Спосіб отримання асептичної культури штучно пробуджених пагонів багатовікового дерева tilia cordatа mill. “липи т.г. шевченка” in vitro

Реферат: Спосіб отримання асептичної культури штучно пробуджених пагонів багатовікового дерева Tilia cordata Mill. "Липи Т.Г. Шевченка" in vitro, який виконують в два етапи стерилізації сегментів пагонів Tilia cordata Mill.: в нестерильних умовах мильним розчином та в проточній воді, а в умовах ламінарного боксу у розчині С2Н5ОН та стерильній dH2O. Після стерилізації в нестерильних умовах, штучно пробуджені сегменти пагонів Tilia cordata Mill, довжиною 1,5-3,0 см з багатовікового дерева, віком до тисячі років, в умовах ламінарного боксу додатково стерилізують у 25 %-вому розчині H2O2 впродовж 8 хвилин з одноразовим відмиванням у стерильній dH2O впродовж 5 хвилин, після чого експлантати розділяють на фрагменти стебел завдовжки 1,0-1,5 см з однією брунькою. UA 115871 U (12) UA 115871 U UA 115871 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Корисна модель належить до галузі сільського господарства, зокрема до садово-паркового господарства. Відомим аналогом способу розмноження Тіlіа cordata Mill, є "Особливості введення в культуру in vitro липи серцелистої Тіlіа cordata Mill." / Н.О. Олексійченко, А.А. Клюваденко, О.Ю. Чорнобров, М.О. Остапчук. - Електронний вісник НУБіП України. - 2010. - Вип. 152,. (http://www.nbuv.gov.ua/old Jrn/Chem_Biol/nvnau_lds/2010_152_2/10ono.pdf), який складається з відбору пагонів здерев'янілих чи зелених довжиною 15-17 см рослин-донорів віком 40-45 років. Стерилізацію проводили у два етапи: в нестерильних умовах та в умовах ламінарного боксу. Спочатку первинні пагони нарізають на сегменти пагонів довжиною 4-5 см. Занурювали у мильний розчин 15-60 хв, потім у проточну воду 15-30 хв, після цього опускали у розчин KMnO4 на 15-30 хв і промивали у dH2O. Наступні маніпуляції проводили в умовах ламінарного боксу де експлантати витримували у спиртовому розчині (С 2Н5ОН) 70-96 % концентрації з тривалістю до 1 хв. Після цього занурювали у розчини: 1) NaCLO 2,5 %, 5,0 2) AgNO3 0,1 %, та 0,5 %; після кожного стерилянту експлантати промивали тричі по 10 хв у стерильній dH2O. Комплекс таких етапів стерилізації забезпечує ефективність стерилізації 50-60 %. У відомому способі не передбачено використання як стерилянту розчину Η2O2, що є простим у використанні, менш токсичним для молодих рослинних тканин та дослідника, забезпечує високий відсоток виходу стерильних експлантатів за короткий час та не потребує тривалого відмивання у стерильній dH2O. Запропоновано спосіб, згідно з яким отримують асептичні, життєздатні експлантати багатовікового дерева "Липи Т.Г. Шевченка", якому притаманний значний вік (до тисячі років) та ураженістю рослинних тканин шкідниками та хворобами. Спосіб отримання асептичної культури штучно пробуджених пагонів багатовікового дерева Тіlіа cordata Mill. "Липи Т.Г. Шевченка" in vitro включає використання як рослин-донорів Тіlіа cordata Mill, віком до тисячі років. Як первинні експлантати використовують штучно пробуджені пагони із бруньок, що знаходяться у стані спокою. Для цього частини пагонів з верхівковими та бічними бруньками, завдовжки 20-30 см, поміщають у посудину з водою і за рахунок контрольованих лабораторних умов (t=24±2 °C, відносна вологість повітря - 70 %, освітлення 34 тис. лк.) штучно пророщують до отримання зеленого конусу довжиною 1,5-3,0 см. Для ефективного знешкодження екзогенної та ендогенної мікрофлори експлантати стерилізували в лабораторних умовах у два етапи: І в нестерильних умовах та II - в умовах ламінарного боксу. На І - етапі пагони витримують у мильному розчині 15 хв, інтенсивно помішуючи. Після відмивають у проточній воді протягом 10 хв та переносять у посудину із стерильною dH2O. На II - етапі усі маніпуляції проводять у стерильному ламінарному боксі із стерильними розчинами та інструментами. У запропонованому способі стерилізації використовують стерилянти у такій послідовності: 70 %-вий розчин етанолу (С2Н5ОН) - 30 с, 25 %-вий розчину пероксиду водню (Н2О2) - 8 хв та одноразове відмивання -5 хв. При використанні 12,5 %-го розчину Н2О2-15 хв експлантати не відмивають від залишків стерилянту, а відразу переносять на чашку Петрі з фільтрувальним папером. Використання даного способу стерилізації експлантатів Тіlіа cordata Mill, дає можливість успішно отримувати значну кількість генетично-однорідного садивного матеріалу для збереження унікальних генотипів деревних рослин, пам'яток природи й створення банку рослин багатовікових однорідного садивного матеріалу для збереження унікальних генотипів деревних рослин, пам'яток природи й створення банку рослин багатовікових дерев. Такий спосіб стерилізації дозволяє отримати 70 % стерильних життєздатних експлантатів з мінімальною шкодою для рослинних тканин. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 50 55 Спосіб отримання асептичної культури штучно пробуджених пагонів багатовікового дерева Tilia cordata Mill. "Липи Т.Г. Шевченка" in vitro, який виконують в два етапи стерилізації сегментів пагонів Tilia cordata Mill.: в нестерильних умовах мильним розчином та в проточній воді, а в умовах ламінарного боксу у розчині С2Н5ОН та стерильній dH2O, який відрізняється тим, що після стерилізації в нестерильних умовах, штучно пробуджені сегменти пагонів Tilia cordata Mill, довжиною 1,5-3,0 см з багатовікового дерева, віком до тисячі років, в умовах ламінарного боксу додатково стерилізують у 25 %-вому розчині H2O2 впродовж 8 хвилин з одноразовим відмиванням у стерильній dH2O впродовж 5 хвилин, після чого експлантати розділяють на фрагменти стебел завдовжки 1,0-1,5 см з однією брунькою. 1 UA 115871 U Комп’ютерна верстка Л. Бурлак Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2