Штам гриба сylіndrосаrроn маgnusіаnuм для одержання препарату, що регулює ріст рослин

Завантажити PDF файл.

Формула / Реферат

Штамм гриба Cylindrocarpon magnuslanum IMB F-100004 для получения препарата, регулирующего рост растений.

Текст

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и биотехнологии и представляет собой новый штамм микроскопического гриба для получения препарата, стимулирующего рост растений. Научно-техническая революция, распространяющаяся и на сельскохозяйственное производство, создавала интенсивные системы земледелия, позволяющие получать большие урожаи. Однако побочным следствием интенсификации является загрязнение окружающей, среды. В технологиях производства сельскохозяйственной продукции этому вопросу уделяется недостаточно внимания. В то же время использованию химических средств повышения урожайности сельскохозяйственных культур имеются альтернативные подходы - применение, препаратов микробного происхождения, экологически безопасных для окружающей среды. Известно широкое применение штаммов микроорганизмов в качестве регуляторов и стимуляторов роста растений, властности, клубеньковых бактерий [Авт. св. № 1555320; Авт. св. № 1698242; Авт. св. № 1699990; Авт.св. № 1565831], мицелиальных микроорганизмов - микромицетов, актиномицетов, стрептомицетов и др. [Авт.св.. № 1423550; Авт.св. № 1433956; Заявка Великобритании № 1392093; Патент США № 4818530; Патент США № 4595589; Заявка ЕПВ № 0337483]. Однако действие этих монокультур узкоспецифично и направлено на стимуляцию и регуляцию роста одного вида растений и на определенном этапе его развития. Известны также регуляторы роста растений более широкого спектра действия [Германия эк.п. № 292152; Япония В4 № 4-42355, Патент США № 4985060; Авт.св. № 1701714]. В то же время они представляют собой комплекс нескольких микроорганизмов или микроорганизмов и химических веществ, что затрудняет их получение и повышает затраты. Наиболее близким к предполагаемому изобретению является штамм актиномицета Frankia sp. для получения препарата, стимулирующего рост облепихи [Авт.св. № 1423550]. Как и предполагаемое изобретение, штамм относится к мицелиальным микроорганизмам, представляет собой монокультур у, обладает высокими инфекционностью и стимулирующей активностью роста, выделен из корневых клубеньков Shepherdla argentea, принадлежащей к семейству ло ховых, как и облепиха - источник выделения предлагаемого изобретения, находится в симбиотических отношениях с растением, улучшает его питание, способен к азотфиксации и используется для получения препарата, стимулирующего рост растений. Применение препарата, полученного на основе штамма Frankia sp. В KM Ac - 1097Д, ускоряет рост 3-х месячных растений облепихи в 1,9 раза. Недостатком прототипа является его узкоспецифичность - оказывает стимулирующее действие на рост только облепихи и необходимо внесение препарата непосредственно в почву. Задачей предлагаемого изобретения является получение нового штамма микроскопического гриба для получения препарата, регулирующего рост широкого спектра растений и применяемого на различных стадиях их развития. Задача решается получением нового штамма микромицета Cylindrocarpon magnu-slanum Штамм выделен из корневой системы облепихи. Идентифицирован по Пидопличко Н.М. Грибы - паразиты культурных растений. - К.: Наукова думка. - 1977, т. 2. - С. 275-276; Domsh K.H., Gams W. Compendium of soil furtgi. - 1980, 1. - p. 245-247. Штамм депонирован в Институте микробиологии и вирусологии НАН Украины под ISb ИМВ F-100004. Морфологическая характеристика штамма. При микроскопировании культуры, выращенной на агаризованной среде сусло, среде Чапека, картофельном агаре, гифы 2,0-3,0 мкм толщиной, не окрашенные, разветвленные, часто в тяжевидных пучках. Конидиеносцы одиночные, простые, слаборазветвленные, суживающиеся к верхушке, размеры 10,020,0 χ 2,9-3,5 мкм. Конидии' цилиндрические, прямые, реже слегка согнутые, закругленные на концах или тупоко-нусовидные с сосочком у основания, с 0-3 перегородками, чаще с 1 перегородкой, размеры 10,0-42,5 χ 3,0-5,3 мкм. Хламидос-поры 5,0-12,0 мкм в диаметре, сначала неокрашенные, затем коричневые, гладкие, шаровидные или груше видные, интерколярные или верхушечные, одиночные или в коротких цепочках. На жидкой глюкозо-аспарагиновой среде, не сбалансированной по углероду и азоту, в гифа х находится большое количество включений жировой природы сферической либо овальной формы. На картофельном отваре включения встречаются в меньшем количестве и мельче по размеру. Культуральные свойства штамма. Штамм растет на агаризованном пивном сусле, картофельном агаре, среде Чапека, жидкой глюкозоаспарагиновой среде. На агаризованном пивном сусле при 25-28°С колонии пушисто-войлочные, белые до кремоватых или телесных. На обратной стороне - светло коричневые, радиально лучистые. На агаризованной среде Сабуро (пивное сусло + ΜΠΑ в равных соотношениях) в возрасте 15 суток колонии двух типов: 1). Диаметр колонии 80 мм. На расстоянии 25 мм от центра слабо-войлочна, затем (20 мм) пушистая белого цвета. На обратной стороне бесцветная или слабо соломенного оттенка. 2). Диаметр колонии 62 мм, в центре (20 мм) выпуклая, пушистая слегка кремового оттенка, затем (по кольцам) войлочная светло-оливкого цвета, войлочная пушистая желтовато-кремового оттенка, слабо-войлочная слегка фиолетового оттенка, край колонии фиолетово-белого оттенка. Обратная сторона - темно-красно-коричневого цвета. При выращивании в стационарных условиях на жидкой глюкозо-аспарагиновой и сахарозо-аспарагиновой средах рост слизистый, желеобразный бесцветный. На среде с сахарозой при добавлении К - Na лимоннокислого либо аммония лимоннокислого культура растет в виде слегка опущенных пеллет или слизистых сгустков. Культуральная жидкость при этом окрашивается в слегка коричневый цвет. При выращивании на качалке в колбах емкостью 250 мл с 50 мл питательной среды культура растет в виде пеллет либо слизистых тяжей, окрашенных в слегка соломенный или коричневый цвет. На жидких средах с добавлением органических источников азотного питания (смеси аминокислот, пептона), на средах сложного состава (растительные отвары) рост культуры и пигментообразование усиливаются. Физиологические свойства штамма. Штамм растет на дефицитной по азоту среде и является олигонитротолерантным микроорганизмом. На среде с низким содержанием азота фиксирует небольшое количество молекулярного азота - 0,42 мг на 25 мл среды. Развитие штамма улучшается и ускоряется при добавлении в среду легкодоступных связанных форм азотного питания: нитратного, аммонийного, органического. Из источников углеродного питания усваивает глюкозу, сахарозу, крахмал, маннит. Не растет на среде с целлюлозой. В процессе роста в зависимости от состава питательной среды в большей или меньшей степени подкисляет последние (до рН 5,8-3,5). Реакция среды остается без изменений (рН 7,0) при выращивании штамма на глюкозо-аспарагиновой среде. На этой среде культура синтезирует биологически активные вещества - комплекс, состоящий из углеводов, жирных кислот, веществ цитокининовой природы, обладающие ростактивирующими свойства по отношению к сельскохозяйственным растениям. Штамм является микроаэрофильным и мезофильным микроорганизмом. Не требователен к источникам питания. Растет на жидкой глюкозоаспарагиновой среде в колбах на 0,75 л с 0,25 л питательной среды при температуре 22-25°С в стационарных условиях. Культура со храняется без пересевов в течение 6 и более месяцев. Состав среды (г/л): глюкоза - 10,0; аспарагин - 0,02; КН2РО4 -0,9; K2HPO4-0,3;MgSO4-0,1; К 2SО 4-0,1; MnSO4 - 0,02; FeSO4 0,02; CuSO4 - 0,02; вода водопроводная - 1 л, рН 7,0. Биологическую активность штамма определяют путем контроля прироста проростков пшеницы по сравнению с контрольным образом (без обработки). Биологическую активность определяли в пределах 2025%. Для получения препарата проводят культивирование штамма микромицета Cylindrocarpon magnuslanim IMB F-100004 в жидкой питательной среде с последующей экстракцией продуктов биосинтеза 70% раствором этилового спирта в присутствии активированного угля. Перед употреблением препарат разводят водой в соответствии с рекомендациями для каждого вида растений. В культуральной жидкости, включающей биомассу и продукты метаболизма определен состав комплекса стимуляторов роста растений - ауксино- и цитокининоподобные вещества, ненасыщенные жирные кислоты, олигосахариды, повышающие всхожесть семян, ускоряющие развитие корневой системы, повышающие устойчивость растений к заболеваниям и урожайность. Пример получения штамма и его применения. Штамм гриба Calindrocarpon magnusianum 1MB F-100004 выращивают в колбах объемом 750 мл с 250 мл питательной среды следующего состава (г/л): глюкоза - 10,0; аспарагин - 0,02; КН2РО4 - 0,9; К2НРО 4 - 0,3; MgSO4 - 0,1; K2SO4 - 0.1; MnSO 4 - 0,02; FeSO4 - 0,02; CuSO4 - 0,02; вода водопроводная - 1 л; рН - 7,0. Культивирование проводят в стационарных условиях при температуре 22-28°С в течение 30 суток. Для получения препарата проводят экстракцию из культуральной жидкости 70% раствором этилового спирта в присутствии активированного угля. Примеры применения препарата приведены в таблице. Контроль - необработанные растения. Как видно из приведенных данных, применение штамма дает хорошие результаты на таких различных сельскохозяйственных культурах, как ячмень, пшеница, рис, кукуруза, помидоры, огурцы, картофель, лук, подсолнечник, соя, горох и др. и возможно на различных стадиях развития растений.

Дивитися

Додаткова інформація

Автори англійською

Ponomarenko Serhii Platonovych, Іzhеurоvа Valentyna Vasylivna, Herasymenko Stanislav Mykhailovych

Автори російською

Пономаренко Сергей Платонович, Изжеурова Валентина Васильевна, Герасименко Станислав Михайлович

МПК / Мітки

МПК: A01P 21/00, A01N 63/04, C05F 11/08, C12N 1/14

Мітки: одержання, препарату, гриба, регулює, сylіndrосаrроn, маgnusіаnuм, рослин, ріст, штам

Код посилання

<a href="https://ua.patents.su/4-22643-shtam-griba-sylindrosarron-magnusianum-dlya-oderzhannya-preparatu-shho-regulyueh-rist-roslin.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Штам гриба сylіndrосаrроn маgnusіаnuм для одержання препарату, що регулює ріст рослин</a>

Подібні патенти