Спосіб консервування ембріонів ссавців

Изобретение относится к криобиологии Цель изобретения - удлинение сроков хра нения эмбрионов Эмбрионы консервируют при 5°С в среде Дюльбекко, содержащей 2-3% мочоэтилового эфира глицерина и 7 0-12 0% эмбриональной сыворотки пподов коров Изобретение относится к криобиологии и касается экспериментальной репродуктологии. Целью изобретения является удлинение сроков хранения эмбрионов. Цель достигается тем, что в способе гигеотермического хранения эмбрионов включающем экспозицию их при 5°С в среде Дюльбекко, содержащей защитный агент среда Дюльбекко дополнительно содержит 7,0-12,0% эмбриональной сыворотки плодов коров, а в качестве защитного агента использован моноэтиловый эфир глицерина в концентрации 2-3% Моноэтиловый эфир глицерина МЭЭГ1-этокси-2,3-пропандиол получен взаимодействием 1-монохлоргидрина глицерина с этилатом натрия П р и м е р 1. Эмбрионы мышей на стадии морулы вымывали при комнатной температуре из рогов матки мышей средой Дюльбекко с добавлением 10%-ной эмбриональной сыворотки плодов коров На этой же среде готовят 5%-ный раствор моноэтилового эфира глицерина (МЭЭГ) также с добавлением 10%-ной эмбриональной сыворотки плодов коровы Затем 20 эмбрионов делят на 2 группы по 10 эмбрионов и каждую помещают в 0.25 мл среды для вымывания эмбриональных клеток Эмбрионы опытной группы охлаждают ступенчато от комнатной (20°С) температуры до5°С понижая температуру на 5-С и выдерживая при каждой температуре 5 мин Одновременно охлаждают раствор, содержащий МЭЭГ, который при 5°С добавляют в соотношении 1 1 к охлажденным эмбрионам Таким образом, конечные концентрации МЭЭГ и эмбриональной сыворотки плодов коровы составляют соответственно 2,5 и 1% Эти эмбрионы, охлажденные до 5°С, оставляли на хранение при этой же температуре 48 ч К эмбрионам контрольной группы при комнатной температуре в таком же соотношении добавляли раствор для вымывания и переносили в культуральную среду Виттена, где культивировали в течение 24 ч до выхода в бластоцисту Эмбрионы опытной группы после 48 ч хранения отогревали ступенчато, повышая температуру на 5°С каждые 5 мин. Для этого пробирку с эмбрионами последовательно переносили в водяную баню с темс пературой 10, 15 и 20 С После этого эмбрионы отмывали от МЭЭГ путем разбавления раствора с эмбрионами, к 1 капле которого через каждые 5 мин добавляли 6 20-92 ел с со 1737783 капель раствора Дюльбекко Затем эмбрионы культивировали в среде Виттена в атмосфере тройного газа при 37°С в течение 24 ч до выхода их в бластоцисту Эмбрионы после гипертермического хранения развивались аналогично контролю Их сохранность составляет 90,5% по сравнению с 95% в контроле, то есть достоверно не отличалась П р и м е р 2 Способ осуществляли аналогично примеру 1, но эмбрионы хранили в течение различного периода времени 24, 48 и 72 ч Результаты представлены в табл 1 П р и м е р з Аналогично примеру 1 но эмбрионы хранили 48 ч вереде не содержащей МЭЭГ. Сохранность эмбрионов составила (38,8+1,26)% (п = 16) П р и м е р 4 Аналогично примеру 1, но среда, в которой хранили эмбрионы 48 ч не содержала эмбрионной сыворотки плодов коровы Сохранность эмбрионов составила (45,5+ 2,46)% (п = 12) П р и м е р 5 Аналогично примеру 1 но вместо эмбриональной сыворотки плодов коров среда для хранения эмбрионов содер жала сывороточный альбумин коров Результаты представлены в табл 2 Из табл.2 видно, что среда содержащая сывороточный альбумин коров не обеспечивает такой высокой сохранности, как эмбриональная сыворотка плодов коров П р и м е р 6 Аналогично примеру 1, 5 только варьировали концентрацию эмбриональной сыворотки в среде Результаты представлены в табл 3 Из табл 4 видно, что самая высокая сохранность отмечается при концентрациях 10 7-12% П р и м е р 7 Аналогично примеру 1, только варьировали концентрации МЭЭГ. Результаты представлены в табл 4 Таким образом, способ позволяет уве15 личить время гипотермического хранения эмбрионов и на 65% повысить их сохранность по сравнению с прототипом Формула изобретения Способ консервирования эмбрионов млекопитающих, включающий экспозицию их при 5°С в среде Дюльбекко содержащей протектор, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью удлинения сроков хранения эмбрио25 нов среда Дюльбекко дополнительно содержит 7,5-12,5% эмбриональной сыворотки плодов коров, а в качестве протектора используют моноэтиловый эфир глицерина в концентрации 2-3% 20 Таблица! Время хранения ч 24 48 72 Сохранность % 89 8+1,12 90 5+3 18 52 2+1,86 Таблицэ2 Концентрация сывороточного альбумина коров. % 0,25 0,5 1.0 1.5 2,0 Сохранность эмбрионов % 32 0+.2 18 45.4t1.46 65,6+2,14 40.2t3.04 31,4+1,84 1737783 ТаблицаЗ Концентрация эмбриональной сыворотки,% 2,5 5.0 67.5 10,0 12,5 Сохранность эмбрионов,% 60,6+1,48 70.1 + 1,14 85,9+2,64 90,6+2.18 86.3+1,41 Т а б л и ца 4 Концентрация, МЭЭГ,% 1.5 2.0 2.5 3.0 3,5 5,0 Редактор Е.Копча Сохранность эмбрионов, % 48 ч хранения 24 ч хранения 58.9+2,14 . 61,2+1,18 82 1 + 1,42 83,1+3,14 89,8+2,68 90.0+1,81 79,4+2,14 30 3+1,12 . 871.6+3.14 69,4+3 45 44 2+2.26 37,5+1,18 Составитель А С Буданов Техред М Моргентал Корректор М Демчик Заказ 1740/ДСП Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г Ужгород, ул.Гагарина, 101