2-{2-[3-(бензтіазол-2-іламіно)-4-оксо-2-тіоксотіазолідин-5-іліденметил]-4-хлорфенокси}-n-(4-метоксифеніл)-ацетамід, що виявляє протипухлинну активність

2-{2-[3-(Бензтіазол-2-іламіно)-4-оксо-2тіоксотіазолідин-5-іліденметил]-4-хлорфенокси}-N(4-метоксифеніл)-ацетамід формули: 2 3 32670 O O H N N S O H N S N S Cl H 3C O , що проявляє протипухлинну активність. Синтезована сполука є жовтим кристалічним порошком, розчинним у ДМСО і ДМФА, малорозчинним в оцтовій кислоті, нерозчинним в спирті, ацетоні, воді та ефірі. Для доказу складу і структури синтезованої сполуки були використані відомі фізико-хімічні методи, зокрема ПМР-спектроскопія та елементний аналіз. Одержані результати свідчать про відповідність синтезованої сполуки заявленій. Заявлену сполуку одержують взаємодією 3(бензтіазол-2-іламіно)-2-тіоксо-4-тіазолідону та 5хлор-2-[N-(4-метоксифеніл)ацетамі докси]бензальдегіду в умовах реакції Кньовенагеля. Реакцію проводять в середовищі оцтової кислоти в присутності безводного ацетату натрію як каталізатора. Для визначення протипухлинної активності 2{2-[3-(бензтіазол-2-іламіно)-4-оксо-2тіоксотіазолідин-5-іліденметил]-4-хлорфенокси}-N(4-метоксифеніл)-ацетаміду проведено прескринінг протипухлинної активності на 56 лініях ракових клітин в одній концентрації 10-5моль/л, в результаті якого визначали відсоток інгібування росту TGI (total growth inhibition) клітин для 56 ліній різних видів раку. Протипухлинна активність 2-{2[3-(бензтіазол-2-іламіно)-4-оксо-2-тіоксотіазолідин5-іліденметил]-4-хлорфенокси}-N-(4метоксифеніл)-ацетаміду вивчали на клітинних лініях лейкемії (Leukemia) (CCRF-CEM, HL-60(TB), K-562, MOLT-4, RPMI-8226, SR), недрібноклітинного раку легень (Non-Small Cell Lung Cancer) (A549/ATCC, EKVX, HOP-62, HOP-92, NCI-H23, NCI-H322M, NCI-H460, NCI-H226, NCIH522), епітеліального раку (Colon Cancer) (COLO 205, HCC-2998, HCT-116, HCT-15, KM12, SW-620), раку ЦНС (CNS Cancer) (SF-268, SF-295, SF-539, SNB-19, SNB-75, U251), меланоми (Melanoma) (LOX IMVI, M14, MALME-3M, SK-MEL-2, SK-MEL28, SK-MEL-5, UACC-257, UACC-62), раку яєчників (Ovarian Cancer) (IGROV1, OVCAR-3, OVCAR-4, OVCAR-5, OVCAR-8, SK-OV-3), раку нирок (Renal Cancer) (786-0, A498, ACHN, SN12C, TK-10, UO31), раку простати (Prostate Cancer) (PC-3, DU 4 145), раку молочної залози (Breast Cancer) (MCF7, NCI/ADR-RES, MDA-MB-231/ATCC, HS 578T, MDAMB-435, BT-549, T-47D) [A. Monks, D. Scudiero, P. Skehan, R. Shomaker, K. Paull, D. Vistica, C. Hose, J. Langley, P. Cronise, A. Vaigro-Wolff, M. GrayGoodrich, H. Campbell, J. Mayo, M. Boyd //J. Nat. Cancer. Inst. - 1991. - 83. - P.757-766]. За результатами проведеного протипухлинного прескринінгу 2-{2-[3-(бензтіазол2-іламіно)-4-оксо-2-тіоксотіазолідин-5іліденметил]-4-хлорфенокси}-N-(4-метоксифеніл)ацетаміду на 56 лініях ракових клітин встановлено, що середнє значення інгібування становило 50,36%. В умовах експерименту 2-{2-[3(бензтіазол-2-іламіно)-4-оксо-2-тіоксотіазолідин-5іліденметил]-4-хлорфенокси}-N-(4-метоксифеніл)ацетамід проявив високу протипухлинна активність. Як видно з даних, наведених у таблиці, речовина, що заявляється, у концентрації 105 моль/л пригнічує ріст пухлинних клітин більше, ніж на 50% на 26 з 56 досліджуваних ліній та створює повне інгібування росту пухлинних клітин у концентрації 10-5моль/л на 7 з 56 досліджуваних ліній. Наступний етап досліджень сполуки, що заявляється, полягав у тестуванні в мінімум п'яти концентраціях при 10-кратному розведенні на 57 лініях ракових клітин. У результаті експерименту одержано 3 дозозалежні параметри: GI 50 концентрація, яка викликає пригнічення росту 50% пухлинних клітин, TGI - концентрація сполуки, що створює повне пригнічення росту пухлинних клітин, LC50 - концентрація речовини, що дає 50% зменшення забарвлення сульфородаміну Б після експозиції речовиною відносно початкового стану. Якщо логарифмічні значення параметрів lgGI50, lgTGI та lgLC50 становлять менше - 4,00, сполука трактується як активна. При аналізі результатів ґрунтовного in vitro скринінгу тестована сполука виявила помітний цитотоксичний ефект на всіх лініях без яскравої вираженості специфічності дії на окремі види раку (як видно з таблиці). Середні значення lgGI 50, lgTGI та lgLC50 відповідно становлять -5,46, -4,5 та -4,15. Особливо слід відзначити результати протипухлинної активності щодо ліній меланоми LOX IMVI (lgGI 50=-5,78, lgTGI=-5,49, lgLC50=-5,20) та SK-MEL-28 (lgGI 50=-5,66, lgTGI=-5,35, lgLC50=5,03), раку яєчників OVCAR-3 (lgGI 50=-5,70, lgTGI=5,43, lgLC50=-5,16), а також раку простати DU-145 (lgGI 50=-5,68, lgTGI=-5,40, lgLC50=-5,12). Таким чином, сполука, що заявляється, проявляє високу протипухлинну активність і є перспективним протираковим засобом. 5 32670 6 Таблиця Протиракова активність 2-{2-[3-(бензтіазол-2-іламіно)-4-оксо-2-тіоксотіазолідин-5-іліденметил]-4-хлорфенокси}-N-(4метоксифеніл)-ацетаміду Лінія клітин раку Протиракова активність in vitro II етап lgGI50 lgTGI 4 5 -5,61 >-4,00 -5,64 -5,16 -5,50 >-4,00 -5,57 >-4,00 -5,75 -4,78 -4,06 -5,30 >-4,00 -4,72 -4,27 -5,55 -4,04 -4,70 -4,12 -4,87 >-4,00 -4,81 >-4,00 -5,53 -5,16 -4,69 >-4,00 -5,02 -4,60 -4,90 -4,58 -5,45 -4,81 -5,41 -4,81 -5,42 >-4,00 -5,65 -5,31 -5,61 -5,20 -5,48 -4,82 -5,64 -4,65 -5,51 -4,88 -5,11 >-4,00 -5,80 -5,02 -5,53 -5,03 Лейкемія (Leucemia) Недрібно-клітинний рак легень (Non-Small Cell Lung Cancer) Епітеліальний рак (Colon cancer) Рак ЦНС (CNS Cancer) Меланома(Melanoma) Рак яєчників (Ovarian Cancer) Рак нирок (Renal Cancer) Рак простати (Prostate Cancer) Рак молочної залози (Breast Cancer) 2 CCRF-CEM HL-60(TB) K-562 MOLT-4 RPMI-8226 SR A549/ATCC EKVX HOP-62 HOP-92 NCI-H23 NCI-H322M NCI-H460 NCI-H226 NCI-H522 COLO 205 HCC-2998 HCT-116 HCT-15 HT-29 KM12 SW-620 SF-268 SF-295 SF-539 SNB-19 SNB-75 U251 LOX IMVI 1 І етап TGI (%) 3 47,71 -7,40 38,54 -9,34 3,41 -71,48 83,31 94,53 29,59 69,47 80,81 92,99 88,98 -18,13 62,13 99,09 89,69 -42,43 47,46 86,06 55,52 57,07 97,24 20,75 83,99 40,94 46,92 -9,07 -5,78 -5,49 -5,20 M-14 MALME-3M SK-MEL-2 SK-MEL-28 SK-MEL-5 UACC-257 UACC-62 IGROV1 OVCAR-3 OVCAR-4 OVCAR-5 OVCAR-8 SK-OV-3 786-0 A498 ACHN SAKI-1 SN12C TK-10 UO-31 PC-3 DU-145 MCF7 NCI/ADR-RES MDA-MB-231/ATCC MDA-MB-435 HS 578T -16,81 61,94 45,41 22,68 71,83 92,30 53,59 41,77 82,02 59,69 96,44 75,49 117,53 22,59 83,20 25,25 84,67 84,01 19,48 53,17 95,53 31,74 81,77 59,49 32,99 36,10 -5,35 -5,58 -5,66 -5,49 -5,21 -5,53 -5,38 -5,70 -5,42 -4,57 -4,71 -5,08 -5,25 -5,59 -5,55 -5,47 -5,29 -5,09 -5,47 -5,41 -5,68 -5,46 -4,54 -5,12 -5,43 -4,64 -5,02 -5,35 -4,93 -4,71 -5,06 -4,74 -5,43 >-4,00 -4,16 -4,08 -4,39 >-4,00 -5,24 >-4,00 -4,55 >-4,00 >-4,00 -4,85 >-4,00 -5,40 >-4,00 >-4,00 >-4,00 >-4,00 >-4,00 >-4,00 -4,05 -5,03 -4,40 -4,33 -4,23 -4,20 -5,16 >-4,00 >-4,00 >-4,00 >-4,00 >-4,00 -4,48 >-4,00 >-4,00 >-4,00 >-4,00 -4,23 >-4,00 -5,12 >-4,00 >-4,00 >-4,00 >-4,00 >-4,00 lgLC50 6 >-4,00 >-4,00 >-4,00 >-4,00 >-4,00 >-4,00 >-4,00 >-4,00 >-4,00 >-4,00 >-4,00 >-4,00 >-4,00 >-4,00 -4,18 -4,25 -4,12 -4,29 >-4,00 -4,84 >-4,00 >-4,00 >-4,00 >-4,00 >-4,00 >-4,00 -4,49 7 32670 8 Продовження таблиці Протиракова активність 2-{2-[3-(бензтіазол-2-іламіно)-4-оксо-2-тіоксотіазолідин-5-іліденметил]-4-хлорфенокси}-N-(4метоксифеніл)-ацетаміду Лінія клітин раку 1 2 BT-549 T-47D MDA-MB-468 Для розуміння запропонованої корисної моделі наведено приклад одержання 2-{2-[3(бензтіазол-2-іламіно)-4-оксо-2-тіоксотіазолідин-5іліденметил]-4-хлорфенокси}-N(4-метоксифеніл)ацетаміду. Сполуку синтезують таким чином. Суміш 0,005моль 3-(бензтіазол-2-іламіно)-2тіоксо-4-тіазолідону, 0,005моль безводного ацетату натрію та 0,0055моль відповідного альдегіду в 10мл оцтової кислоти нагрівають протягом 3год у колбі із зворотнім холодильником. Осад, який утворився після повного охолодження Комп’ютерна верстка Л. Купенко І етап TGI (%) 3 30,11 63,10 Протиракова активність in vitro II етап lgGI50 lgTGI 4 5 -5,52 >-4,00 -5,30 -5,05 -5,64 >-4,00 lgLC50 6 >-4,00 >-4,00 >-4,00 реакційної суміші відфільтровують, промивають оцтовою кислотою, водою, етанолом та ефіром і перекристалізовують з суміші ДМФА-етанол (1:2). Одержують жовтий порошок з Ттопл.>240°С, вихід 67%. Знайдено, %: N9,61; S 16,50. С26Н19СlN4O4S3. Вирахувано, %: N 9,28; S 16,97. ЯМР 1Н, δ, м.ч.: 3,68с (3Н, 4-МеО-С6Н4), 4,92с (2Н, СН2), 6,86д, 7,12м, 7,30шс, 7,46-7,58м, (11Н, С6Н4, 4-МеО-С6Н4, С6Н3), 8,05шс (1Н, =СН), 8,46с, 10,00с, 10,12с, 11,84шс, 12,47шс (2Н, 2*NH). Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601