Спосіб визначення ефективності фармакологічних засобів при стресі

Спосіб визначення ефективності фармакологічних засобів при стресі що включає визначення доступних загальносоматичних цитологічних, ци Заявлюваний спосіб належить до галузі медицини, а саме до експериментальної медицини та фармакології Відомий спосіб визначення ефективності лікарських засобів для профілактики хвороби руху, який включє дослідження і оцінку умовно викликаного потенціалу головного мозку (Каркишенко Н Н , Морозов Н М , Димитриади Н А и др Способ определения эффективности лекарственных средств для профилактики болезни движения А С СССР № 1286207, кл А61К31/00) Недоліком відомого способу є необхідність використання складної апаратури для електрофізіологічних досліджень та відсутність системного підходу до оцінки ефективності препаратів Найбільш близьким до ааявлюваного способу є спосіб визначення ефективності антистресової дії фармакологічних препаратів, який полягає в тому, що у тварин моделюють гострий сублетальний стрес, вводять препарати і через певний строк визначають загальносоматичні показники реєструють поведінкові реакції, толерантність до фізичного навантаження та біохімічні показники (Гречко А Т Изучение восстановительного действия фармакологических препаратов при остром сублетальном микроволновом термострессе // Бюл эксперим биологии и медицины - 1998 - Т 125 № 2 - С 172-174/ Недоліками відомого способу є неоднозначність зрушень поведінки тварин, пов'язана з їх індивідуальними типологічними особливостями, потреба в додатковому обладнанні для дослідження поведінкових реакцій і толерантності до фізичного навантаження, відсут В основу винаходу покладено задачу шляхом використання кількісної оцінки ефективності фармакологічних засобів на системному рівні вдосконалити пошук і тестування антистресорних препаратів Поставлену задачу вирішують створенням способу визначення ефективності фармакологічних засобів при стресі, що включає визначення доступних загальносоматичних, цитологічних, ц и ТОХІМІЧНИХ та біохімічних показників лімфоідних органів і крові, який відрізняється тим, що кількісну оцінку ефективності засобів проводять за єдиною схемою на системному рівні Спосіб здійснюють наступним чином У тварин відтворюють гострий стрес тривалістю З год за однією з класичних моделей (емоційно-больовий стрес, іммобілізаційний стрес) За ЗО хв д о стресу тваринам вводять препарат, який проходить випробування Через 1,5 год після завершення стресового впливу тварин забивають під неінгаляційним наркозом шляхом відкачування крові з серця д о його зупинки (стандартна процедура евтанази) Визначають масу тимусу, масу наднирників, виразкотворення в шлунку [1], так звана тріада Сел'є Мікроскопічно в камері Горяєва підраховують загальну КІЛЬКІСТЬ карюцитів у тимусі, селезінці, кістковому мозку, а також загальну КІЛЬКІСТЬ лейкоцитів у крові [2] В мазках крові, тимусу і селезінки пофарбованих за методом Романовського-Пмзе за допомогою мікроскопу досліджують клітинний склад крові і лімфоідних органів [2] У мазках крові визначають ЦИТОХІМІЧНІ реакції поліморфноядерних лейкоцитів, а саме активність мієлопероксидази [3], лізосомально-катюнний тест [4] та життєздатність у пробі з еозином [5] Дослід ність КІЛЬКІСНОГО критерію при ОЦІНЦІ ефективності фармакологічних засобів ТОХІМІЧНИХ та біохімічних показників лімфоідних органів і крові, який відрізняється тим, що додатково проводять кількісне визначення ефективності засобів на системному рівні со т— 00 со 34784 жують фагоцитарну активність поліморфноядерних лейкоцитів [6] У крові і гомогенатах тимусу і селезінки визначають активність ключового ферменту антиоксидантного захисту клітин супероксиддисмутази (СОД) [7] і вміст продуктів перекисного окислення ЛІПІДІВ у реакції з 2тюбарбітуровою кислотою (ТБК-реактанти) [8] Всі методи є загальновідомими і доступними Єдину схему дослідження застосовують до всіх засобів, які вивчаються Обчислюють середню М та Гі помилку m Групами порівняння в кожному експерименті виступають інтактні тварини і тварини зі стресом без корекції Вірогідне наближення показника до такого у інтактних тварин (до норми) позначається як +1 бал тенденція до нормалізації - як +0,5 бала Вірогідне посилення стресогенних зрушень приймають за -1 бал, тенденцію до нього - за -0,5 бала Відсутність значимої різниці у порівнянні зі стресом без корекції позначають "0" Алгебраїчна сума балів є КІЛЬКІСНОЮ ОЦІНКОЮ ефективності фармакологічного засобу при стресі Протекторна дія характеризується сумою балів зі знаком "+" Чим більша ця величина, тим ефективніший препарат Приклад 1. У білих щурів-самців моделювали гострий іммобілізаційний стрес перед яким внтурішньочеревинно вводили тимопентин (ТП-5) у дозі 0 1 мг/кг маси тіла Під впливом препарату спостерігали зменшення КІЛЬКОСТІ виразок у шлунку, зменшення в мазках тимусу частки великих тимоцитів на 27 5%, зменшення вмісту Т-лімфоцитів у селезінці на 26,9%, зростання вмісту лімфоцитів у крові на 31 4% при одночасному зменшенні представництва поліморфноядерних лейкоцитів на 42 9% порівняно зі стресом без корекції Водночас відбувалось зниження активності мієлопероксидази нейтрофілів на 13 8% і їх фагоцитарної активності на 13,9% а життєздатність лейкоцитів зростала на 10,2% у порівнянні з такою при стресі без корекції Зміни КЛІТИННИХ реакцій викликані тимопентином, супроводжувались зниженням активності СОД у крові тимусі та селезінці Оцінку окремих ознак та ди тимопентину вцілому - див таблицю Приклад 2 У білих щурів-самців моделювали гострий іммобілізаційний стрес перед яким тваринам вводили тироліберин (0,04 мг/кг маси тіла) Після стресу під впливом препарату спостерігали такі вірогідні зміни, як зниження лізосомально-катюнного тесту на 32,6%, зниження активності СОД у тимусі на 51 1%, підвищення активності цього ферменту в селезінці на 61 1% порівняно зі стресом без корекцк Оцінку ефективності тироліберину - див таблицю Приклад 3. Білим щурам-самцям за ЗО чв до гострого іммобілізаційного стресу ін'єкціювали окситоцин (1 ОД/кг маси тіла) Після стресу під впливом препарату мали місце наступні зрушення тенденція до зниження концентрації ТБК-реактантів на 31% у тимусі, зменшення вмісту ТБК-реактантів у селезінці на 35,7%, гальмування активності СОД у тимусі і селезінці ВІДПОВІДНО на 52,3% і 28,4% у порівнянні зі стресом без корекції Водночас спостерігалось збільшення вмісту поліморфноядерних лейкоцитів та зменшення вмісту лімфоцитів у крові порівняно з такими у стресованих щурів, що свідчило про подальше відхилення леикограми від норми Оцінку ефективності окситоцину - див таблицю Приклад 4. Білим щурам-самцям за ЗО хв до гострого іммобілізаційного стресу вводили пітуїтрин у дозі 1 ОД/кг маси тіла Під .впливом препарату зменшилось пошкодження слизової оболонки шлунка, зросла маса тимусу і загальна КІЛЬКІСТЬ карюцитів у тимусі на 71,1%, у мазках залози зменшилось представництво великих тимоцитів, знизилась активність СОД у тимус» t селезінці ВІДПОВІДНО на 59,8% та 36,8% порівняно зі стресом без корекції Оцінку ефективності пітуїтрину - див таблицю Таким чином, запропонований спосіб дозволяє на основі використання доступних лабораторних показників оцінити вираженють захисної дії фармакологічних препаратів на системному рівні Запропонована оцінка ефективності препаратів у балах дозволяє порівнювати засоби, які по різному впливають на окремі параметри організму, враховує як позитивні, так і негативні дії засобів за умов стресу Література 1 Виноградов В М , Полонский В А Влияние нейропептидов на экспериментальную дуоденальную язву у крыс // Пат физиол и эксперим терапия - 1983 - № 1 - С 3-6 2 Горизонтов П Д , Белоусова О И , Федотова М И Стресс и система крови - М Медицина, 1983 - 2 4 0 с 3 Нарциссов Р П Модифицированная методика выявления миелопероксидазы //Лаб дело 1964 - № 3 - С 150-151 4 Пигаревский В Е Мазинг Ю А , Кокряков В Н Аномальные гранулы нейтрофильных гранулоцитов крови человека (методика выявления и диагностическое значение) //Лаб дело - 1983 № 6 - С 3-5 5 Лопухин Ю М Коган Э М Критерии жизнеспособности органов и тканей перед трансплантацией - М Медицина 1975 - 2 8 0 с 6 Лебедев К А Понякина И Д Иммунограмма в клинической практике - М Наука, 1990 - С 91-101 7 Брусов О С , Герасимов А М , Панченко ЛФ Влияние природных ингибиторов радикальных реакций на автоокисление адреналина // Бюл эксперим биологии и медицины - 1976 - № 1 - С 33-35 8 Гаврилов В Б, Гаврилова А Р , Мажуль Л М Анализ методов определения продуктов перекисного окисления липидов в сыворотке крови по тесту с тиобарбитуровой кислотой //Волр мед химии - Т 33, № 1 - С 118-122 34784 Ефективність фармакологічних засобів при гострому стресі Показники Тимопентин Тиролібврин Окситоцин ПІтуТтрин 0 0 0 маса тимусу 0 0 0 0 > +1 виразки шлунка +1 0 0 +1 загальна КІЛЬКІСТЬ карюцитів 0 0 0 +1 клітинний склад +1 0 0 +1 ТБК-реактанти 0 0 +0,5 +1 активність СОД +1 +1 +1 +1 загальна КІЛЬКІСТЬ карюцитів 0 0 0 0 клітинний склад +1 0 0 0 ТБК-реактанти 0 +1 0 активність СОД +0,5 0 _« • +1 +1 0 0 0 0 загальна КІЛЬКІСТЬ лейкоцитів 0 0 0 0 лейкограма +1 0 -1 0 ТБК-реактанти 0 0 0 0 активність СОД +1 0 0 0 +1 0 0 0 лізосомально-катюнний тест 0 -1 0 0 життєздатність +1 0 0 0 +1 0 Тріада Сел'є маса наднирників Тимус Селезінка __ Кістковий МОЗОК загальна КІЛЬКІСТЬ карюцитів Кров Поліморфноядерні лейкоцити мієлопероксидаза фагоцитарна активність Протекторний ефект (бали) 0 0 +0,5 +9,5 7,0 Тираж 50 екз Відкрите акціонерне товариство «Патент» Україна, 88000, м Ужгород, вул Гагаріна, 101 (03122) 3 - 7 2 - 8 9 (03122) 2 - 5 7 - 0 3 І