Спосіб діагностики лімфоїдних неоплазій із зрілих в-клітин за допомогою лектинів

Спосіб діагностики лімфоїдних неоплазій із зрілих В-клітин за допомогою лектинів, який полягає в одночасному визначенні на мембрані злоякі 3 24178 4 походження, які специфічно розпізнають і зв'язуна субстратных клітинах периферичної крові (кільють вуглеводні або глікозидні залишки у складі кість лімфоцитів дорівнює або більше за 5´109/л) глікопротеїнів чи гліколіпідів без каталітичної і моі/або кісткового мозку (відсоток лімфоцитів дорівдифікаційної дії. В літературі описано застосуваннює або більше за 30%). Кров або кістковий мозок ня лектинів як селективних гісто хімічних маркерів забирають з гепарином (10-50од/мл), лімфоцити окремих клітинних популяцій, позаклітинних ткавиділяють у градієнті густини фікол-верографіну нинних структур при вивченні біології розвитку (d=1,077) і готують препарати на предметних склах (ембріогенезі, гістогенезі), в патогістологічній діагтипу "висушеної краплі". Рецептори лектинів виявностиці [6], в тому числі для електронної гістохімії ляють прямим пероксидазним методом, як описарецепторів клітинних мембран [7]. Лектини виконо [12], використовуючи набір лектинів, помічених ристовуються як цитохімічні реагенти для діагноспероксидазою, виробництва НВК "Лектинотест" тики злоякісних новоутворень і їх метастазів [8-10]. (Львів). Підраховують відсоток клітин, що взаємоВ літературі трапляються окремі повідомлення діють з лектином. щодо характеристики глікопротеїнових структур Для визначення інформативності запропономембрани нормальних і злоякісних лімфоцитів, ваного способу діагностики лімфоїдних неоплазій визначених за допомогою лектинів [10, 11, 12]. із зрілих В-клітин за допомогою лектинів було виОднак у цих дослідженнях не використана панель конано дослідження у 97 хворих, серед них 65 лектинів, яка б дозволила охарактеризувати усі хворих на ХЛЛ, 13 - на ВКЛ і 19 випадків лейкемідіагностично важливі вуглеводні детермінанти зованої В-НЗЛ. Діагноз у всіх пацієнтів був встаномембрани злоякісних клітин. Крім того, результати влений на основі клінічної картини, перебігу хводосліджень достатньою мірою не систематизовані роби, морфологічних, цитохімічних та для визначення їх діагностичної вартості для імунофенотипових критеріїв. Контрольну групу для окремих варіантів лімфоїдних неоплазій, не співсвизначення показників експресії лектинових рецетавлені із стандартизованими імунофенотиповими пторів на нормальних лімфоцитах склали 15 здоознаками малігнізованих лімфоцитів. рових осіб (7 чоловіків та 8 жінок середнього віку), Запропонований спосіб діагностики лімфоїдякі не приймали жодних ліків. Статистичн у обробку них неоплазій із зрілих В-клітин за допомогою лекрезультатів проводили з використанням пакету тинів відрізняється тим що: (1) спосіб застосовустатистичного аналізу електронних таблиць Excel. ють для діагностики і диференціальної діагностики Вираховували середнє арифметичне (М), середнє саме лімфоїдних неоплазій; (2) діагностику окревідхилення розподілу (s), стандартне відхилення мих варіантів лімфоїдних лейкемій і злоякісних середнього значення (m). Вірогідність різниці між лімфом здійснюють на основі характеру змін вугсередніми значеннями визначали за критерієм леводних детермінант мембрани злоякісних лімСтьюдента (t). Різницю між вибіркаим вважали фоцитів з урахуванням як вуглеводної і глікозидної вірогідною на рівні ймовірності не менше 95% (р специфічності окремих лектинів, так особливостей менше за 0,05). цих структур, властиви х для окремих варіантів Набір лектинів, необхідних і достатніх для діалімфоїдних неоплазій; (3) як цитохімічні маркери гностики і диференційної діагностики лімфоїдних використовують достатньо повний набір лектинів, неоплазій із зрілих В-клітин, включає аглютинін який включає лектин арахісу (PN A), аглютинін кліарахісу [скорочена міжнародна назва - PNA, спещовини (RCA), лектин виноградного слимака цифічний до антигену Томсена-Фріденрайха (Т(HPL), лектин сої (SBA), лектин сочевиці (LCL), антиген)], аглютинін кліщовини (RCA, взаємодіє з аглютинін зародків пшениці (WGA), лектин кори ланцюгами І і II типу в О- і N-глікозидах), лектин бобівника анагіролистного (LAL), що дозволяє виноградного слимака [HPL, виявляє антиген Форохарактеризувати О- і N-глікозидні структури на ссмана (F-антиген) у О-глікозидах], лектин сої мембрані субстратних клітин. (SBA, антиген А), лектин сочевиці (LCL, реагує з Суттю запропонованої корисної моделі є ствофукозильованими маннозними структурами, корорення алгоритму (способу) діагностики лімфоїдних вої частини N-глікозидів), аглютинін зародків пшенеоплазій із зрілих В-клітин за допомогою лектиниці (WGA, взаємодіє з сіалізованими розгалуженів. ними вуглеводними ланцюгами Поставлена мета досягається тим, що існують поліацетилглюкозамінного типу), лектин кори бобісуттєві відмінності вуглеводних стр уктур мембрани вника анагіролистного (LAL, виявляє термінальну клітин злоякісного клону, що виявляються за дофукозу у вуглеводних ланцюгах, власти ву для Нпомогою лектинів, при В-клітинних лімфоїдних антигену гр уп крові). неоплазіях, а саме: при хронічній лімфоїдній лейНабір перелічених лектинів дозволяє чітко відкемії (ХЛЛ), волосистоклітинній лейкемії (ВКЛ), та різнити ХЛЛ, ВКЛ та лейкемізовані В-НЗЛ за рівлейкемізованих В-клітинних негоджкінських злоякінем експресії на злоякісних клітинах (відсотком сних лімфомах (В-НЗЛ) низького цитологічного позитивно маркованих клітин) вуглеводних стр укступеня, діагностованих на основі цитологічних, тур, які взаємодіють з цими лектинами (табл.1). цитохімічних та імунофенотипових критеріїв. Визначення лектинових рецепторів проводять 5 24178 6 Таблиця 1 Відсоток клітин злоякісного клону, що реагують з лектинами (М±m) Лектини PNA RCA HPL SBA LCL WGA LAL Лімфоцити здорових людей 6,3±1,0 68,5±3,9 4,3±1,0 15,9±1,5 10,9±1,9 61,7±3,9 9,1±1,2 ХЛЛ n=65 ВКЛ n=13 НГЛ n=19 15,2±0,9 32,7±1,4 7,6±0,7 9,0±0,8 12,0±1,1 35,1±2,2 14,4±1,1 70,2±3,3* 45,8±3,1* 18,9±1,1* 11,0±1,9 15,2±2,4 51,6±5,7* 21,8±3,5* 36,5±3,6*/+ 35,2±2,7+ 30,4±1,4*/+ 26,7+1,5*/+ 30,0±1,6*/+ 41,8±3,0 23,7±1,1* Примітки: 1. * позначено величини, які вірогідно відрізняються від показників при ХЛЛ; 2. + позначено величини, які вірогідно відрізняються від показників при ВКЛ. Як видно з таблиці 1, пухлинні лімфоцити при ХЛЛ відрізняються низьким рівнем експресії більшості лектинових рецепторів, зокрема представлених О-глікозидними залишками (лектини PNA, HPL, SBА). Для ВКЛ характерна найвища серед усі х лімфоїдних проліферацій взаємодія волосистих клітин з лектином PNA при низькій експресії інших О-глікозидних детермінант (лектини HPL, SBA). Злоякісні лімфоцити у хворих на лейкемізовані В-НГЛ однаковою мірою добре реагують з використаними для типування лектинами, що свідчить про різноманітність вуглеводних компонентів їх мембрани. На основі проведених досліджень розроблено діагностичну таблицю рівня експресії вуглеводних структур мембрани злоякісних клітин, що взаємодіють з окремими лектинами, при ХЛЛ, ВКЛ, і лейкемізованих НЗЛ з урахуванням довірчого інтервалу M±2s (табл.2). Таблиця 2 Діагностична таблиця рівня експресії глікозидних структур мембрани лімфоцитів, що взаємодіють з лектинами, при окремих лімфоїдних неоплазіях лектини PNA RCA HPL SBA LCL WGA LAL Лімфоцити здорових людей 60% 60%