Спосіб визначення активності сполук дезинфектантів у відношенні до збудника сибірки

Спосіб визначення активності сполук дезинфектантів у відношенні до збудника сибірки, що включає використання як тест-мікроорганізму спор бактерій і відрізняється тим, що в якості тест-мікроорганізму застосовуються спори Вас. thuringiensis. (19) (21) 98010463 (22) 28.01.1998 (24) 15.11.2000 (33) UA (46) 15.11.2000, Бюл. № 6, 2000 р. (72) Гречаний Леонід Андрійович, Нарожнов Валентин Васильович 30218 (ЩЖС). Вона складала 2,05±0,15×109 спор·см -3. Безпосередньо перед дослідженням всі експериментальні партії (серії) спорових суспензій оцінювали за терморезистентністю (100°С, 7 хв., текучий пар). В якості ЩЖС використовували триптичний гідролізат рибного кормового борошна (рН 6,87,2, загальний азот 120 мг%). З метою обгрунтування використання спор Вас. thuringiensis в якості тест-мікроорганізму збудника сибірки перевіряли їх резистентність у порівнянні із стійкістю спор Bac. anthracis до дії дезинфікуючи х сполук, які мають спороцидну активність (В.І. Вашков, 1977; О.П. Красильников, 1995): 1. Окислювачі - розчини пероксиду водню та пероксогидрату фторіду калію (ПФК). 2. Галогени та їх сполуки - розчини двітретиниосновної солі гіпохлоріту кальцію (ДТСГК); діхлоргліоксиму (ДХГ); діхлордіоксиміноацетону (ДХДОА), монохлораміну Б (МХА-Б). 3. Альдегіди - розчини глутарового та мурашиного(формальдегід) альдегідів. Спорову культуру вірулентного штаму Bac. anthracis отримували вирощуванням на агарі Хотингеру. Властивості і якість спорової культури визначали за відомими методиками: вміст спор – мікроскопією мазка, забарвленого за Цілем-Нільсеном; концентрацію спор - рахуванням у камері Горяєва; кількість життєздатних спор - висіванням на ЩЖС; капсулоутворення - вирощуванням на бікарбонатному агарі у атмосфері СО2. Статистичну обробку експериментальних даних (визначення середньої логарифмічної швидкості процесу загибелі спор, кількості залишившихся життєздатними мікроорганізмів у суспензіях, гарантованості спороцидного ефекту у будь-який момент дезинфекційного процесу, визначення часу закінчення дезпроцесу з розрахунком гарантії спороцидного ефекту до 0,9999 (99,99%) проводили за С.П. Буртовим (1985). У табл. 1 подана резистентність чотирьох штамів Bac. thuringiensis до водних розчинів дезінфектантів. З даних, які наведені в табл. 1, можна зробити висновок, що розбіжність у резистентності штамів Bac. thuringiensis виражена недостовірне, оскільки середні арифметичні показники часу інактивації усі х штамів знаходяться в межах довірчих інтервалів одне одного. Таким чином, будь-який з досліджених штамів може бути використаний у роботі. В табл. 2 наведені дані вивчення стійкості спор Bac. thuringiensis та Bac. anthracis до дезинфектантів, які досліджувались. За показниками, які наведені у табл. 2, також можна зробити висновок, що розбіжність у стійкості штамів Z-52 та штаму 863 недостовірна. Таким чином, за даними досліджень резистинтності спор рекомендується використовувати спори Bac. thuringiensis, штам Z-52, в якості тестмікроорганізму збудника сибірки для вивчення активності дезинфікуючих сполук, композицій, відпрацювання режимів деконтамінації та механізму дії дезінфектантів на спори. У зв'язку з однаковою стійкістю досліджених штамів Bac. thuringiensis до дезінфектантів в якості тест-мікроорганізму можуть бути використаними також штами 49, 620 та 5072. Спосіб, який пропонується, був випробуваний авторами під час виконання науково-дослідних робіт з проблем дезинфекції у науково-виробничому об'єднанні "Прогрес". Паспорт штаму Видова назва: Bacillus thuringiensis. Серологічна належність: Вас. thuringiensis var. kurstaki H (3а, 3в). Назва штаму: Z-52. Надійшов з НПО "Прогрес" 18.02.1985. Родовід: отриманий з Z-2 після обробки нітрозогуанідином Цільове призначення - продуцент для виробництва лепідоциду. Автори: Зурабова Є.Р., Расомагіна Н.А., Хаідакова Д. Д. та ін. Культурально-морфологічна характеристика: утворює спори та кристали, колонії (МПА, 24ч) сірувато-білі, округлі, матові, плосковипуклі, з хвилястим краєм, зернисті, в агар не вростають, дисоціація 1%. Чутливий до фагів 11, U-77, С/П, 25-16. Виділяє фаги помірні. Фізіолого-біохімічні властивості: арабіноза- лактоза- саліцин+ глюкоза+ маніт- ескулін+ ксилозасахароза- мальтоза+. Утворення ферментів: амілаза+ протеаза+ лецитиназа+ уреаза+. Продуктивність. Середовище ДПС (дріжджі 3%, кукурудзяне борошно 1,5%, NaCl 0,5%, рН 7,2-7,4); Умови: колби ємн. 750 мл с 30 мл середовища, кругова качалка 240 об./хв., 29°С, тривалість 48 год. Продуктивність: (2,66±0,14)·109 спор/мл (2,92±0,25)·109 спор/мл. Вірулентність: тест-об'єкт личинки непарного шовкопряду ЛК50 : (0,17±0,03)%. Зберігання: нативний МПА, +4°С, 3 міс; культуральна рідина МПА, під вазелиновим маслом, +4°С, 1 рік; ліофілізоване сахарозо(5%)-желатинове (1,5%) середовище: +4°С, 3 роки; -40°С, 5 років. Джерела інформації 1. Абрамова И.М. Изучение спороцидной активности глутарового альдегида и композиций на его основе // Основные направления развития науки и практики дезинфекционного дела: Сб. науч. трудов Моск. НИИ вакцин и сывороток. - М., 1981. С. 46-48. 2. Алексеева М.И., Масленников Ю.И., Меграбян Р.А. Стерилизация и дезинфекция ендоскопической аппаратуры в лечебно-профилактических учреждениях // Основные направления развития науки и практики дезинфекционого дела: Сб. науч. трудов. - М., 1981. - С. 49-52. 3. Алибеков К.Б., Лепешкин Т.Н., Ми хайличенко А.П. и др. Устойчивость спор Bacillus thuringiensis к некоторым дезинфектантам. Сообщение 1. Спороцидная активность водных растворов перекиси водорода // Науч.-те хн. информ. сб. статей. - 1990. - Вып. 4. - С. 47-52. 4. Африкян Э.К. Энтомопатогенные бактерии и их значение. - Ереван, 1973. - 274 с. 2 30218 5. Буртовой С.П., Чикишева Т.В., Болотов В.Д. Вероятностная оценка надежности бактерицидного эффекта // Там же. - 1985. - № 5. - С. 20-22. 6. Вашков В.И. Средства и методы стерилизации, используемые в медицине. - М.: Медицина, 1973. - 368 с. 7. Козаров Д., Еленков Г., Сымналиев М., Илиев Б. Обеззараживающее действие надмуравьиной кислоты // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунол. - 197. - № 3. - С. 358-360. 8. Красильников А.П. Справочник по антисептике. - Минск: Вышейшая школа, 1995. - 367 с. 9. Lammana С., Jones L. Antigenic relation ship of the endospores of Bac. cereus and Bac. thuringiensis. - J. Bacteriol. - 1961. - № 81. - P. 622-628. 10. Павлова И.Б., Куликовский А.В. Субмикроскопическое изучение бактерий и спор при воздействии надуксусной кислоты и некоторые аспекты механизма действия препарата // Журн. Микробиол., эпидемиол. и иммунол. - 1978. - № 1. С. 37-41. 11. Савельева И.А., Бердюгин М.Т., Ми хайличенко И.А., Лямцев В.И. Изучение вентиляционных и технологических выбросов ПО "Прогресс" // Сб. науч. тр. медмикробиопрома. - М.: Ар х. ВНИИ прикладной микробиологии, 1987. - Инв. № Т-2044. С. 82-85. 12. Скляров В.Я., Кулешова Л.И., Неляпин Н.Л., Буравцева Н.П. Опыт применения перекиси водорода в качестве дезинфектанта при работе с возбудителем сибирской язвы в лабораторных условиях // Ма териалы межд.симпозиума по дезинфекции и стерилизации (Москва, 31 октября - 2 ноября 1972 г.). - М. Медицина, 1972. - С. 27. 13. Соколова Н.Ф., Грачева М.Н., Барсукова Э.М. К вопросу о выборе тест-микробов для изучения спороцидной активности дезинфектантов // Труды ВНИИ Ди С. - 1974. - Вып. 23. - С. 26-30. 14. Тржецецкая Т.А., Куликовский А.В Структурные изменения спор вирулентного штамма Bac. anthracis после воздействия дезинфицирующими средствами // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунол. - 1971. - № 8. - С. 15-17. Таблиця 1 Стійкість штамів Bac. thuringiensis до водних розчинів дезінфектантів Найменування дезинфек- Концентрація розчину, танту % Пероксид водню 6 10 Глутаровий альдегід 5 10 ДХДОА 0,1 0,5 1,0 ДХГ 0,1 0,5 1,0 ДТСГК 5 10 620 190±15 90±7 49±5 15±1 43±2 35±3 12±1 115±5 57±4 38±4 130±5 73±7 3 Час інактивації планів, хв. 49 Z-52 205±15 200±20 85±15 80±5 47±3 50±8 14±1 15±2 46±6 47±5 31±5 30±6 13±1 15±2 110±12 117±3 54±7 55±4 40±5 44±2 130±6 132±8 70±3 75±3 5072 200±15 90±10 50±5 15±1 47±6 30±5 15±2 108±6 58±2 40±4 132±8 70±5 30218 Таблиця 2 Резистентність спор Bac. thuringiensis, штам Z-52 (чисельник) та Bac. anthracis, штам 863 (знаменник) до водних розчинів дезинфектантів Найменування дезінфектанту Пероксид водню ПФК-2 МХА-Б ДТСГК ДХГ ДХДОА Формальдегід Глутаровий альдегід 0,1 L L L L L L L L 117 ± 3 115 ± 1 47 ± 5 43 ± 5 L L L L Стійкість спор (хв.) до дезинфектанту у концентрації, % 0,5 1,0 3,0 5,0 6,0 10,0 L L C L 200 ± 20 80 ± 5 L L C L 77 ± 3 77 ± 3 L L 280 ± 11 L 95 ± 9 60 ± 3 L L 260 ± 10 L 90 ± 5 62 ± 1 L C C L L L L C C L L L L L L 132 ± 8 L 75 ± 3 L L L 136 ± 3 L 70 ± 2 55 ± 4 44 ± 2 L L L L 56 ± 2 40 ± 2 L L L L 30 ± 6 15 ± 2 L L L L 32 ± 3 13 ± 2 L L L L L L C C L 180 ± 12 L L C C L 174 ± 9 L L 300 ± 15 50 ± 8 L 15 ± 2 L L 303 ± 8 49 ± 6 L 13 ± 4 30,0 8 ±1 7 ± 0,5 8 ± 0,5 8 ±1 L L L L L L L L L L L L Примітка: "С" - стійкість (резистентність) штамів до розчину дезиніфектанту протягом 6 год. та довше; L " " - за даною концентрацією препарат не застосовується. L __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2002 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 35 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 4