Спосіб одержання пробіотика “лактосан” для поросят

УКРАЇНА (19) U А «„, 15825 (ІЗ) (5DS А 61 К 35/66 ДЕРЖАВНЕ ПАТЕНТНЕ ВІДОМСТВО ОПИС ДО ПАТЕНТУ НА ВИНАХІД (54) СПОСІБ ОДЕРЖАННЯ ПРОБІОТИКА "ЛАКТОСАН" ДЛЯ ПОРОСЯТ 1 (20)93111403,26.02.93 (21^44364/SU (22)06.05.91 « (24) 30.06.97 * (46) 30.06.97. Бюл. Ьк З (56) Антипов и др. Применение СБА в качестве ростостимулирующего средства. Всес.конф. "Микроорганизмы-стимуляторы и ингибиторы роста раст. и жив.", Ташкент, 1989, с. 14 (прототип). (72) фідгорський Валентин Степанович, Коваленко Надія Костянтинівна, Касумова Світлана Олексіївна, Головач Тетяна Миколаївна, Немировська Людмила Миколаївна, Гавриленко Михайло Миколаївич, Довгань Никон Ярославич, Добрянський Іван Васильович, Дорда Володимир Якович Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к получению биопрепаратов для свиноводства. Наиболее близким к предлагаемому изобретению является способ получения комплексного препарата СБА, содержащего молочнокислые бактерии. Недостатком является низкое суммарное количество живых клеток (в 1 г препарата 5'108 кл), что происходит вследствие совместного выращивания культур микроорганизмов, обладающих различными физиологическими свойствами. В основу изобретения поставлена задача усовершенствования способа получения пробиотика лактосан для поросят, в котором путем культивирования в оптимальных для каждого штамма Enteroroccus facclum и Lactobaclllus acldophilus параметрах, сепа (73) Інститут мікробіології та вірусології їм. Д.К.Заболотного НАН України (UA) (57) Способ получения пробиотикадля поросят путем культивирования бактерий видов Enterococcus faccium и Zactobaclllus acidophllus, сепарирования, сушки и смешивания монокультур, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что из вида Enterococcus faccium используют штамм Enterococcus facclum ЦМПМ В-2897, из /actobaclllus aclc-yhilus - штамм 2&ctobaclllus acldophilus ВКПМ В3488, культивирование, сепарирование и сушку штаммов осуществляют раздельно, а полученные сухие монокультуры смешивают в соотношении 7:3-8:2 соответственно. рирования, сушки и смешивания монокультур в определенном соотношении обеспечивается высокий титр жизнеспособных клеток и за счет этого происходит надежная защита от заболеваний пищеварительного тракта поросят. Поставленная задача решается тем, что в способе получения пробиотика лактосан для поросят путем культивирования бактерий видов Enterococcus faccium и Lactobacillus acidophllus сепарирования, сушки и смешивания монокультур согласно изобретению из вида Enterococcus faccium используют штамм Enterococcus faccium ЦМПМ В-2897, из Lactobaclllus acidophllus штамм Lactobacillus acidophilus ВКПМ В3488, культивирование, сепарирование и сушку штаммов осуществляют раздельно, а 15825 полученные сухие монокультуры смешивают в соотношении 7:3-8:2 соответственно. Предусмотренные в заявляемом способе раздельное культивирование и сушка штаммов позволяет осуществить эти про- 5 цессы при оптимальных для каждого штамма параметрах и предотвращает их ингибирующее влияние друг на друга, что способствует увеличению количества жизнеспособных клеток в сухих концентратах 10 монокультур и в препарате в целом. Так как препарат после смешивания сухих монокультур еще стандартизует до содержания в 1 г 50 109 клеток, следовательно возможно повышение выхода пробиотика в 2-3 раза 15 при одних и тех же затратах за счет оптимизации условий культивирования и большего выхода клеток выращиваемых бактерий. Способ получения сухих монокультур препарата лактосан следующий. 20 Е.іассШт выращивают при рИ 6,6-6,8 и температуре 39-41 °С на среде следующего состава: ферментатианый гидролизат крахмала 1,6-1,8% по редуцируюичш веществам (РВ), ферментативный гидролизат БВ.К 25 - 40-60 мг.% по аминному азоту, кукурузный экстракт - 0,3%. Посевной материал вносят в количестве 0,1 % от объема засеваемой среды и выращивают в течение 9-12 ч с постоянно работающей мешалкой без под- 30 ачи воздуха; оптимальное для роста рН поддерживали подачей 20% водною аммиака. Титр клеток в культуральной жидкости составляет tie менее 6 млрд/мл. Клетки концентрируют в 10-12 раз с помощью 35 сепарирования и высушивают на распылительной сушилке при температуре воздуха на входе 95°С и на выходе - 65°С. Влажность высушенных клеток не более 10%, титр -13010 9 клеток/г. 40 Ацидофильную палочку выращивают при 39-41°С и рН 5,9-6,1 на среде с вышеперечисленными компонентами, содержащей 2,4% РВ и 80 мг % аминного азота. Длительность ферментации 10-13 ч; титр 45 культуральной жидкости не менее 4 109 клеток/мл. Клетки концентрируют и высушивают, причем температура воздуха на входе в распылительную сушилку 65°С, на выходе 40°С. Титр клеток сухой ацидофильной палочки V109 клеток/г. Полученные сухие монокультуры смешивают в соотношении 7:3 - 8:2. Смесь содержит в 1 г препарата 91' 10еклеток E.facclum и 0,3'10 клеток Lacidophilus. Для получения препарата смесь стандартизуют кукурузной мукой до содержания в1 г 50 млрд клеток. Композиция энтерококка и ацидофильной палочки 7:3-8:2 является наиболее благоприятной (в сравнении с 6:4 и 9:1) по проявлению антагоностическои активности по отношению к возбудителям кишечных инфекций свиней. Установленное соотношение монокультур было подтверждено экспериментально на новорожденных поросятах. Примеры, подтверждающие выбор соотношений штаммов лактосана, приведены в виде табл.1. Одним из положительных свойств мо лочнокислых бактерий препарата является способность прикрепляться к стенке кишечника свиней. Исследованная адгезивная способность культур лактосана представлена в табл.2. Из табл.2 видно, что адгезивность лактосана определяет, в основном энтерококк. Высокий титр его в препарате обеспечивает лучший эффект при использовании его в свиноводстве по сравнению с препаратом СБА, содержащим меньшее количество жизнеспособных микроорганизмов. Лактосан надежно обеспечит защиту поросят от заболеваний пищеварительного тракта. Эффект от применения препарата достигается в первые дни жизни животных. E.faccium, имея высокую скорость роста и хорошо прикрепляясь к стенке кишечника, быстро размножается, тем самым защищает от внедрения инфекционных агентов, попапаюащих из окружающей среды. Затем Lacidophilus начинает размножаться, дополняя антагонистическую активность энтерококка и способствуя формированию здорового микробного ценоза и активизации процесса пищеварения. 15825 Таблица 1 Интенсивность роста поросят в подсосный период Показатели Средний живой вес одной головы при рождении /г/ Средний живой вес одной головы при отъеме /кг/ Среднесуточный привес /г/ ± % к контролю Группы поросят, получавшие препарат с различным (соотношением энтероккока и ацидофильноеі палочки 7:3 6 .4 8 :2 9 •1 ОпытКонтКонтКонтОпытОпытКонтОпытрольная рольная рольная ная ная ная рольная ная 1387,5 1098,5 1217 1130 1250 1380 1431,2 1548,3 15.2 15,8 18.8 19,9 14,3 15,1 15,5 16,5 250,3 258,6 +3.3 290.1 307,9 +6,1 219,4 233,3 +6,0 233,9 246,2 Таблица 2 Микроорганизмы ЦМПМ В-2897 ВКПМ В-3488 лактосан Упорядник Замовлення 4203 Средние значения количества бактерий, прикрепившихся к 1-му энтероциту 5,22±2,17 1,7±0,8 6,76±2,35 Техред М.Моргентал Коректор Н.Король Тираж Підписне Державне патентне відомство України, 254655, ГСП, Київ-53. Львівська пл., 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород, вул.ГагарІна, 101 \