Піперидиній 2-[5-(фуран-2-іл)-2н-1,2,4-триазол-3-ілтіо]ацетат, який проявляє противірусну активність

Піперидиній 2-[5-(фуран-2-іл)-2Н-1,2,4триазол-3-ілтіо] ацетат формули: Корисна модель стосується фармацевтичної хімії і медицини, та може бути використаною у створенні нових біологічно активних сполук у ряді похідних 1,2,4-триазолу і застосованою в лікуванні та профілактиці вірусних хвороб. В доступній літературі нами не знайдено інформації щодо існування речовин серед похідних 1,2,4-триазолу, які обумовлюють доволі високу противірусну активність. Найбільш близьким препаратом до сполуки, що заявляється, є тіотріазолін (морфоліній 2-[5метил-2Н-1,2,4-триазол-3-ілтіо]ацетат), який має противірусну активність. Але методика його синтезу складна та противірусна дія недостатньо висока. В основу корисної моделі поставлено задачу створення нових біологічно активних сполук у ряду 1,2,4-триазолу, які мають противірусну активність. Поставлена задача вирішується тим, що піперидиній 2-[5-(фуран-2-іл)-2Н-1,2,4-триазол-3ілтіо]ацетат містить в положенні 5 ядра 1,2,4триазолу фурильний радикал, а катіоном є залишок піперидину і має формулу: токсичної дії, а також модифікацію клітинної мембрани, яка перешкоджає утворенню комплексу вірусу з клітинною мембраною, що свідчить про противірусну дію даної фармакологічної речовини. Сполуку, що заявляється, отримують шляхом взаємодії 2-[5-(фуран-2-іл)-2Н-1,2,4-триазол-3ілтіо]ацетатної кислоти з піперидином в спиртовому середовищі при температурі 78°С. Приклад Суміш 0,5 моль 2-[5-(фуран-2-іл)-2Н-1,2,4тріазол-3-ілтіо]ацетатної кислоти, 35 мл етанолу та 0,5 моль піперидина, підігрівають на водяній бані до повного розчинення, охолоджують, фільтрують. Вихід складає 95г (84% рахуючи на 2-[5(фуран-2-іл)-2Н-1,2,4-тріазол-3-ілтіо]ацетатну кислоту). Піперидиній 2-[5-(фуран-2-іл)-2Н-1,2,4триазол-3-ілтіо]ацетат світло жовтий кристалічний порошок з Тпл 180-182°С (із етанолу), розчинний в воді, нерозчинний в ацетоні, хлороформі. Знайдено, % С 50,35, Н 5,87, N 18,09, S 10,3. C13H18N4O3S. Обчислено, % С 50,31, Н 5,85, N 18,05, S 10,33. В ІЧ-спектрах сполуки, що заявляється наявні смуги коливання –СОО- групи в межах 16101540см-1, а також смуги поглинання NH-груп в межах 3300-3500см-1 Противірусну активність синтезованої сполуки вивчали на кафедрі вірусології Національної медичної академії післядипломної освіти ім. П.Л.Шупика. N O N H NH S CH2 N+ COOH Така структура сполук забезпечує: доступність реактивів для синтезу, нескладну методику отримання, низьку гостру токсичність, відсутність цито N O N H NH S CH2 N+ COOH (19) UA (11) 18863 (13) U , який проявляє противірусну активність. 3 18863 4 Противірусну активність піперидинію 2-[5Готували послідовні серійні дворазові розве(фуран-2-іл)-2Н-1,2,4-триазол-3-ілтіо] ацетату, по дення досліджуваної речовини у підтримуючому відношенню до складних вірусів, вивчали на моживильному середовищі від 2-1 до 2-10, у яких кільделі вірусу везикулярного стоматиту (ВВС), штам кість активної речовини відповідала передбачуваІндіана. Дослідження проводили в 2 етапи згідно ним концентраціям: 5000, 2500, 1250, 625, 312,5, до вимог Фармакологічного комітету України, у 156,25, 78,13, 39,06, 19,50 та 9,76мкг/мл. Ростове відповідності до методичних рекомендацій [Щерсередовище із лунок планшету зі зформованими бінська A.M., Дяченко Н.С., Рибалко С.Л., Носач моношарами клітин повністю видаляли. Розчини Л.М., Дядюн С.Т., Вринчану Н.О. Вивчення антивіпрепаратів у відповідних концентраціях наносили русної дії потенційних лікарських засобів.Київ, на клітинні моношари у відповідні марковані лунки 2000, 40с.] планшету. Для дослідження кожної концентрації На першому етапі вивчали цитотоксичність піпрепаратів використовували по 4 клітинні моноперидинію 2-[5-(фуран-2-іл)-2Н-1,2,4-триазол-3шари (по 4 лунки). Через 24-72 години інкубування ілтіо]ацетату за дією сполуки на моношар перещепри 37°С при мікроскопічному дослідженні визнаплювальної культури клітин аденокарциноми горчали концентрацію 2-[5-(фуран-2-іл)-2Н-1,2,4тані людини (НЕР-2), визначали СД50 та МПК. На триазол-3-ілтіо]ацетату (мкг/мл), що відповідала другому етапі вивчали противірусну активність CD50 та МПК. сполуки за ступенем зниження цитопатичної дії CD50 визначали як таку мінімальну концентравірусу ВВС в культурі клітин НЕР-2. Оптимальний цію досліджуваної речовини(мкг/мл), яка викликарежим противірусної дії піперидинію 2-[5-(фуран-2ла цитотоксичий ефект у половині оброблених іл)-2Н-1,2,4-триазол-3-ілтіо]ацетату в порівнянні з клітинних моношарів через 72 години спостеререферентною речовиною тіотріазоліном, визначаження. Розведення препаратів, що проявляли цили при нанесенні їх: тотоксичний ефект в половині досліджених клітин- за 24 години до інфікування клітин ВВС з наних моношарів визначали за методом Кербера, ступним відмиванням клітинних моношарів від цитотоксичні концентрації обчислювали стандартдосліджуваних речовин; ним методом. - за 2 години до інфікування клітин ВВС з наМаксимальну переносиму концентрацію (МПК) ступним відмиванням клітинних моношарів від визначали експериментальне як таку концентрадосліджуваних речовин; цію 2-[5-(фуран-2-іл)-2Н-1,2,4-триазол-3- під час адсорбції вірусу на весь період його ілтіо]ацетату (мкг/мл) (мкг/мл), що, за даними прирепродукції; життєвого цитологічного дослідження, не виклика- через 2 години після адсорбції вірусу на весь ла цитотоксичної дії в жодному з оброблених ними період його репродукції. 1. Дослідження цитотокклітинних моношарів впродовж 72 годин екс посичної дії 2-[5-(фуран-2-іл)-2Н-1,2,4-триазол-3зиції. ілтіо]ацетату, визначення СД50 та МПК Встановлено, що CD50 піперидинію 2-[5Суспензію клітин культури НЕР-2 у ростовому (фуран-2-іл)-2Н-1,2,4-триазол-3-ілтіо]ацетату середовищі (PC) на основі середовища ДМЕМ з складає 1250мкг/мл і знаходиться в межах від додаванням 10% сироватки крові ембріонів корів 1051,12 до 1486,5мкг/мл. МПК цієї речовини дорівнює 625мкг/мл і знаходиться в межах від 525,56 до та антибіотиків в посівній концентрації 5 105кл/мл 743,25мкг/мл. вносили у лунки культурального 96-лункового 2. Дослідження противірусної дії 2-[5-(фуран-2планшета і культивували 24 години при 37°С в іл)-2Н-1,2,4-триазол-3-ілтіо] ацетату атмосфері 5% СО2 до утворення суцільного моноВивчали противірусну активність піперидинію шару, якість якого контролювали під інвертованим 2-[5-(фуран-2-іл)-2Н-1,2,4-триазол-3-ілтіо] ацетату, мікроскопом. в порівнянні з референтною речовиною тіотріазо40,0мг піперидинію 2-[5-(фуран-2-іл)-2Н-1,2,4ліном, за ступенем зниження цитопатичної дії ВВС триазол-3-ілтіо]ацетату повністю розчиняли у в культурі клітин НЕР-2 в чотирьох режимах, за4,0мл підтримуючого живильного середовища для значених вище. Досліджувану речовину та речокультури клітин, при цьому кінцева концентрація вину порівняння використовували в концентраціях, речовини становила 10мг/мл (10000мкг/мл). Одеяка дорівнювали МПК, відповідно 625мкг/мл та ржаний розчин стерилізували фільтруванням че550мкг/мл. Результати досліджень представлені в рез міліпоровий фільтр з діаметром пор 0,22мкм. таблицях 1-4. Таблиця 1 Визначення противірусної активності піперидинію 2-[5-(фуран-2-іл)-2Н-1,2,4-триазол-3-ілтіо]ацетату при його застосуванні одночасно з інфікуванням клітинної культури НЕР-2 ВВС та дією сполуки впродовж всього періоду репродукції вірусу Години 24 31 48 72 120 BBC lg 2,5 3,5 5,0 >10 >10 ВВС+сполука* lg 1,5 2,0 3,5 3,5 >10 lg 1,0 1,5 1,5 >6,5 0 ВВС+тіотріазолін 1,0 1,0 4.0 6,5 >10 lg 1,5 2,5 1,0 >3,5 0 5 18863 Встановлено, що найбільш ефективно піперидиній 2-[5-(фуран-2-іл)-2Н-1,2,4-триазол-3ілтіо]ацетат пригнічує репродукцію ВВС при застосуванні одночасно з інфікуванням клітинних моношарів вірусом, коли сполука присутня в середовищі культивування впродовж 72 годин. При цьому інфекційна активність ВВС, в порівнянні з контролем (тільки ВВС), зменшувалась більш ніж на 6,5 lg ТЦД50/мл. В той же час, сполука порівняння тіотріазолін при аналогічному режимі застосування пригнічувала репродукцію ВВС більш ніж на 3,5 lg ТЦД50/мл, (різниця між ними перевищує 2,5 lg), що свідчить про більшу противірусну дію піперидиній 2-[5-(фуран-2-іл)-2Н-1,2,4-триазол-3-ілтіо]ацетату в порівнянні з тіотріазоліном при описаному режимі застосування. 6 При внесенні піперидиній 2-[5-(фуран-2-іл)-2Н1,2,4-триазол-3-ілтіо]ацетату у середовище культивування через 2 години після адсорбції ВВС на весь період його репродукції, найбільша противірусна активність сполуки спостерігалась через 120 годин після інфікування; при цьому інфекційна активність ВВС зменшувалась більш ніж на 4,75 lg ТЦД50/мл, а сполука порівняння тіотріазолін пригнічувала ВВС більш ніж на 2,0 lg ТЦД50/мл, (різниця між ними перевищує 2,5 lg), що свідчить про більшу противірусну дію піперидиній 2-[5-(фуран2-іл)-2Н-1,2,4-триазол-3-ілтіо]ацетату в порівнянні з тіотріазоліном при описаному режимі застосування. Результати досліджень представлені в таблиці 2. Таблиця 2 Визначення противірусної активності піперидинію 2-[5-(фуран-2-іл)-2Н-1,2,4-триазол-3-ілтіо] ацетату при його застосуванні через 2 години після адсорбції ВВС та дією впродовж всього періоду репродукції вірусу Години 20 24 48 72 120 ВВС+сполука* 2,0 2,0 2,5 2,5 5,25 ВВС lg lg 2,0 2,0 2,5 3,5 >10 При внесенні піперидиній 2-[5-(фуран-2-іл)-2Н1,2,4-триазол-3-ілтіо]ацетату у середовище культивування за 24 або за 2 години до адсорбції з наступним відмиванням, противірусної дії у зазначеної сполуки виявлено не було, так як зменшення lg 0,0 0,0 0,0 1,0 >4,75 Ввс+тіотріазолін lg 2,0 2,0 2,5 3,0 >10 lg 0,0 0,0 0,0 0,5 >2,0 інфекційної активності ВВС у клітинних моношарах, оброблених піперидиній 2-[5-(фуран-2-іл)-2Н1,2,4-триазол-3-ілтіо]ацетатом, в порівнянні з контролем (тільки ВВС), не перевищувало 2,5 lg. Результати досліджень представлені в табл. 3-4. Таблиця3 Визначення противірусної активності піперидинію 2-[5-(фуран-2-іл)-2Н-1,2,4 триазол-3-ілтіо]ацетату при його застосуванні за 24 години до адсорбції ВВС з наступним відмиванням клітинних моно шарів Години 24 48 54 96 ВВС+сполука* lg 1,5 2,75 3,0 >10 BBC lg 1,5 3,5 5,0 >10 lg 0 0,75 2,0 0 ВВС+тіотріазолін lg 1,5 3,0 4,0 >10 lg 0 0,5 1,0 0 Таблиця 4 Визначення противірусної активності піперидинію 2-[5-(фуран-2-іл)-2Н-1,2,4-триазол-3-ілтіо]ацетату при його застосуванні за 2 години до адсорбції ВВС з наступним відмиванням клітинних моно шарі Години 20 24 48 72 120 ВВС+сполука* lg 1,5 1,5 3,5 3,0 >10 ВВС lg 2,0 2,5 3,5 3,5 >10 lg 0,5 1,0 0 0,5 0 ВВС+тіотріазолін lg 1,5 2,0 3,5 3,5 >10 Сполука* - піперидиній2-[5-(фуран-2-іл)-2Н-1,2,4-триазол-3-ілтіо]ацетат lg 0,5 0,5 0 0 0 7 18863 Одержані результати дозволяють передбачити, що сполука піперидиній 2-[5-(фуран-2-іл)-2Н1,2,4-триазол-3-ілтіо]ацетат при подальших дослідженнях її противірусної дії на тваринах, може виявитись ефективною при застосуванні з лікувальною метою і бути не ефективною при профілактичному застосуванні. Комп’ютерна верстка Н. Лисенко 8 Можливий механізм дії піперидинію 2-[5(фуран-2-іл)-2Н-1,2,4-триазол-3-ілтіо] ацетату модифікація клітинної мембрани, яка перешкоджає адсорбції вірусу на поверхні клітини та утворенню комплексу вірусу з мембранними рецепторами, або рецепторному ендоцитозу. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 Комп’ютерна верстка Н. Лисенко Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601