Спосіб очищення спор bacillus anthracis у суспензії

Реферат: Спосіб очищення спор Bacillus anthracis у суспензії включає її приготування, витримування, 3 центрифугування. Відбирають 3 см з поверхні надосадової рідини суспензії у стерильну 3 пробірку, додають 5 см етилового спирту та витримують 65 хв. при кімнатній температурі, потім центрифугують при 5000 об/хв. протягом 10 хв. UA 122180 U (12) UA 122180 U UA 122180 U 5 10 15 20 25 30 35 Корисна модель належить до сільського господарства, зокрема до ветеринарної медицини, і може бути використана для виявлення спор збудника Bacillus anthracis при лабораторній діагностиці сибірки тварин, індикації збудника з біологічного матеріалу та об'єктів навколишнього середовища у бактеріологічних відділах державних лабораторій ветеринарної медицини. За результатами цього способу можна отримати кількісні показники очищення спор Bacillus anthracis у суспензії. Аналогом корисної моделі є спосіб виявлення чисельності мікроорганізмів у суспензії методом посіву на щільне поживне середовище згідно ДСТУ 7847:2015 [1], який базується на особливості приготування розведень суспензії (1:10). Із кожної проби ґрунту проводять посів не 3 менше двох об'ємів суспензії по 0,1 см на поверхню живильного середовища у бактеріологічні чашки. Шпателем розтирають по всій поверхні середовища. Культивують чашки з посівами при температурі 30 °C протягом 72 год. Результати отримують шляхом підрахунку колоній на чашках, враховуючи розведення суспензії ґрунту. Недоліком даного методу є те, що він довготривалий, громіздкий, дозволяє виявити малу кількість спор, має значні затрати на поживне середовище, посіви містять велику кількість сторонньої мікрофлори. Крім цього, даний метод має похибку від 15 до 25 %. За прототип до корисної моделі вибрано спосіб виявлення збудника Bacillus anthracis у 3 ґрунті [2], у якому застосовують для приготування суспензії центрифугуванням 6 см БСА/ФСБ 3 (фільтрованого 1 % бичачого сироваткового альбуміну у 0,01 моль/см фосфатно-сольовому буфері, рН 7,2). Недоліком даного методу є те, що він громіздкий, потребує економічних витрат на електроенергію та приготування БСА/ФСБ, потребує використання більшого об'єму розчинів. Крім цього даний спосіб дає похибку у 30 %. В основу даної корисної моделі поставлена задача розробити спосіб очищення спор Вас. anthracis у суспензії. Поставлена задача вирішується шляхом додавання 100 % етилового спирту при експозиції 65 хв. при кімнатній температурі, що забезпечує очищення спор у суспензії та скорочення часу ідентифікації збудника. Спосіб полягає у наступному: беруть 2,5 г ґрунту і заливають розчином суспензії для 3 3 екстракції (100 см дистильованої води, 1,22 г/см сахарози-тритону Х-80). Потім струшують протягом 1 хв., після чого збовтують на шейкері протягом 15 хв. при 75 об/хв. для осадження 3 піни з поверхні суспензії. Відбирають 3 см рідини з поверхні надосадової рідини у стерильну 3 пробірку, додають 5 см 100 % етилового спирту, витримують 65 хв. при кімнатній температурі для забезпечення осадження спор шляхом центрифугування. Зразки відцентрифуговують при 5000 об/хв. протягом 10 хв. Надосадову рідину зливають та знищують. Потім проводять посів на поживне середовище. Порівняльна оцінка результатів випробування вищезазначених способів очищення спор Bacillus anthracis у суспензії корисної моделі до прототипу наведені у таблиці. Таблиця Порівняння способів очищення спор Bас. anthracis у суспензії до прототипу №п/н Показники, що порівнюються Прототип 1. Приготування дослідної суспензії: 1.1 Кількість ґрунту, г 2,5 1.2 Розчин для отримання розчин для екстракції 3 1.3 Кількість розчину, см 12 2. Час струшування, хв. 1 3. Час відстоювання, хв. 15 (шейкер) 3 4. Кількість суспензії для дослідження, см 3 5. 10 5100 2,5 розчин для екстракції 12 1 15 (шейкер) 3 3 5 см 100 % етилового спирту 10 5100 60 20 65 3 Додаткове підвищення ефективності 6. 7. 8. Корисна модель 6 см БСА/ФСБ Час центрифугування, хв. Центрифугування, об/хв. Очищення проби: - прогрівання на водяні бані при температурі, °C - час прогрівання, хв. - час, експозиції при кімнатній температурі, хв. 1 UA 122180 U Продовження таблиці 9. 5 10 15 Стабільність показників по способу очищення спор Вас. anthracis у суспензії, % 98,2 99,9 Спосіб забезпечує виявлення та очищення спор Bacillus anthracis у суспензії, скорочення часу дослідження суспензії, виділення збудника та його ідентифікацію. Джерела інформації: 1. ДСТУ 7847:2015. Якість ґрунту. Визначення чисельності мікроорганізмів у ґрунті методом посіву на тверде (агаризоване) живильне середовище [Текст]. - Чинний від 2016-07-01. - Київ: УкрНДНЦ, 2016. - III, 12 с - (Національний стандарт України). - Бібліогр.: с. 11. 2. Скрипник В.Г. Лабораторна діагностика сибірки тварин, індикація збудника з патологічного та біологічного матеріалу, сировини тваринного походження та об'єктів навколишнього середовища (Науково-методичні рекомендації для забезпечення практичної та самостійної роботи фахівців лабораторій та науково-дослідних установ ветеринарної медицини, викладачів та студентів факультетів ветеринарної медицини ВНЗ. Затверджені науково-методичною радою ДВФССУ протокол № 1 від 25.12.2014) / В.Г. Скрипник, І.О. Рубленко, Т.О. Гаркавенко та ін. - м. Київ, 2015. - 78 с. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 20 Спосіб очищення спор Bacillus anthracis у суспензії, що включає її приготування, витримування, 3 центрифугування, який відрізняється тим, що відбирають 3 см з поверхні надосадової рідини 3 суспензії у стерильну пробірку, додають 5 см етилового спирту та витримують 65 хв. при кімнатній температурі, потім центрифугують при 5000 об/хв. протягом 10 хв. Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2