Спосіб прискореної діагностики туберкульозу

Спосіб прискореної діагностики туберкульозу, що включає комплекс досліджень мікроскопію мазків крові, обробку латматеріалу інгибітором, висів на поживне середовище, відрізняється тим, що в мазках виявляють специфічний туберкульозний агент артроспори, молікути, сегментовані стебла молікут, або одну із інших стадій розвитку збудника туберкульозу, патматеріал після обробки інгібітором додатково витримують 12-24 години в стимуляторі росту мікобактерій, в який входить (мас%) С-21,2, N a - 6 , 1 , Н-42,4, О-30,3 і висівають на поживне середовище слідуючого складу Агар-агар 2,0-4,0 г Пептон 6,0-8,0 Г Кальцій хлористий 0,01-0,015 г Крохмаль картопляний 0,5-2,0 г Вода дистильована до 100 мл рН середовища 7,2-7,3 Винахід відноситься до медичної та ветеринарної мікробіологи і може бути використаний в медичній та ветеринарній практиці ВІДОМІ способи діагностики туберкульозу шляхом проведення КЛІНІЧНИХ, патологоанатомічних, алергічних і лабораторних досліджень Лабораторна діагностика базується на бактеріологічних, ГІСТОЛОГІЧНИХ та біологічних методах досліджень Найбільш близьким способом за технічною суттю до заявляемого є викладений в "Методических указаниях по применению унифицированных микробиологических исследований при туберкуле Задача вирішується тим, що для орієнтовної діагностики туберкульозу проводять дослідження мазку крові, пофарбованому по Романовському Пмза, або уніфікованим методом Паппенгейма і визначають специфічний туберкульозний агент, що являється однією з форм розвитку зе" (М , 1978 г ) ВІДПОВІДНО ДО НЬОГО проводять мікроскопію мазків дослідного матеріалу, в подальшому зразки обробляють інгибітором (сірчана кислота, трьохзамінний фосфорнокислий натрій, тощо) і висівають на поживне середовище Ріст збудника на існуючих поживних середовищах проходить за 20-90 діб Потім на протязі 10 днів визначають чутливість штаму мікобактерій до лікувальних препаратів Тобто діагноз ставиться через 30-100 днів, після чого починається цілеспрямоване лікування хворого Головним недоліком прототипу є те, що спосіб довготривалий і низька його ефективність Задачею даного винаходу є скорочення часу діагностики туберкульозу шляхом використання комплексу досліджень мікобактерій ВІДПОВІДНО до розробленої ав торами концепси стадійного розвитку мікобактерій (малюнок 1) Розроблена авторами гіпотеза заключається в тому, що в палочках Коха при певних умовах відбувається фрагментація, при цьому плазма всередині клітини розпадається на окремі участки і утворюється декілька артроспор Оболонка клітини розпадається і артроспори вивільнюються При сприятливих умовах всередині артроспори розвиваються молікути На утворення молікут витрачається весь вміст клітини (артроспори) При несприятливих умовах артроспора може значно зменшуватись до розмірів 0,12-0,15 мкм в діаметрі і здатна проходити бактеріологічні фільтри Молікути не СТІЙКІ При мікроскопи мазків бачимо коковидні клітини Молікути проростають у вигляді 1-3 стебел Через деякий час відбувається сегментація сформованого стебла (нитки) далі утворюються перегородки, які розділяють їх на ряд сегментів (зебристість) Кожний сегмент розпадається на кілька частинок, з яких утворюються палочки (палочка Коха) (О IS со зг 34746 В мазку крові на початковій стадії захворювання виявляємо одну із стадій розвитку «мікобактерій Задача вирішується також тим, що оброблений інгибіторами посівний матеріал обробляють стимулятором росту, до складу якого входить (мас %) С - 21,2, Na - 6,1, Н - 42,4, О - 30,3, видержують в термостаті при температурі 37 + 1°С протягом 12-24 годин і висівають на поживне середовище слідуючого складу сухий агар-агар ГОСТ-1628-70 - 3,0, пептон - ГОСТ-1385-60 - 7,0; кальцій хлористий - 0,012, крохмаль картопляний - 1,5, води дистильованої до 100 мл, рН середовища - 7,3 ВІДПОВІДНО ДО концепсм, розробленої авторами, мікобактерії туберкульозу при певних умовах проходять ряд послідовних стадій розвитку (Власенко В В , Колос Ю О та ІНШІ, 1998 р ) На 1 відображено ці стадії Фіг 1 Паличка Коха, Фіг 2 Фрагментація паличок, Фіг 3 Артроспора, Фіг 4 Утворення молікут, Фіг 5 Молікути, Фіг 6 Проростання молікути, у вигляді стебла, Фіг 7 Сегментація стебел (зебристість), Фіг 8 Обособленють сегментів стебла, Фіг 9 Розпадання сегментів на палички, Фіг 10 Паличка Коха Паличка Коха, пофарбована по ЦІЛЯ-НІЛЬСОна, набуває рівномірного забарвлення рубінового кольору В процесі подальшого розвитку, внаслідок фрагментації під загальною оболочкою палочок утворюється декілька коковидних утворень, які видно при фарбуванні по методу Грам-Муха (зернята Муха) В подальшому при певних умовах зернисті палочки переходять в коковидні форми артроспори При благоприятних умовах артроспори збільшуються, набувають грушевидну або овоідну форму, в середині якої утворюються кілька амебовидних клітин В період дозрівання через звужений кінець артроспори амебовидні клітини - молікути виходять назовні Молікути не мають оболонки, можуть збільшуватись в розмірі та розмножатись шляхом поділу і почкованиям Вподальшому у молікут утворюється ліпідно-воскова оболонка При певних умовах в молікутах проростає 1-3 проміння В процесі розвитку проходить сегментація проміння (зебристість) Сегменти ВІДДІЛЯЮТЬСЯ, оболонка серповидних утворень зменшується, ядерна речовина ділиться на маленькі комочки і утворюються палички, котрі фарбуються по Граму в пурпуровий колір (паличка Коха) Приклад 1. При дослідженні 947 мазків крові людей в шістьох випадках виявлено туберкульозний агент (зебристість, молікути, артроспори) Подальшими ФІГ. 1 Фіг. 2 КЛІНІЧНИМИ і бактеріологічними дослідженнями діагноз "туберкульоз" у всіх шести випадках підтвердився Приклад 2. Посівним матеріалом була мокрота хворих, в яких при мікроскопи спостерігали мікобактерії туберкульозу Дослідний матеріал обробляли трьохзамінним фосфорнокислим натрієм (10%) згідно існуючої методики, промивали стимулятором росту, осад змішували з стимулятором росту, витримували 12 годин в термостаті при температурі 37 + 1°С і висівали на поживне середовище з мінімальним вмістом інгредієнтів сухий агарагар - 2 г, пептон - 6 г, кальцій хлористий - 0,01 г, крохмаль картопляний - 0,5 г, вода дистильована - до 100 мл рН середовища - 7,2 Ріст мікобактерій туберкульозу відмічався на 2-3 добу інкубації, але ріст був недостатньо активним, газоний ріст колоній появився на 4-5 добу Всі 10 зразків дали ріст Приклад 3. Приготовлений указаним способом 10 зразків мокроти хворих-бактерювиділювачів, витримували 18 годин в стимуляторі росту і пересівали на поживне середовище з оптимальним вмістом компонентів, тобто агар-агар - 3 г, пентон - 7 г, кальцій хлористий - 0,012 г, крохмаль картопляний 1,5 г, води дистильованої до 100 мл, рН середовища 7,3 Посіви термостатували при 37 + 1°С Ріст КОЛОНІЙ ПОЯВИВСЯ через 36 годин, а через 72 години спостерігали газоний ріст колоній Ріст КОЛОНІЙ відмічався у всіх 10 зразках Приклад 4. Приготовлений вище відміченим способом матеріал від 10 хворих-бациловиділювачів витримували в стимуляторі росту на протязі 24 годин і висівали на поживне середовище з максимальним співвідношенням інгредієнтів, тобто агарагара - 4 г, пептона - 8 г, кальція хлористого 0 015 г крохмалю картопляного - 2,0 г, води дистильованої до 100 мл рН середовища - 7,3 Ріст мікобактерій на цьому середовищі з'явився через 48 годин і лише на 7 зразках, а через 72 години був відмічений на всіх висіяних дослідних середовищах Слід ВІДМІТИТИ ЩО ріст колоній був дещо пригнічений і лише на 4-5 добу був газоний ріст На контрольному середовищі (ЛевенштейнаЙенсена) ріст колоній відмічався на 25-60 добу в 8 із 10 зразків Таким чином, запропонований спосіб прискореної діагностики туберкульозу скорочує термін постановки діагнозу в 10—15 разів, простий у виконанні, не потребує дорогих імпортних компонентів і може бути використаний в медичній та ветеринарній практиці Фіг. З Фіг. 4 I 34746 Фіг. 5 Фіг. 6 Фіг. 7 Фіг. 8 Фіг. Г . 10 Тираж 50 екз Відкрите акціонерне товариство «Патент» Україна, 88000. м Ужгород, вулТагаріна, 101 (03122)3-72-89 (03122)2-57-03