Спосіб одержування клітин кори наднирників людини і тварин

Изобретение относится к медицине, в частности эндокринологии, терапии, хирургии, и касается способа получения клеток коры надпочечников. Цель изобретения - повышение выхода жизнеспособных клеток. Извлеченную железу животных или человека отмывают средой 199, измельчают и выдерживают в течение 12-15 ч в условиях холодильника в смеси среды 199 и 0,25%-ного раствора трипсина, взятых в соотношении 1:1, с добавлением 5% бычьей сыворотки. Затем смесь подогревают, трипсинизируют, полученную ткань используют для культивирования, Выход жизнеспособных клеток 70-90%. С* 1 1377291 Изобретение относится к медицине, Надоеадочную жидкость сливают, и может быть использовано в эндокриа ткань помещают в питательную среду нологии, терапии, хирургии, для дальнейшего культивирования. ВыЦель изобретения - повышение выхо- с- ход жизнеспособных клеток составляет да жизнеспособных клеток. 70-90% (контроль 53%), уровень кортикостероидов 117,9-324,2 мкг % Способ иллюстрируется следующими (контроль 46,6 мкг % ) . примерами. П р и м е р 1. Выделение клеток Под наименованием уровень кортикоры надпочечных желез поросят суточ-JO костероидов необходимо понимать уроного возраста. вень 11 оксикортикостероидов (гидроЖивотных забивают гильотинировакортизон и кортикостерон). нием. Стерильно забирают надпочечные П р и м е р 3. Выделение клеток железы от поросят суточного возраста коры надпочечников взрослых и новои помещают в среду 199 при 4°С. Пос- 15 рожденных собак. ле 3-кратного промывания надпочечные Надпочечные железы отмывают 3-кратжелезы измельчают глазными ножницами но от крови и глазными ножницами издо кусочков размером 0,5-1 мм, перемельчают до фрагментов 0,5-1 мм, пеносят во флаконы и отмывают до полуреносят во флаконы и отмывают растчения прозрачной жидкости. Отмытые 20 вором Хенкса до получения прозрачной фрагменты ткани заливают смесью срежидкости. Отмытую ткань заливают ды 199 и 0,25^-ного раствора трипсисмесью среды 199 и 0,25%-ным раствона, взятых в соотношении 1:1, с дором трипсина с добавлением 5% бычьей бавлением 5% бычьей сыворотки, рН 7,4 сыворотки и помещают в холодильник и помещают на 12-15 ч в холодильник 25 на 12-15 ч. Не сливая среды, ткань , (4°С). Затем исходный материал подоподогревают на водяной бане до 32°С гревают до 32°С, трипсинизируют на и обрабатывают на магнитной мешалке магнитной мешалке 2-кратно по 25 мин 2-кратно по 25 мин при скорости врапри скорости вращения 120-140 об/мин. щения магнита 120-140 об/мин. В проНадосадок сливают, а ткань помещают 30 межутке между первой и второй обрадля дальнейшего культивирования. боткой производят замену среды на предлагаемую в изобретении. П р и м е р 2. Получение тканевой Обработанную таким образом ткань, культуры надпочечников человека. после отмывки раствором Хенкса, заГиперторифироваиные железы надпочечников при болезни Иценко-Кушинга 35 ливают общепринятой при культивировании питательной средой и помещают и гиперфункциях неолухолевой приров термостат при 37°С. ды, удаленные во время операции, очиИспользование предлагаемого спощают от жировой ткани и многократно соба позволяет повысить выход жизнеотмывают от крови, разрезают на 610 частей и снова 5-6 раз отмывают 40 способных клеток коры надпочечников и соответственно уровень кортикостесредой 199. роидов. Глазными ножницами ткань надпо-" чечных желез измельчают до размеров Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я 0,5-1 мм и отмывают средой 199 до получения прозрачной жидкости, после Способ получения клеток коры надчего заливают смесью среды 199 и почечников человека и животных, вклю0,25%-ного раствора трипсина в соотчающий забор железы, измельчение и ношении 1:1 с добавлением 5% бычьей ферментативную обработку измельченной сыворотки и помещают на 12-15 ч в железы с последующим выделением кле50 холодильник при 4°С. Не сливая среды, ток, о т л и ч а ю щ и й с я тем, ткань с питательной средой подогревачто, с целью повышения выхода жизнеют на водяной бане до 32 С и обрабаспособных клеток, перед ферментативтывают на магнитной мешалке 2-кратно ной обработкой измельченную железу по 25 мин при 120-140 об/мин. На провыдерживают 12-15 ч при 4-6°С & сре55 межуточном этапе исходную среду слиде 199 с 0,25%-ным раствором трипсивают и заменяют такой же средой с на, взятых в соотношении 1:1, в притемпературой 32°С, сутствии 5% бычьей сыворотки. 1377291 Редактор Н.Киштулинец Составитель А.Маныкин Техред М.Дидык Заказ 814/17 Тираж 520 ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Корректор О.Кравцова Подписное Производственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул. Проектная, 4