HgCl2, який є більш токсичним для молодих рослинних тканин та самого дослідника. Запропоновано спосіб, згідно з яким використовують розчин Н2О2, як основний стерилянт, що є простим у використанні, менш шкідливим для дослідника та молодих тканин рослини. Забезпечує високий відсоток виходу стерильних експлантатів за короткий час та не потребує тривалого відмивання у стерильній dH2O, що значно спрощує підготовчий процес. Спосіб отримання асептичної культури експлантатів Betula pendula Roth, передбачає використання як рослин фрагменти пагонів Betula pendula Roth., без морфологічних та фізіологічних відхилень, відібрані з високопродуктивних насаджень берези повислої віком 45-65 років. Як первинні експлантати використовували фрагменти пагонів з бруньками довжиною 2,55,0 см. Для ефективного знешкодження екзогенної та ендогенної мікрофлори експлантати стерилізували в лабораторних умовах у два етапи: І в нестерильних умовах та II - в умовах ламінарного боксу. На І - етапі пагони витримують у мильному розчині 15 хв., інтенсивно помішуючи. Після відмивають у проточній воді протягом 10 хв. та переносять у посудину із стерильною dH 2O. На II - етапі усі маніпуляції проводять у стерильному ламінарному боксі із стерильними розчинами та інструментами. У запропонованому способі стерилізації використовують стерилянти у такій послідовності: 70 %-вий розчин етанолу (С2Н5ОН) - 30 с, 25 % розчин Н2О2-10 хв та одноразово відмивають у стерильній dH2O-15 хв., після цього фрагменти пагонів переносять на чашку Петрі з фільтрувальним папером. Спосіб отримання асептичної культури Betula pendula Roth., в умовах in vitro, до складу якого входить асептична культура експлантатів пагонів з брунькою завдовжки 2,5-5,0 см, взятих із високопродуктивних насаджень берези повислої віком 45-65 років, мильний розчин, 25 % розчин Н2О2 та стерильна dH2O. Пагони довжиною 2,5-5,0 см поетапно стерилізують у розчинах детергенту 15 хв., здійснюють: відмивання в проточній воді 10 хв., перенесення у стерильну dH2O, після - у розчин С2Н5ОН 70 % (30 с)., Н2О2 25 % (10 хв.) відмивання у стерильній dH2O 15 хв, після цього експлантати розділяють на стеблові фрагменти з однією брунькою завдовжки 1,0-2,0 см. Таким чином використання запропонованого способу отримання асептичної культури експлантатів Betula pendula Roth. забезпечує вихід 95 % асептичних регенераційно-здатних експлантатів з мінімальною шкодою для рослинних тканин, що дозволяє широко використовувати його у системі прискореного виробництва значної кількості оздоровленого, високоякісного, генетично-однорідного садивного матеріалу для потреб лісового і садовопаркового господарства. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 55 60 Спосіб отримання асептичної культури експлантатів Betula pendula Roth in vitro, до складу якої входять фрагменти пагонів, відібраних з насаджень природного походження, дезінфікуючі розчини, проточна Н2О та стерильна dH2O, який відрізняється тим, що пагони з брунькою Betula pendula Roth., довжиною 2,5-5,0 см, стерилізують у мильному розчині 15 хв., потім відмивають у проточній воді 10 хв. та переносять у стерильну dH 2O, після чого поетапно 1 UA 115873 U здійснюють стерилізацію у розчинах: 70 % С2Н5ОН впродовж 30 сек., 25 % Н2О2 впродовж 10 хв. та відмивають у стерильній dH2O впродовж 15 хв., після чого експлантати розділяють на фрагменти стебел, завдовжки 1,0-2,0 см з однією брунькою. Комп’ютерна верстка Л. Бурлак Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2