Засіб, що має інтерфероногенну та антибластичну активність

Изобретение относится к медицине, конкретно к фармакологии вещества, которые стимулируют выработку интерферона и одновременно обладают антибластическими свойствами. Аналоги по структуре, обладающие сходным спектром активности, в литературе не описаны, среди известных лекарственных средств не обнаружены. Известно применение средств для повышения выработки эндогенного интерферона у животных с помощью выделения двухспиральных полирибонуклеатидов [1], а также вирусов [2], однако применение указанных препаратов, а особенно вирусов для ускорения выработки интерферона у человека исключается и допустимо лишь в экспериментах на животных в силу опасности для здоровья. Известны индукторы интерферона поли (И) и поли (Ц) и его аналог [3]. Использование этих препаратов крайне ограничено, так как они вызывают аллергические реакции, токсичны и дорогостоящи. Аналогом по интерферогенному действию является мефенаминовая кислота [4]. Однако она обладает раздражающим действием на желудочно-кишечный тракт и вызывает агранулоцитоз. Все перечисленные выше индукторы интерферона не обладают антибластическими свойствами. В медицине применяются антибластические препараты, относящиеся к разным классам органических соединений. Все известные противораковые препараты - депрессанты. Ни одно из этих соединений не обладает интерфероногенным действием. Ближайшим аналогом по типу действия является натулан (прокарбазин), применяемый при злокачественных заболеваниях лимфатических тканей [5]. Задачей изобретения является поиск таких химиотерапевтических препаратов, которые проявляли бы одновременно повышенную интерферогенную и антибластическую активность и обладали бы низкой токсичностью. Поставленная задача достигается применением диметоксиуреидофосфорной кислоты формулы в качестве средства, обладающего интерферогенной и антибпастической активностью. Указанное соединение диметоксиуреидофосфорной кислоты (СПС) известно как химическое соединение [6], однако фармакологические свойства этого вещества не описаны. Принцип действия предлагаемого технического решения основан на впервые установленном авторами интерфероногенном и антибластическом действии этого соединения. Поставленную задачу решают за счет использования СПС в качестве индуктора интерферона и ингибитора опухолей. Синтез диметоксиуреидофосфорной кислоты, острая токсичность и антибластические свойства ее осуществлены в Институте фармакологии и токсикологии АМН Украины. Интерфероногенная активность заявляемого соединения диметоксиуреидофосфорной кислоты (СПС) изучена в Киевском научноисследовательском институте эпидемиологии и инфекционных заболеваний им. Л.В. Громашевского. В 3-горлый реактор наливают 150мл метанола, при хорошем перемешивании и охлаждении льдом (температура реакц. массы 17°C) небольшими порциями прибавляют 14г (0,08 моля) сухого ди хлорангидрида уреидофосфорной кислоты. Дихлорангидрид уреидофосфорной кислоты получают следующим способом. В 3-горлый реактор, снабженный мешалкой и термометром, наливают 100мл уксусного ангидрида и присыпают 20г (0,33 моля) мочевины. Затем медленно при хорошем перемешивании и охлаждении (температура реакционной смеси не выше 10 - 12°C) прикапывают 51,92г (31мл, 0,34 моля) свежеперегнанной хлорокиси фосфора. Перемешивают примерно 15 минут. Затем отфильтровывают выпавший осадок на бюмнеровской воронке, промывают эфиром. Выход - 19,3г (57% теории). Перемешивают реакционную массу 40 50мин, отфильтровывают и промывают эфиром выпавший осадок. Выход - 10г (75% теории). Т.пл. - 160 - 162°C. Найдено: C 41,45, H 5,39, N 16,35, P 11,85 C9H14N3O 4P. Вычислено, %: C 41,70, H 5,44, N 16,20, P 11,95. ИК-спектр (KBr) диметоксиуреидофосфорной кислоты: (n NH) 3210см-1; (n p = 0) 1220см -1; (n C=O) 1680см-1 Rf × 100 = 83 (на пластинках с закрепленным слоем "Silufol UV-254", подвижная фаза - этанол : вода = 10 : 10. Диметоксиуреидофосфорная кислота представляет собой более кристаллическое вещество хорошо растворимое в воде, трудно растворимое в спирте. Определение интерфероногенной активности диметилуреидофосфорной кислоты (СПС). Беспородной мышке весом 20,0г (самке) внутрибрюшинно вводят 0,2мл раствора СПС из расчета 50мг/кг веса. Через 6 часов в сыворотке крови мыши определяли содержание интерферона известным способом. Содержание интерферона в сыворотке крови мыши составляло 640ед/мл, тогда как у контрольной мышки (самки такого же веса) содержание интерферона составляло 20ед/мл, что указывает на значительное интерфероногенное воздействие соединения СПС и возможность его использования как индуктора интерферона. Для определения оптимальной дозы введения вещества СПС берут 60 беспородных мышей весом 16 - 20г - 5 серий по 12 мышей и вводят внутрибрюшинно препарат СПС-1 по 0,2мл в дозировках от 0,25 до 125мг/кг веса животного. Результаты проведенных исследований представлены в табл.1. Из представленных данных видно, что оптимальной дозой препарата является 50 100мг/кг веса, которая наиболее эффективно обеспечивает достижение поставленной задачи повышение индукции интерферона. 100 беспородным мышам внутрибрюшинно вводят вещество СПС согласно настоящему изобретению. Для сравнения по известному способу 100 беспородным мышам вводят препараты Поли(И) - Поли(Ц) Результаты проведенных исследований представлены в табл.2. Таким образом, предлагаемый индуктор интерферона стимулировал его выработку в достаточно высоких титрах. Берут 1мл извести лимфоцитов человека в концентрации 1 × 106 и добавляют 0,1мл раствора (СПС) из расчета 1мг/мл. Смесь инкубируют в течение 18 часов в термостате при 37°C. Определение интерферона в надосадочной жидкости проводят по общепринятой методике. Содержание интерферона в опытной надосадочной жидкости составляет 640ед/мл, тогда как в контрольной интактной культуре клеток оно равно 20ед/мл. Таким образом, предложенным веществом достигается получение положительного эффекта усиление индукции интерферона в 16 раз. Для определения технических параметров осуществления способа ин витро в культуре лимфоцитов человека берут 1мл суспензии лимфоцитов крови человека, содержащей 1 × 106кл/мл. Пробирки разделяют на серии по 4 пробы в каждой - всего 3 серии. В каждой серии проб исследуют интерфероногенное воздействие определенной концентрации СПС: от 0,1 до 1,5мг/мл по общепринятой методике. Результаты исследований представлены в табл.3. Таким образом, оптимальной дозой для достижения положительного эффекта является доза 1мг/кг. Определение положительного эффекта предлагаемого индуктора интерферона СПС в лимфоцитах крови человека. Берут 1мл взвеси лимфоцитов крови человека, содержащей 1 - 106кл/мл и согласно предлагаемому способу добавляют раствор препарата СПС-1. Исследования проведены на 50 таких пробах. Концентрация интерферона в надосадочной жидкости в среднем составляла 640ед/мл акт. Для сравнения, на такую же пробу лимфоцитов воздействуют известным индуктором Поли(И) - Поли(Ц). Проведено 50 исследований. Концентрация интерферона в надосадочной жидкости составляла в среднем 640ед/мл акт. Таким образом, предлагаемый индуктор интерферона обладает эффективностью на уровне известного, кроме того, он менее токсичен. Эксперименты проведены на белых нелинейных мышах и крысах обоего пола массой соответственно 22 ± 2г и 160 ± 2г разводки ветклиники Института фармакологии и токсикологии АМН Украины и Питомника АН Украины, содержащихся на стандартном пищевом рационе. Представленное соединение хорошо растворимо в изотоническом растворе натрия хлорида. В качестве препарата-стандарта использован широко применяемый в онкологической практике препарат - натулан. Изучение параметров острой токсичности проведено в опытах на белых нелинейных мышах. Соединение вводилось однократно, подкожно. Результаты опыта учитывались в альтернативной форме на 14 - ый день после затравки. Статистическая обработка проведена по В.Б. Прозоровскому и др. [7], табл.5. Эксперименты показали, что изученное соединение относится к малотоксичному, его ЛД50 составляет 477мг/кг, что значительно ниже (более чем в 2 раза), чем у тест-стандарта натулана. Противоопухолевая активность изучена на перевивных моделях экспериментального опухолевого роста различного истогенеза: саркоме-180, лимфосаркоме Плисса, карциносаркоме Уокера, саркоме-45, меланоме B16, эпидермоидной карциноме легких Льюис. Трансплантация опухолевого материала осуществлялась путем подкожного введения 106 опухолевы х клеток на среде 199 в правую подмышечную область в объеме 0,3мл. Введение вещества как потенциального противоопухолевого агента начинали через 24 часа после трансплантации лимфосаркомы Плисса, через 48ч после трансплантации карциносаркомы Уокера, эпилермоидной карциномы легких Льюис и на 4 - й день после трансплантации саркомы 180, саркомы 45 и меланомы B-16. Курс лечебных воздействий состоял из 6 внутрибрюшинных введений через день. Представленное соединение вводилось в соответствии с рекомендациями [2] в интервале, доз 1/4 - 1/5 ЛД50 (ХТИ-4, ХТИ-5), включавшие дозы вещества, вызывающие наиболее выраженный, т.е. оптимальный противоопухолевый эффект. Результаты экспериментов учитывались через 24 часа после окончания лечения. Критерием оценки служил процент торможения роста опухоли, индекс эффективности. Как показывают эксперименты (табл.5), соединение обладает выраженной способностью тормозить экспериментальный опухолевый рост. Значительная противоопухолевая активность зарегистрирована на саркоме 180 (89,9 - 87,9% торможения роста опухоли), что значительно выше, чем у натупана (47,3% торможения роста опухоли). Высокий эффект СПС отмечен и на лимфосаркоме Плисса - 86,3% торможения роста опухоли. На этом штамме натулан показал эффект выше критерия значимости для данного штамма; но противоопухолевый эффект значительно ниже чем у представленного соединения. На эпидермоидной карциноме легких Льюис СПС проявил активность равную критерию значимости для данного штамма (57,0% торможения роста опухоли). У натулана на этом штамме эффект вообще отсутствует. На меланоме B-16 противоопухолевое действие СПС-1 несколько превышает эффект натулана. На саркоме 45 у натулана отмечен высокий противоопухолевый эффект (92,1% торможения роста опухоли). На данном штамме СПС проявил более низкую активность, но последняя превышает критерий значимости. На карциносаркоме Уокера СПС не активен. Отмеченные показатели противоопухолевой активности (СПС) были получены при отсутствии значительных изменений массы животных, селезеночного коэффициента. Помимо вышеперечисленного СПС более чем в 2 раза менее токсичен, чем натулан. В целом, проведенные эксперименты показали, что СПС обладает значительной противоопухолевой активностью на ряде моделей опухолевого роста (саркома 180, лимфосаркома Плисса, меланома B-16, эпидермоидная карцинома легких Льюис), превосходящей таковую у препарата-стандарта натулана и на меланоме B16 у оксиметилмочевины. На саркоме 45 СПС уступает по противоопухолевому эффекту натулану, что указывает на различие в спектрах противоопухолевого действия.