Спосіб отримання біомаси bacillus anthracis з використанням наночастинок золота

Спосіб отримання біомаси Bacillus anthracis в середовищах з використанням наночастинок золота, який відрізняється тим, що за рахунок додавання нанозолота в співвідношеннях від 1:8 до 1:10 з концентрацією золота 15±5 - 30±5 мкг/мл підвищується рівень накопичення бактеріальної маси сибіркового мікроба на 2-6 log2, що дає можливість розмноження Bacillus anthracis до 1015 колоній утворюючих одиниць (КУО) в 1 см3 залежно від поживного середовища, що було взято за основу, враховуючи, що в середовищах без додавання частинок нанозолота рівень накопичення сибіркового мікроба не більше ніж 109 КУО в 1 см3. (19) (21) u201011927 (22) 08.10.2010 (24) 11.04.2011 (46) 11.04.2011, Бюл.№ 7, 2011 р. (72) ГОЛОВКО АНАТОЛІЙ МИКОЛАЙОВИЧ, УШКАЛОВ ВАЛЕРІЙ ОЛЕКСАНДРОВИЧ, МАЧУСЬКИЙ ОЛЕКСАНДР ВІКТОРОВИЧ, РЄЗНІЧЕНКО ЛЮДМИЛА СЕРГІЇВНА, РОМАНЬКО МАРИНА ЄВГЕНІЇВНА, ДИБКОВА СВІТЛАНА МИКОЛАЇВНА, БАБКІН МИХАЙЛО ВАЛЕРІЙОВИЧ (73) ДЕРЖАВНИЙ НАУКОВО-КОНТРОЛЬНИЙ ІНСТИТУТ БІОТЕХНОЛОГІЇ ТА ШТАМІВ МІКРООРГАНІЗМІВ 3 58450 середовищах з наночастинками золота, котрі додаються в середовища в якості стимулятора росту. Присутність в поживному середовищі часток нанозолота стимулює розмноження мікробу сибірки. Так, в звичайних поживних середовищах Bacillus anthracis дає накопичення не більше ніж 109 колоній утворюючих одиниць (КУО) в 1 см3, при додаванні до середовища наночасток золота накопичення Bacillus anthracis підвищується і може досягати 1015 КУО в 1 см3 в залежності від поживного середовища, що було взято за основу. Приклад 1 Виготовлення поживного середовища В якості джерела азоту використовують будьяке рідке поживне середовище, що підходить для культивування й накопичення біомаси Bacillus anthracis. До середовища додають наночастинки 4 золота в співвідношенні 1:2, 1:4, 1:6, 1:8, 1:10, 1:12 та 1:20. Стерилізацію проводять автоклавуванням при 0,7 атм. Після автоклавування ємності з середовищем витримують при 37°С протягом 48 годин для перевірки на стерильність. За основу ми використовували комерційне стандартизоване середовище бульйон з гідролізату рибного борошна та бульйон Хоттінгера (рН=7,2-7,6; амінний азот 100120 мг%). Приклад 2 Засівання рідкого поживного середовища з частками нанозолота культурою Bacillus anthracis Після перевірки на стерильність в ємності з середовищем засівають по 1 см культури Bacillus anthracis з відомою концентрацією та залишають для культивування при 37°С протягом 20-24 годин. Таблиця 1 Результати накопичення біомаси Bacillus anthracis в середовищі з частинками нанозолота Концентрація частинок нанозолота № п/п Розведення 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8 10-9 10-10 10-11 10-12 10-13 10-14 10-15 10-16 1:2 1:4 1:6 1:8 1:10 1:12 1:20 + + + + + + + + + + + + + + + + + – – – – – – – + + + + + + + + + – – – – – – – + + + + + + + + + + + – – – – – + + + + + + + + + + + + + + + – + + + + + + + + + – – – – – – – + + + + + + + + + – – – – – – – – – – – – – – прототипне середовище + + + + + + + + + – – – – – – – + - спостерігається ріст Bacillus anthracis - - відсутній ріст будь-якої мікрофлори прототипне середовище - середовище без частинок нанозолота Приклад 3 Визначення КУО Bacillus anthracis після інкубації в рідкому поживному середовищі з частками нанозолота Після інкубації Bacillus anthracis в рідкому поживному середовищі з частками нанозолота відбирають 1 см3 поживного середовища та визначають КУО шляхом десятинних граничних розведень до 10-15. Після серійних розведень пробірки зали Комп’ютерна верстка А. Рябко шають для інкубації при 37°С протягом 20-24 годин (Таблиця 1). Даний спосіб знайде широке використання в біотехнологічній промисловості де необхідне використання біомаси сибіркового мікробу, таке як виготовлення вакцин проти сибірки, виготовлення сибіркових антигенів, діагностичних наборів, протисибіркових, гіперімунних та преципітуючих сироваток тощо. Підписне Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601