Спосіб визначення катіонів в слині та шлунковому соку

1. Спосіб визначення катіонів в слині та в шлунковому соку, який включає підготовку проби, її дослідження та оцінку результатів, який відрізняється тим, що пробу слини, шлункового соку центрифугують, фільтрують; фільтрат об'єднують з буферним розчином, а потім досліджувану рідину вводять в капіляр приладу, на вхід якого подають високу напругу позитивної полярності, проводять електрофоретичне виділення катіонів; виявлені катіони надходять на фотометричний детектор, реєструються на електрофореграмі у відповідній послідовності у вигляді піків над ізолінією, кількість виявленого катіона в пробі визна U 2 (19) 1 3 19536 4 альтернативою інвазивним методам та досліроду, зануреного в досліджуємий розчин [5]. Знадженням, наприклад, крові. Збирання шлункового чення потенціалу электроду дозволяє робити високу відбувається за допомогою зондів. Досягненсновок про активність присутніх у розчині іонов ня при створенні аналітичної техніки сприяють калію, натрію, кальцію та ін. Для виконання спосорозширенню методів досліджень слини та шлунбу використовують різноманітні конструкції іоносекового соку, вдосконаленню засобів досліджень їх лективних аналізаторів. складу. Катіони К, Na, Са, Мg та ін. входять до До числа найбільш відомих аналізаторів такоскладу слини, шлункового соку, крові та ін. біологіго типу - відносяться аналізатор іонного складу чних рідин організму, являються їх структурними біологічних рідин «Easylyte» фірми «Медика», елементами. аналізатори «Elektrolyte-2» фірми «Бекман» та ін. Зусилля досліджувачів направлені на пошуки Спосіб іонометричного визначення, як найбільш та розробку більш досконалих засобів вивчення близький до заявленого способу; технічної суті та складу біологічних рідин. Це важливо як для діагдосягаємому ефекту, прийнятий за найближчий ностики захворювань, так і для розуміння їх мехааналог. Недоліки найближчий аналогу полягають в нізму розвитку та протікання. недостатній ефективності використання поширеної Засоби визначення катіонів відомі. Відомий номенклатури критеріїв якості; обмеження можлиспосіб визначення катіонів калію, натрію, та ін. востей збільшення чутливості при ідентифікації, елементів у біологічних рідинах шляхом пламенної що в сукупності запобігає підвищенню об'єктивнофотометрії [5]. Спосіб являється емісійним, спектсті оцінки та точності, а також недоступність приральним і ґрунтується на тому, що катіони (К, Na, ладів закордонних фірм для використання через їх Са, Мg та ін.) при збудженні їх атомів дають хараквисоку вартість. терний спектр випромінювання. Інтенсивність виВ основу корисної моделі поставлена задача промінювання спектру залежить від концентрації розробити такий спосіб визначення вмісту катіонів речовини. Збудження атомів досягають введенням в слині та шлунковому соку, яка забезпечувала б їх розчинів у полум'я. Спектр, який випромінюється визначення широкого спектру катіонів з високою досліджуваною речовиною, направляють крізь точністю за короткий проміжок часу, був простим світлофільтри на фотоелемент і по силі виникненпри використанні, не вимагав дефіцитних реактиня струму, який вимірюють мікроамперметром, вів та коштовних приборів. роблять висновок про наявність елементу. Означений вище технічний результат досягаДля реалізації способу необхідна подача газу ється тим, що у відомому способі визначення катіу прилад під строго визначеним тиском, це потреонів в слині та шлунковому соку шляхом капілярбує додаткових стабілізуючих пристроїв. Невиконого електрофорезу, який містить підготовку нання даної умови знижує точність способу. Крім проби, центрифугування в технологічно пройнятотого, для виконання аналізу і розрахунку результаму режимі, ідентифікацію на заданій довжині хвилі тів дослідження, необхідно підтримувати постійну аналізатора, та якісно-кількісний аналіз, згідно з температуру джерела випромінювання, що не корисною моделлю, сканують оптичну щільність завжди може бути точно виконано. Аналітичний поляризованих проб, перетворюють її у аналогосигнал залежить від концентрації збуджених атово-цифровий сигнал, отримують електрофореграмів, яка дуже мала порівняно з загальною конценми, з яких ідентифікують амплітуди сигналів катіотрацією атомів. Це ускладнює та обмежує викоринів, при відповідній полярності потенціалів стання полум'яної фотометрії. джерела живлення. Поляризація проб здійснюєтьВідомий спосіб атомно-абсорбційної спектрося першими буферними розчинами, між поляризофотометрії [5], який оснований на поглинанні атованими пробами та другими буферними розчинамами внесеного у полум'я досліджуваного елемеми розміщують капілярну трубку, з можливістю нту, при проходженні крізь нього підтримки тиску 30мБар протягом 5сек в її порожмонохроматичного випромінювання, генеруємого нині, та впритул до капілярної трубки встановлюспеціальним джерелом світла. Поряд з перевагають аналізатор, а сканування оптичних щільностей ми даного методу (висока чутливість, селективполяризованих проб здійснюють під час міграції ність) існують і недоліки: на кожен визначаємий останніх крізь капілярну трубку. Перший буферний елемент повинно бути джерело випромінювання; в розчин для ідентифікації профілю катіонів формуодин відрізок часу можно визначити тільки один ють у вигляді суміші бензимідазолу, винної кислоелемент; необхідна довгочасна пробопідготовка. ти, 18-краун-6 та води дистильованої, взятих у Цей спосіб, як і спосіб рентгеновської спектроскопії співвідношенні 3,0:1,0:2,0:4,0см3. Другі буферні і нейтронно-активаційного аналізу, потребують розчини отримують змішуванням 1см3 буферного наявності коштовної апаратури. розчину №1 та 9см3 дистильованої води. Відомий спосіб визначення калію і натрію в Перетворення результатів сканування в анаслині [6], включаючий вплив ультразвуку на слину. логово-цифровий сигнал засвідчує витончену, При цьому визначають зміни швидкості ультразвубільш прозору графологічну картину поточної проку, проходжуємого крізь слину при температурі би. Виготовлення буферних розчинів дозволяє 30°С та 37°С порівняно з дистильованою водою; отримати та підготовити форетичне й електрофопри таких же температурах і обчислюють значення ретичне середовище для відтворення процесу, калію та натрію в молях на літр за формулами. забезпечує поляризацію проби, міграцію її компоВ останній час в клініко-лабораторній практиці нентів, та виявлення кількісного вмісту. Центрифузастосовують методи іонометричного визначення гування проби зі швидкістю 6000об/хв протягом 5 іонів К, Na та ін., що полягають в вимірюванні елехвилин переслідує її дегазацію для безперешкодктрохімічного потенціалу іоноселективного електного потрапляння в порожнину капілярної трубки 5 19536 6 та подальшого переміщення. Змішування проб з отримують першу електрофореграму, яка являє першими буферами передбачає поляризацію прособою набір позитивних піків над базовою лінією. би та подальше розпізнання при скануванні. РозОтримані аналітичні сигнали у вигляді піків на елеміщення капілярної трубки між поляризованими ктрофореграмі використовують для ідентифікації пробами та другими буферними розчинами відтта кількісного визначення. Концентрацію в пробі ворює капілярний електрофорез, сприяє перемівизначають за допомогою калібрувального графіку щенню проби для остаточної ідентифікації та розпо площі піку даного катіону. Запропонованому пізнання. Отже сукупність умов відтворення об'єкту притаманні високий рівень рентабельності капілярного електрофорезу виключає необхідність та автоматизації, швидкість визначення вмісту, використання хімічних засобів, забезпечує оптивідсутність необхідності використання додаткових мальні рівні поляризації, стабілізує експозицію реагентів для виділення компонентів проби та інтервалів між періодами їх виділення в пробі. простота відтворення. Означені властивості капілярного електрофорезу Виконання запропонованого способу реєструістотно збільшують чутливість ідентифікації, що ється певними прикладами. забезпечує підвищення об'єктивності та вірогідноПацієнт Г. 48 років, практично здоров. сті визначення. 01.06.2006 провели збирання слини та шлункового Спосіб визначення катіонів калію, натрію, магсоку традиційними прийомами та досліджували їх нію, кальцію в слині та шлунковому соку виконують на вміст катіонів. Дослідження проводили на пришляхом капілярного електрофорезу за допомогою ладі «Капель 103Р». З 8см3 слини, 30см3 шлункоприбору "Капель 103Р" російської фірми "Люмекс", вого соку відібрали в окремі пробірки Епендорфа ваг лабораторних, дозаторів пипеточних змінних по 5см3 рідини. Відібрані проби центрифугували обсягів, рН-метру, програмного забезпечення "Мупротягом 5хв. при швидкості 6000об/мин; профільльтихром". трували крізь целюлозно-ацетатні фільтри та зміСпосіб включає ряд послідовних етапів: відбір шали у співвідношенні 1:1 з буферним розчином та підготовку проби досліджуваної рідини, підгото[2]. Провели підготовку капіляру приладу шляхом вку капіляру приладу до роботи, введення дослійого промивання рідинами, які вказані вище, проджуваної рідини в капіляр, розподіл компонентів тягом 5хв. В режимі приладу «Введення проби» проби, виявлення і реєстрацію процесу на електдосліджувану рідину вводили в капіляр приладу рофореграмі, обробка результатів дослідження. під тиском 30мБар протягом 5с. Після введення Збирання слини або шлункового соку для доспроби на вхід капіляру встановили пробірку з булідження виконують відомими методами. Пробу ферним розчином та підключили напругу 10кВ досліджуваної рідини в об'ємі 5см3 поміщають в позитивної полярності. При положенні перемикача пробірку Епендорфа, центрифугують протягом 5 приладу в режимі «Аналіз» проводили виділення хвилин зі швидкістю 6000обертів/хв, а потім фільткатіонів в електричному полі. їх міграція з різною рують крізь целюлозно-ацетатний фільтр. Відбишвидкістю фіксувалась на електрофореграмах, рають за допомогою дозатору 300мкл досліджувапредставлених на Фіг.1, 2 у вигляді піків. На Фіг.1 ної рідини і перемішують її з 300мкл буферного представлена електрофореграма досліджуваної розчину [2]. Капіляр приладу перед дослідженням слини. Визначена площа піків катіонів, використопромивають по 5 хвилин розчинами: хлороводневує калібрувальний графік встановила, що дослівої кислоти, дистильованої води, натрію гідроксиджувана слина містить 278,5мг/дм3 калію, ду, робочим буферним розчином [1]. Пробірку з 178,1мг/дм3 натрію, 6,06мг/дм3 магнію, 2,78мг/дм3 підготовленою пробою встановлюють на вході кальцію. Відповідним чином розрахували вміст капіляру, пробірку з буферним розчином [1] - на катіонів в досліджуваній рідині шлункового соку виході капіляру. Між пробою, що змішана з другим (див. Фіг.2). Встановили, що шлунковий сік містить буфером, та електролітичним середовищем, фун267,8мг/дм3 калію, 721,7мг/дм3 натрію, 13,12мг/дм3 кцію якого виконує перший буферний розчин, магнію, 29,15мг/дм3 кальцію. встановлюють капілярну трубку, з можливістю підЗаявляємий спосіб визначення катіонів в слині тримки тиску 30МБар протягом 5 секунд в її порота шлункового соку використаний в умовах лабожнині, встановлюють аналізатор оптичної щільнораторії ДП "Дніпростандартметрологія". Всього сті впритул до капілярної трубки та комутують виконано 30 аналізів дослідження слини та 30 ланцюги високовольтного живлення. Проведення аналізів дослідження шлункового соку, отриманих аналізу протягом 20 хвилин відбувається за умов у людей з захворюваннями органів травлення та у підключення джерела електричного струму напрувідносно здорових осіб. гою 10кВ позитивної полярності. Розподіл компоРобота, згідно з заявленим способом може бунентів суміші рідин здійснюється за рахунок розти виконана в умовах звичайної лабораторії при ходження швидкостей їх міграції в капілярі, який кімнатній температурі, атмосферному тиску та находиться під впливом електричного струму. За вологості, згідно з вимогами до лабораторії. Сподопомогою детектора, розміщеного впритул до сіб забезпечує високу чутливість розпізнання комкапіляру, сканують оптичні щільності проб і реєстпонентів, точність дослідження, швидкість визнарують компоненти, що не мають поглинання на чення і головне для виконання аналізу необхідна довжині хвилі 253,7нм. Відбувається так зване мала кількість проби, що дозволяє досліджувати "непряме детектування", цей процес досягається біологічні рідини невеликого об'єму. Спосіб збивведенням у головний [1] електроліт невеликих рання об'єктів дослідження (слини та шлункового концентрацій речовин, що поглинаються на потрісоку) простий, доступний та безпечний для любній довжині хвилі. Шляхом перетворення даних дини. сканування проби в аналогово-цифровий сигнал Джерела інформації: 7 19536 8 1. В. Е. Зайчик, Ш.Т. Багиров Содержание хи3. А.И. Рыбаков, B.C. Иванов Клиника терапемических элементов в смешанной, нестимулировтической стоматологии. М.,1980. ванной слюне здорового человека.// Стоматоло4. И. В. Григорьев, А.А. Чиркин Роль биохимигия. - 1991. - №1. - С.14-17. ческого исследования слюны в диагностике забо2. Ш.Т. Багиров, В.Е. Зайчик, В.М. Калашников леваний. // Клинич. лаборатор. диагностика - 1998. Физиологическая изменчивость концентрации хи- №6. – С.18-20. мических элементов в смешанной, нестимулиро5. Клинико-биохимическая лабораторная диаванной слюне человека (натрий, хлор, кальций).// гностика. Справочник. B.C. Калашников. 2003. Азейбарджанский мед. журн. - 1985. - №8. 6. Заявка №2004111022 РФ МПК G01N33/68 С.29-34. Способ определения калия и натрия в слюне. Опубликована 2005.10.10. Комп’ютерна верстка В. Мацело Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601