Антиоксидант

Застосування 2,5,7,8-тетраметил-2-(4-метил3-пентил)-6-ацетатоксихроману формули: СН3СОО СК як антиоксиданта. Однак в Україні немає джерел для його синтезу, а той, вітамін Е, що виробляється з імпортної сировини -дорого коштує і випускається в незначній кількості. В основу винаходу поставлена задача знайти ефективний та дешевий антиоксидант, що одержується з вітчизняної сировини. Ця задача вирішується шляхом застосувауня 2,5,7,8,-тетраметил-2-(4-метил-3-пентіл)-6ацетаксіхромана (він же а-токоференацетат) формули: сн3соо СК в якості антиоксиданту. см О CM 00 CD М 24682 Сербинова Е.А., Бакалова Р.А., Стойчев Я.С., Каган В.Е. Эффективность ингибирования ПОЛ в биомембранах антиоксидантами, содержащими и не содержащими углеводные цепи, БЗБИМ, 1986, 102, №10, С.419-421). Приклад 1 (таблиця 1) ілюструє вплив антиоксиданта на процеси ПОЛ в умовах in vitro. Приклад 2 (таблиця 2) ілюструє вплив антиоксиданта на загальний вміст ліпідів та дієнових кон'югатів, характеризуючих початковий етап ПОЛ в печінці тварин. Приклад 3 (таблиця 3) ілюструє гальмування антиоксидантом процесів ферментативного ПОЛ печінки щурів. Для порівняння у таблицях наведені дані по ефективності вітаміну Е. (Вітамін Е використовувався в концентрації, що дає максимальний позитивний ефект). Антиоксидант, що заявляється, використовувався в усіх прикладах в дозах еквімолярних вітаміну Е, що у ваговому перерахунку на 30% менше. Приклад 1. Дослідження впливу заявляемого антиоксиданта і вітаміну Е на процеси ПОЛ in vitro проведено на щурах-самках, що утримувались на протязі 4-х місяців на дефіцитному по вітаміну Е раціоні. Використовували гомогенати та мітохондрії печінки. 10% гомогенати попередьо інкубували з досліджуваними препаратами на протязі 2-х годин, а мітохондрії - ЗО хв. Вітамін Е використовували у дозі 5 і 35мкг/мл інкубаційного середовища, а заявляємий антиоксидант - в еквімолярній кількості 3,5 і 25мкг/мл. Швидкість утворення малонового діальдегіда (МДА) визначали по різниці між його вихідним вмістом та вмістом після 30хв. інкубації з сірчанокислим залізом-ініціатором процесів перекисеутворення (Див. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.,"Наука", 1972, с.117). Дані представлені у табл. 1. Таблиця 1 Швидкість утворення МДА в гомогенаті та мітохондріях печінки щурів в мкмоль/г тканини (М ± м, п = 9) а-токоференацетат - в'язка масляниста рідина світло-жовтого кольору зі слабким специфічним запахом, практично нерозчинна у воді, добре розчинна в органічних розчинниках, атокоференацетат не змішується з водою, не виділяє токсичних речовин і не утворює вибухонебезпечних сумішей. Густина d 2 0 1,5160 - 1,5210, температура кипіння -132 - 134°С при залишковому тиску 0,04мм рт.ст. Отримують а-токоференацетат слідуючим чином: Спочатку з ліналоола та триметилгідрохінона отримують токоферен, потім ацилюють його оцтовим альдегідом, відганяють оцтову кислоту та виділяють а-токоференацетат високовакуумною розгонкою. Застосування а-токоференацетату, що виготовляється з дешевого синтетичного ліналоола, в якості антиоксиданта заповнить дефіцит вітаміну Е та дозволить відмовитись від дорогої імпортної сировини що купується за валюту та в обмеженій кількості. а-токоференацетат застосовується як кормовий додаток (див. а.с. № 1561935, А23К 1/16,1990, БИ № 17), застосування його в якості антиоксиданту невідоме. Для визначення еффективності антиоксиданту, що заявляється, вивчений його вплив на ферментативні та неферментативні процеси перекисного окислення ліпідів та антиокислювальну активність в умовах in vitro та in vivo. В якості критерію, що характеризує зміни на початкових етапах ПОЛ, використовувалось визначення вмісту в тканинах дієнових кон'югатів (ДК). (Див. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.:"Наука", 1972, с 252.), на кінцевих етапах ПОЛ вивчалась швидкість утвореня малонового диальдегіда (МДА) в тканинах або клітинних органелах. (Див. При вітамін Е недостачі 0.76 ± 0.02 1.59 + 0.05 Введення в систему вітаміну Е заявляемого АО доза, мкг/мл показник доза, мкг/мл показник Гомогенат 5 0.15 ±0.006 3.5 0.047 ± 0.002 3 0.05 ± 004 25 0.042 ± 0.003 Мітохондрії 5 1.65 ±0.005 3.5 0.09 ± 0.004 35 0.99 ±0.014 25 0.19 ±0.009 З табл.1 видно, що в експериментах, проведених на гомогенатах печінки, при використанні меншої концентрації заявляємий антиоксидант в З рази активніший за вітаміна Е, процес ПОЛ пригнічується у 18 разів. Також він інтенсивно пригнічує утворення МДА у мітохондріях, де вітамін Е ще не ефективний, можливо із-за поганої проникливості молекул всередину органел. Заявляємий антиоксидант проявляє високу ефективність при інгібуванні процесів ПОЛ у всіх використовуваних концентраціях як в тканинах, так і в мітохондріях печінки. Дія його на мітохондріях проявляється при проявляється при значно нижчих концентраціях, ніжвитамін Е. Приклад 2. Досліджено загальний вміст ліпідів і дієнових кон'югатів, котрі характеризують початковий етап ПОЛ, у печінці вітамін Е-недостатніх тварин (контроль) і після введення тваринам перорально заявляемого антиоксиданта і вітаміна Е (для порівняння). Тварин на протязі 4-х місяців утримували на вітамін Е-недостатньому раціоні, потім за 3 доби до забою їх розділили на 3 групи: контрольну групу, котрій щоденно перорапьно вводили вітамін Е 24682 Е в дозі 50мг/кг маси тварини, та групу, котрій ввопісля введення препаратів, що викликають патолодили заявляємии антиоксидант в еквімолярніи дозі гію - 35мг/кг Швидкість утворення МДА оцінювали як у Дані надані в табл З прикладі 1 ЛІПІДИ екстрагували по Фолчу (див Таблиця З КейтсМ "Техника липидологии"-М "Мир", 1975,Дослідження ПОЛ в мітохондріях печінки на моделях індукованого перекисного окислення ЛІПІДІВ тварин, С 282) мкмоль/мг білка Мім, тт = 6-8) Дані представлені у табл 2 Таблиця 2 Тип ПОЛ Інтактні Без Вміст загальних ЛІПІДІВ, ДК І МДА у печінці тварин із недостатністю вітаміну Е (контроль) і після перорального введення вітаміну Е та - токоференацетату (М ± м, тт = 8) Показники ЛІПІДИ, МГ/Г тканини МДА, мкмоль/г тканини ДК, мкмоль/г тканини При недостат- При пероральному введені ності вітаміну заявляемого Е (контроль) вітаміна Е АО 49 18 ± 0 78 54 61 ± 1 27 68 6 ± 03 51 0 694 ± 0 031 0 075± 0 008 0 044 ± 0 041 72 54 ± 3 34 58 81 ± 2 85 57 0 ± 2 39 Як видно із таблиці 2, заявляємии антиоксидант підвищує вміст ЛІПІДІВ у печінці щурів ефективніше, ніж вітамін Е, що свідчить про його більш високу захисну функцію відносно запобігання ПОЛ Вміст ДІЄНОВИХ кон'югатів, що характеризує початковий етап ПОЛ, знижується майже однаково при введенні вітаміну 0Е та заявляемого антиоксиданту Отримані дані, підтверджують, що заявляємии антиоксидант не поступається вітаміну Е по антиоксидантній активності Приклад 3 Для дослідження інгібування процесів ферментативного ПОЛ печінки щурів на моделі індукованого перешеного окислення ЛІПІДІВ використовували щурів-самців масою 160 - 200г ПОЛ у печінці інтенсифікували підшкірним введенням на протязі 4-х днів 50%-ного олійного розчину тетрахлорметану у дозі 8мл/кг маси тварини, або пероральним введенням 2%-ного розчину парацетамолу у дозі 2500мг/кг маси на протязі 2-х днів Вивчення захисного ефекту заявляемого антиоксиданта проводили в порівнянні з вітаміном Е, котрий вводився перорально в дозі 50мг/кг, атокоференацетат - в еквімолярніи дозі 35мг/кг Захисні препарати вводили за добу і далі за 1 годину до препаратів, що інтенсифікують ПОЛ, а потім ще два дні- до забою, після припинення введення препарату Тварин забивали через 48 годин При введені вітаміна заявляемого АО Е Спонтанне Аскорбатзалежне НАДФНзалежне Спонтанне Тетрахлоретан 0 032 0 012± 0 01 ± ± 0 002 0 001 0 020 0 097± 0 28± 0 126± 0 136 ± 0 01 0 008 0 015 0 008 0 273 0 129± 0 138± 0 103 ± 0 01 + 0 013 0 011 0 013 Парацетамол 0 004± 0 001 0 004± ooot Аскорбатзалежне 0 095± 0011 НАДФНзалежне 0 107± 0 013 0 064 0 014± 0 056± ± 0 002 0 004 0 006 0 188 0 175± 0 12 ±0 014 ± 0 010 0 012 0 191 0 184± 0 139± ± 0 017 0 017 0 015 Як видно з таблиці 3, введення захисних препаратів (вітаміну Е та оксиданту, що заявляється) практично нормалізує ферментативні процеси ПОЛ в мембранах мікросом При парацетамоловій моделі АО, що заявляється значно активніший за вітамін Е, що свідчить про можливість використання а-токоференацетату у якості антиоксиданту Приклади 1-3 вказують, що 2, 5, 7, 8 - тетраметил-2-(4-метил-3-пентил)-6-ацетоксихроман (він же а-токоференацетат) проявляє виявлену антиоксидантну дію інгибує процеси перекисного окислення ЛІПІДІВ у тканинах в умовах in vitro та in vivo, збільшує вміст ЛІПІДІВ, знижує неферментативне ПОЛ, тобто рівень ДК, МДА, аскорбат-залежне ПОЛ, а також ферментативне НАДФН-залежне ПОЛ, активує при цьому антиокислювальну активність тканин організму в умовах інтенсифікованих перекислих процесів ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сімї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044)456-20- 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71 24682