Спосіб одержання високоактивних преципітувальних протилейкозних сироваток

Спосіб одержання високоактивних преципітуючнх протилейкозних сироваток ШЛИХОМ імунізації продуцентів специфічними імуногенними препаратами з наступним відбором крові та відокремпенням цільового продукту, який відрізняється тим, що після реімунізаціт тваринам - продуцентам вводять підшкірно 1 мл розведеної кров) від хворо? на лейкоз великої рогатої худоби з концентрацією 1500 лейкоцитів. Винахід відноситься до ветеринарної імунології, зокрема, до способів одержання імунних сироваток э високим вмістом протилейкозних антитіл, і може бути використаний на підприємствах ветеринарної промисловості для отримання висохоспецифКіних позитивних сироваток, які входять до складу пейкозних діагностикумів. Використання даного винаходу дозволить підвищити ефективність діагностики лейкозу великої рогатої худоби* хронічного злоякісного захворювання сільськогосподарських тварин. Відомі способи одержання преципітуючої сироватки проти збудника правця (ACN741883, А 61 К 39/08 Способ получения противостолбнячной преципитирующей сыворотки / В. К. Голшмид, Д. А. Закгейм), спосіб отримання Імунної сироватки до вірусу фипа (ACN1681859. А 61 К 39/42 Способ получения имунных сывороток к вирусу гриппа / В. Ф. Семенхов, О Н. Агеева, И В Головлева), ціль яких досягається одержанням сироватки шляхом використання різних схем імунізації продуцентів інахтивованими збудниками захворювання чи їх компонентами, з застосуванням масляного адьюванту, або очистки цільового продукту іонітами. Але, в запропонованих способах при отриманні активних сироваток, як тварин - продуцентів, рекомендовано використовувати кролів або мишей, що не дає змогу одержувати вепику КІЛЬКІСТЬ ЦІЛЬОВОГО продукту, а також використання масляного адьюванту може привести до місцевих реакцій запалення у тварин • донорів сироватки Найбільш близьким до винаходу, що запропонований, є спосіб одержання лротилейкозної сироватки крові (АС 1871312. А 61 К 39/42. Способ получения противолейкоэной сыворотхи крови / Р. С Москалик ) В даному способі для одержання протилейкозної сироватки, вміщуючої високий титр антитіл, використовують баранів, яких заражають інтратесгикулярно кров'ю від хворої на лейкоз корови з 2,5 - 5x10* лімфоцитів в 1 мл нативної крові. Через 30 днів після введення Інфекційного матеріалу, а потім через кожні 2-5 місяців виділяють сироватку крові та досліджують Ті п реакції імунодифузії на наявність специфічних антитіл проти Ыруса лейкозу великої рогатої худоби Згідно поданих матеріалів, через 1 місяць титр антитіл в сироватці тварин • продуцентів підвищується до 1 2 1 8, через 12 місяців досягає 1.128 - 1 2 5 6 . Недоліками даного способу є використання баранів, від яких одноразово можна отримати лише 2 0 0 - 3 0 0 мп специфічної сироватки, довготривапість експерименту та необхідність утримання тварин у ізоляторі, тому що робота проводиться з інфекційним матеріалом на здорових сприйнятливих тваринах, які можуть стати джерелом збудника інфекції вірусе лейкозу великої рогатої худоби в господарстві. В основу запропонованого винаходу постав4 пено задачу одержання протилейкозмої сироватки, яка вміщує антитіла у високих титрах, шляхом імунізації продуцентів специфічними інактивованими імуногенними препаратами з послідуючим введенням підшкірно 1 мл розведеної крові від хворої на лейкоз великої рогатої худоби з концентрацією 1500 лейкоцитів, чим забезпечити отримання великої кількості високоактивної' специфічної сироватки крові дли діатостичних потреб Для цього використовують вільних в(д Інфекції віруса лейкозу великої рогатої худоби бичків. 00 со ю со 35438 яких попередньо тричі, з інтервалом 14 діб, імунізують і дворазово реімунізують через 4 місяці лейкозоспецифічними Імуногенними препаратами. Потім тваринам-продуцентам вводять підшкірно 1 мл розведеної стерильним фізіологічним розчином крові від хворої на пейкоз великої рогатої худоби з концентрацією 1500 лейкоцитів. Порівняльний аналіз з прототипом дозволяє зробити висновок про те, що заявпений спосіб відрізняється від відомого використанням бичкш-продуцентів, від яких отримують одноразово 3000 4000 мп сироватки, проведенням інфікування попередньо щеплених проти лейкозу тварин, застосуванням для зараження значно меншої кількості активного збудника лейкозу, завдяки чому підвищується специфічна активність сироватки і її діагностична цінність, тварини-продуценти залишаються вільними від інфекції віруса лейкозу великої рогатої худоби, не являють собою небезпеки для загального поголів'я, не потребують додаткових збитків для Ізольованого утримання тварин, які можуть бути використані в господарстві для інших потреб, що відповідає критерію "новизна" Спосіб пояснюється такими прикладами. Приклад 1. Вготовляють специфічний імуногенний інактивований препарат №1, який вміщує антигени віруса лейкозу великої рогатої худоби (ВЛВРХ), одержані з вірусвміщуючої купьтуральної рідини перещеплюваної пінії клітин нирки ембріона вівці, хронічно інфікованої ВЛВРХ, презентовані на біологічному сорбенті-Імуномодуляторі, виготовленому з клітин організму вільного від лейкозу рогатої худоби. Відбирають здорових бичків віком 6-10 місяців, яких Імунізують даним препаратом, тричі з Інтервалом 14 діб, підшкірно, а дозі 2 мл (група №1). Через 4 місяці проводять дворазову реімунізацію дослідних тварин ви•шеназваним препаратом в тих же дозах Через 14 діб після проведення циклу реімунізаціґ тваринам вводять підшкірно 1500 лейкоцитів від хворої на лейкоз великої рогатої худоби в 1 мл розведеної фізіологічним розчином периферичної кров* донора. Проводять відбір крові з виділенням сироватки та визначають титри антитіл до глікопротеїдного антигену ВЛВРХ в сироватці крові за даними реакції імунодифузІТ, яку проводять за загальноприйнятою методикою, через 1 місяць після зараження тварин, потім через кожний місяць. Одержані дані подані в таблиці №1. * Приклад 2. Виготовляють специфічний імуногенний Інактивований препарат No 2, який вміщує антигени вірусу лейкозу великої рогатої худоби, одержані з короткостроково культивованих лейкоцитів периферичної крові хворої на хронічний лімфолейкоз великої рогатої худоби. Дослідних бичків другої групи імунізують за вищевказаною схемою, але роблять ін'єкції обох препаратів №1 та №2 одномоментно При реімунізації використовують лише препарат №1. Зараження тварин проводять, як вказано вище. Тварин контрольної групи №3 не Імунізують. Зараження проводять аналогічно. Отримані результати свідчать, що у 100 % тварин першої групи через 1 місяць після зараження титр антитіл в сироватці підвищується до 1.56 ± 26,53 з коливанням від 1:16 до 1:128. Через 1,5 місяця цей показник складає 1.80 ± 27,71, з коливані - нями 1:32 - 1.128 На відміну від тварин першої групи, в другій дослідній групі уже через 1 місяць спостерігали 100% серопозитивність з титрами антитіл 1.128 ± 0.00 (1 128). Через 1,5 місяця титри антитіл у цих тварин зросли до 1:192 ± 64,0 з коливанням від 1:128 до 1:256. До четвертого місяця після Інфікування титри специфічних антитіл у тварин обох доспщних груп суттєво зменшились до 1:8 - 1:16, а на 6 місяці спостережень ус) піддослідні тварини були серонегативними. За даними вірусологічних досліджень вони були вільними від інфекції віруса лейкозу великої рогатої худоби Дослідження серологічного статусу тварин контрольної третьої групи, зараження яких проводили без попередньої імунізації, показали, що через 1 місяць титр антитіп складав 1:2,50 ± ± 1,50 (1 - 1 4), через 1,5 місяця - 1.8,00 ± 4,00, з коливанням від 1 4 до 1 16. Наймаксимальнішими у тварин контрольної групи були титри антитіл лише 1.12,2 ± 2,50, (1:4 - 1:16), через 8 місяців після інфікування. Таким чином, застосування запропонованого способу одержання високоактивних преципітуючих протилейкозних сироваток дозволяє отримувати велику кількість специфічної сироватки з титрами антитіл 1.128 -1:256 Проведення процесу згідно запропонованого способу не потребує додаткових затрат на ізольоване утримання тварин. Тираж 50 екз. Відкрите акціонерне товариство «Патент» Україна, 88000, м. Ужгород, вул. Гагаріна, 101 (03122)3-72-89 (03122)2-57-03