Спосіб прогнозування напряму розвитку лейкозного процесу у корів

Спосіб прогнозування напряму розвитку лейкозного процесу у корів, що включає відбір проб молока досліджуваних корів, аналіз їх біохімічних показників, який відрізняється тим, що в пробах сироватки молока визначають загальний рівень 3 18556 4 альфалактоальбумінів від 0,165 до 0,173г%, ввацесу на підставі біохімічних змін в молоці корів. жають ранньою стадією захворювання; Імовірність виявлення таких змін при дослідженні а стан корів, в пробах крові яких виявлено молока коливається в межах 80-90%. концентрацію загального білка в межах 7,08В господарстві, молочне стадо в якому є підо7,10г%, гама-глобулінів 2,08-2,13г%, а в пробах зрілим на лейкоз, для підтвердження діагнозу і молока встановлений рівень загального білка сипрогнозування напряму розвитку лейкозного пророватки молока в межах 2,54-2,61г%, альфалактоцесу заявлений спосіб здійснюють наступним чиальбумінів від 0,165 до 0,173г%, вважають станом ном: активної стадії лейкозу. 1. Відбирають проби молока для досліджень. Спосіб забезпечує можливість виявлення біо2. Одержують сироватку молока та здійснюють хімічних змін в крові і молоці на ранніх стадіях розїї гідроліз. витку захворювання. Імовірність виявлення змін 3. Мікрометодом низхідної розподільчої хропри дослідженні молока і крові досягає 80-85%. матографії на папері в гідролізатах сироватки моНедоліком способу є необхідність одночасного лока корів визначають кількість замінних і незамінвідбору проб молока і крові, що вимагає додатконих амінокислот. вих затрат при його здійсненні. Крім цього, відомий 4. Аналізують одержані результати досліспосіб є недостатньо ефективним і об’єктивним. джень: загальну кількість амінокислот та співвідЗаявлений нами спосіб усуває недоліки найношення їх замінних і незамінних форм, при цьому ближчого аналоги і дає можливість на ранніх ставважають, що наявність в сироватці молока загадіях лейкозного процесу визначити напрямок розльної кількості амінокислот в межах 986-992мг% витку захворювання та своєчасно впровадити при співвідношенні замінних до незамінних протиепізоотичні заходи. Спосіб зручний у засто40,4х59,6% свідчить про розвиток лейкозного просуванні і не вимагає відбору і обробки проб крові цесу від передлейкозної стадії до ранньої стадії та дає можливість своєчасно виявити зміни в пролейкозного процесу, а зниження загального рівня цесах синтезу та співвідношенні замінних і незаамінокислот до 680-692мг% при співвідношенні мінних амінокислот. Імовірність виявлення таких замінних до незамінних 42,9х57,1% свідчить про змін при дослідженні проб сироватки молока досярозвиток активної стадії лейкозу. гає 80-90%. Ефективність заявленого способу прогнозуВ основу корисної моделі покладено завдання вання напряму розвитку лейкозного процесу у костворити новий ефективний спосіб раннього прорів підтверджена прикладом конкретного виконангнозування напряму розвитку лейкозного процесу ня. у лактуючих корів, економічно вигідний і зручний у Дослідження проводились протягом 2000-2004 застосуванні. років в Інституті патології крові та трансфузійної Технічний результат досягають тим, що в промедицини Академії медичних наук України бах сироватки молока визначають загальний рі(м.Львів) і у Львівській національній академії ветевень амінокислот та співвідношення їх замінних до ринарної медицини імені С.З.Гжицького. в небланезамінних форм (у %) та аналізують одержані гополучних щодо лейкозу господарствах - „Тарасірезультати досліджень, при цьому вважають, що вна”, „Поділля” і „Славутич” Збаразького району наявність в сироватці молока загальної кількості Тернопільської області були проведені дослідженамінокислот в межах 986-992мг% при співвідноня на 75 клінічно здорових та хворих лейкозом шенні замінних до незамінних 40,4х59,6% свідчить коровах чорно-рябої породи, віком 5-10 років. про розвиток лейкозного процесу від передлейкоБуло сформовано п’ять дослідних груп за резної стадії до ранньої стадії лейкозного процесу, а зультатами гематологічних досліджень. Перша зниження загального рівня амінокислот до 680група - здорові тварини - кількісні показники крові 692мг% при співвідношенні замінних до незамінколивались в межах фізіологічної норми. Друга них 42,9х57,1% свідчить про розвиток активної група - інфіковані тварини - РІД позитивно реагуюстадії лейкозу. чі, у яких кількісні показники крові були в межах Лейкоз великої рогатої худоби характеризуфізіологічної норми. Третя група - передлейкозна ється повільним розвитком захворювання і може стадія - тварини цієї групи характеризувались ліпротікати роками без певних клінічних ознак, хоча мфоцитозом - 9,58тис/мкл, кількість лейкоцитів тварина в цей час є джерелом збудника хвороби. коливалась від норми до 12-15тис/мкл. За цими При цьому вірус виділяється у зовнішнє середопоказниками тварини згідно „лейкозного ключа” вище у лактуючих корів з молоком. Ступінь порукваліфікувались як підозрілі в захворюванні лейкошення білкового обміну в тварин, хворих лейкозом. Четверта група - рання стадія лейкозу - до зом, знаходиться в прямій залежності від стадії цієї групи відбирались тварини, які характеризуваперебігу лейкозного процесу. Зміни, що відбувались сублейкемічним рівнем лейкоцитозу в крові, ються в обміні білків лактуючих корів, хворих на п’ята група - активна стадія лейкозу - цю групу лейкоз, обов’язково супроводжуються змінами формували тварини, в яких виявили низькі показамінокислот та співвідношенні їх замінних та неники еритроцитів - 4,80млн/мкл і гемоглобіну замінних форм у тваринницькій продукції, зокрема 6,89г%, що відображає анемію. Кількість лейкоцив молоці. Такі зміни в кількості амінокислот та тів - 97,56тис/мкл, лімфоцитів -94,5тис/мкл. співвідношенні їх форм у молоці лактуючих корів Досліджувалось молоко мікрометодом низхідспостерігаються вже на ранніх стадіях розвитку ної розподільчої хроматографії на папері. В гідролейкозного процесу. лізатах сироватки молока корів визначали кількість Отже, заявлений нами спосіб дає можливість 7-и замінних (аспарагінова, гліцин, глютамінова, прогнозувати напрямок розвитку лейкозного проаланін, серин, тирозин, цистеїн) і 8-й незамінних 5 18556 6 амінокислот (аргінін, ізолейцин, лізин, метіонін, ологічним станом організму в період досліджень, треонін, фенілаланін). Результати досліджень напри інших дослідженнях кількість амінокислот коведені в таблицях 1, 2. ливалась від мінімальних до максимальних велиПроведені дослідження показали, що в групі чин. Аналогічні зміни кількості амінокислот виявздорових тварин кількість амінокислот у різних лені і у корів в динаміці розвитку лейкозного тварин і при кожному дослідженні коливалась в процесу (таблиці 1). широких межах, що, на наш погляд, було пов’язано з індивідуальними особливостями і фізіТаблиця 1 Зміни рівня окремих амінокислот в сироватці молока корів при різних напрямах лейкозного процесу, M m, n=10, мг% Амінокислоти Стадії лейкозного процесу передлейкозна рання активна Замінні амінокислоти 34,41±9,76* 55,64±15,31* 48,59±14,24* 43,91±10,72* 60,28±16,38* 54,46±13,73* 68,71±16,09* 51,33±12,29* 60,71±12,91* 98,68±29,39* 62,57±13,75* 46,б8±11,71* 57,84±10,69* 59,47±13,39* 70,39±14,09* 46,73±12,13* 36,58±8,04* 54,01±21,42* 35,51±10,23* 18,36±6,79** 95,85±24,07* 70,76±19,54* 61,38±15,65* 47,96±13,38** 47,87±13,67* 43,15±12,55* 53,74±13,94* 39,24±11,85* Незамінні амінокислоти 69,13±14,26* 78,39±15,67* 59,78±14,37* 44,19±12,37* 44,99±8,53* 56,60±12,98* 58,72±15,57* 50,05±11,19* 70,29±5,73* 66,28±14,66* 83,83±21,31* 40,72±13,09* 78,79±17,45* 74,78±16,27* 92,33±21,86* 55,46±13,64* 101,75±12,5* 129,38±26,75* 119,59±17,5* 68,33±9,76* 40,78±8,96* 52,39±11,94* 54,51±12,43* 45,84±9,87* 38,97±7,85* 34,72±6,86* 51,67±11,78* 44,31±13,16* 57,95±18,34 53,48±17,73* 70,93±19,16* 42,90±12,07* Здорові тварини Інфіковані тварини Аланін Аспарагінова кислота Гліцин Глютамінова кислота Серин Тирозин Цистеїн 35,26±10,42 58,61±11,66 66.58±11,73 58,95±9,09 39,87±9,68 102,48±27,86 45,63±9,35 Аргінін Валін Ізолейцин Лейцин Лізин Метіонін Треонін Фенілаланін 71,65±14,41 43,88±8,98 70,64±13,79 79,14±15,17 103,21±19,76 39,67±7,53 36,85±7,54 57,72±12,73 Примітка: достовірність різниць із показниками здорових тварин: * - Р>0,1;** - Р>0,05. За характером кількісних змін амінокислот у групах досліджуваних корів в динаміці розвитку лейкозного процесу можна виділити наступні особливості: - по-перше, спостерігається наростання кількості глутамінової кислоти, метіоніну і валіну і передлейкозній і ранній стадії лейкозу порівняно з показниками здорових і інфікованих тварин з наступним зниженням її кількості в активній стадії захворювання; - по-друге, збільшення кількості аланіну, гліци ну, серину, лізину в передлейкозній стадії з наступним зниженням їх показників і ранній і активній стадіях захворювання; - по-третє, зменшення кількості аспарагінової кислоти, цистеїну, лейцину, ізолейцину і фенілаланіну в сироватці молока в передлейкозній стадії, збільшення в ранній стадії і в активній стадії зниження їх рівня нижче показників здорових тварин, тоді як кількість треоніну в активній стадії вища за показники у здорових тварин. Таблиця 2 Зміни в кількості і співвідношеннях амінокислот в сироватці молока корів за різних напрямів розвитку лейкозного процесу Показники, одиниці виміру Стадії лейкозного процесу Здорові твари- Інфіковані твани рини передлейкозна рання активна Загальна кількість амінокислот, 910,14±189,70 896,19±189,14 982,19±248,19 992,25±232,01 686,06±173,96 мг% Кількість замінних амінокислот, 407,38±89,79 393,54 ±95,52 436,17±125,33 400,89±97,99 294,26±78,87 мг% Кількість незамінних амінокис502,76±99,91 502,65±93,62 546,02±122,86 591,36±134,02 391,80±95,09 лот, мг% Співвідношення замінних і не44,76х55,24 43,91х56,09 44,42х55,58 40,40х59,60 42,89х57,11 замінних амінокислот, % 7 18556 Значне зменшення кількості амінокислот в активній стадії лейкозу порівняно з нормальними показниками відбувається в кількості гліцину на 19,9мг%, ізолейцину - 29,92мг%, лейцину 23,68мг%, тирозину - 54,52мг%, аргініну 27,46мг%, серину - 21,51 мг% і фенілаланіну 14,82мг%, а збільшення кількості валіну на 6,17мг%, метіоніну на 6,17мг%, аланіну - на 8,65мг% і треоніну - на 7,46мг%. Як видно з таблиці №2, у хворих тварин залежно від стадії розвитку лейкозного процесу, суттєві зміни проходять і в загальній кількості амінокислот. Кількість їх в групі здорових тварин склала 910,14±89,70мг%, у інфікованих 896,19±189,14мг%, в передлейкозній стадії 982,19±248,19мг%, в ранній стадії 992,25±232,01мг%, а в активній стадії спостерігається різке зниження їх вмісту до 686,06±173,96мг%, тобто на 224,08мг% (24,62%) порівняно з показниками у здорових тварин. Подібні зміни відмічені і в сумі замінних і незамінних амінокислот. Так, кількість незамінних амінокислот в середньому по групах корів підвищилась з 502,76±99,91мг% до 591,36±134,02мг% в ранній стадії лейкозу. В активній стадії кількість їх знизилась до 391,80±95,09мг%, тобто на 110,96мг% (22,07%). Показники замінних амінокислот підвищились від рівня у здорових корів (407,38±89,79мг%) до передлейкозного стану - (436,17±125,33мг%) на 28,79мг%. В ранній стадії спостерігається їх зниження до вихідних величин (400,89±97,99мг%). Різке зниження кількості замінних амінокислот наступає в активній стадії на 141,91мг% і складає 294,26±78,87мг%, що на 113,12мг%, або на 27,77% нижче показників здорових корів. При цьому необхідно відмітити, що у співвідношенні у від Комп’ютерна верстка В. Мацело 8 сотках загальна кількість незамінних амінокислот переважає на замінними. Так, якщо співвідношення у відсотках замінних і незамінних в групі здорових корів складає 44,76х55,24, то у інфікованих (43,91х56,09) і у тварин в передлейкозному стані (44,42х55,58) спостерігаються незначні відхилення, в той час як у тварин ранньої (40,40х59,60) і активної (42,89х57,11) стадій розвитку лейкозного процесу кількість незамінних амінокислот перевищує показники групи здорових тварин, зниження кількості замінних амінокислот в ранній і активній стадіях можна пояснити посиленим використанням їх при розвитку патологічного процесу, коли організм неспроможний виділяти їх в достатній кількості. Можливо також, що в організмі хворої тварини проходить перерозподіл їх співвідношення, що вказує на порушення метаболізму амінокислот. Отже, проведені дослідження свідчать про наступне: 1. В сироватці молока корів досліджено 15 амінокислот, сума яких склала 910,14±189,70мг%, в тому числі замінних 407,38±89,79 і незамінних 502,76±99,91мг% у співвідношенні 44,76х55,24, а в групах корів, які знаходились в передлейкозному стані і в ранній стадії лейкозу загальна кількість амінокислот підвищується до 992,25±232,01мг% за рахунок окремих замінних (аланін, гліцин, глутамінова і аспарагінова кислоти, цистеїн) і незамінних (аргінін, валін, ізолейцин, лейцин, лізин, метіонін, треонін) амінокислот. 2. В активній стадії лейкозу наступає значне зменшення загальної кількості амінокислот до 686,04±173,96мг%, тобто на 224,10мг% нижче рівня у здорових корів за рахунок замінних (аспарагінової кислоти, гліцину, серину, тирозину, цистеїну) і назамінних (аргініну, ізолейцину, лейцину, лізину і фенілаланіну) амінокислот. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601