Спосіб отримання асептичної культури ribes nigrum l. в умовах in vitro

Реферат: Спосіб отримання асептичної культури Ribes nigrum L. в умовах in vitro, до складу якого входить асептична культура експлантів однорічних пагонів смородини з верхівковими та бічними бруньками, взятих із крони куща, мильний розчин, 0,1 % розчин HgCl2 та стерильна dH2O. Пагони довжиною 1,5-3,0 см поетапно стерилізують у розчинах детергенту 15 хв., здійснюють: відмивання в проточній воді 20 хв., перенесення у стерильну dH2O, після - у розчин С2Н5ОН 70 % (30 с)., HgCl2-0,1 % (15 хв.) відмивання у стерильній dH2O тричі по 10 хв., при цьому, експлантати розділяють на фрагменти стебел завдовжки 1,0-1,5 см з 1 брунькою. UA 96327 U (54) СПОСІБ ОТРИМАННЯ АСЕПТИЧНОЇ КУЛЬТУРИ RIBES NIGRUM L. В УМОВАХ IN VITRO UA 96327 U UA 96327 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Корисна модель належить до галузі сільського господарства, зокрема рослинництва. Відомим аналогом способу розмноження Ribes nigrum L. є (Оразбаева Г. К. Клональное размножение растений черной смородины (Ribes nigrum L.) in vitro I Г. К. Оразбаева, В. Т. Хасанов, А. Р. Исаков, В. К. Швидченко // Вестник науки КазАТУ им. С. Сейфуллина, 2012. - № 1), який складається з відбору рослин-донорів однорічних пагонів чорної смородини сортів "Голубка", "Алтайская десертная" довжиною 15-20 см, які відбирають із крони куща, поміщають у посудину з водою і витримують при кімнатних умовах, до отримання зеленого конусу. Після отримання останнього пагони нарізають на фрагменти з однією брунькою і стерилізують у два способи. У першому використовують розчини: 0,1 % сулеми (5 хв.) у поєднанні з 0,1 % топазом (10-30 хв.), після переносять у миючий засіб "Доместос" у співвідношенні 1:5 (20 хв.). У другому використовують розчини: проточної води з господарським милом, 3 % хлораміні (5 хв.), стерильної dH2O, 0,025 % мертіолят Na у поєднанні з білизною (10 хв.), триразове відмивання у стерильній dH2O (10 хв.). Такий спосіб стерилізації забезпечує отримання біля 100 % стерильних експлантів. Недоліком відомого способу є те, що використанням декількох розчинів стерилянтів одночасно: 0,1 сулеми, 0,1 топазу, 1:5 "Domestos", 3 % хлорамін, 0,025 % мертиоляту Na та білизни, що занадто переобтяжує процес отримання асептичної культури смородини. Також відомим способом не передбачено використання розчинів стерилянтів як: 70 %-ий етанол С2Н5ОН та 15 хв. експозицію у 0,1 %-вому HgCl2, що також забезпечує високий відсоток виходу стерильних експлантів. Не враховано проведення стерилізації з пагонами, які не треба штучно пророщувати, що значно скорочує час проведення підготовчих робіт. Спосіб отримання асептичної культури Ribes nigrum L. в умовах in vitro передбачає використання як рослин-донорів сортів смородини. Як первинні експлантати використовують нерозкриті та розкриті бруньки, І частини пагонів з пазушними та апікальними бруньками довжиною 1,5-3,0 см. Спосіб проводимо наступним чином. Для ефективного знешкодження екзогенної та ендогенної мікрофлори відібрані мікропагони маточних рослин поетапно стерилізують спочатку в нестерильних умовах, а потім у стерильних умовах ламінарного боксу. Спершу експланти витримують у мильному розчині 15 хв. з інтенсивним помішуванням, після промивають під проточною водою - 20 хв., переносять у стерильну dH2O; в умовах ламінарного боксу стерилянта використовують у такій послідовності: 70 %-вий розчин етанолу (С2Н5ОН) -30 с, 0,1 %-вий розчин HgCl2 (15 хв.) помішуючи, триразове відмивання у стерильній dH2O (10 хв.) інтенсивно помішуючи. Після стерилізації частини пагонів 1,5-3,0 см розрізають на фрагменти стебел з 1 брунькою завдовжки 1,0-1,5 см. За умов використання такого способу отримуємо 100 % асептичних регенераційно-здатних експлантів, що дозволить широко використовувати його у системі прискореного виробництва значної кількість оздоровленого, високоякісного, генетично-однорідного садивного матеріалу плодово-ягідних культур. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Спосіб отримання асептичної культури Ribes nigrum L. в умовах in vitro, до складу якого входить асептична культура експлантів однорічних пагонів смородини з верхівковими та бічними бруньками, взятих із крони куща, мильний розчин, 0,1 % розчин HgCl2 та стерильна dH2O, який відрізняється тим, що пагони довжиною 1,5-3,0 см поетапно стерилізують у розчинах детергенту 15 хв., здійснюють: відмивання в проточній воді 20 хв., перенесення у стерильну dH2O, після - у розчин С2Н5ОН - 70 % (30 с)., HgCl2-0,1 % (15 хв.) відмивання у стерильній dH2O тричі по 10 хв., при цьому експлантати розділяють на фрагменти стебел завдовжки 1,0-1,5 см з 1 брунькою. 50 Комп’ютерна верстка І. Скворцова Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 1