Спосіб цитологічної діагностики доброякісних і злоякісних лімфопроліферативних захворювань

УКРАЇНА (19) UA си, 39579 из, А (51) 7G01N33/49 МІНІСТЕРСТВО ОСВІТИ І НАУКИ УКРАЇНИ ОПИС ДЕРЖАВНИЙ ДЕПАРТАМЕНТ ІНТЕЛЕКТУАЛЬНОЇ ВЛАСНОСТІ ДО ДЕКЛАРАЦІЙНОГО ПАТЕНТУ НА ВИНАХІД видасться під відповідальність власника патенту (54, СПОСІБ ЦИТОЛОГІЧНОЇ ДІАГНОСТИКИ ДОБРОЯКІСНИХ І ЗЛОЯКІСНИХ ЛІМФОПРОЛІФЕРАТИВНИХ ЗАХВОРЮВАНЬ (21,2000105979 (22,23.10.2000 (24,15 06 2001 (46, 15.06 2001, Бюл № 5, 2001 р (72, Болгова Лідія Севастянівна, Туганова Тамара Миколаївна, Танасійчук Ірина Сергіївна (73) ІНСТИТУТ ОНКОЛОГІЇ АКАДЕМІЇ МЕДИЧНИХ НАУК УКРАЇНИ (57, Спосіб цитологічної діагностики доброякісних і злоякісних лімфопроліферативних захворювань, який включає морфометрію пофарбованих за методом Паппенгейма препаратів за допомогою цитоаналізатора "Интеграл -2МТ", який відрізняється тим, що отримані каріометричні показники лімфоідних клітин, які характеризують патологічний процес, мають статистично достовірні відмінності для доброякісних (площа 72,42 ± 2,50 мкм2- периметр - 31.66 ± 0,50 мкм, діаметр ядра - 9,58 ±0,14 мкм) і злоякісних (площа - 108,35 ± 2.70 мкм 2 ; периметр 38,68 ± 0,83 мкм і діаметр ядра - 11,70 ± 0,22 мкм) лімфопроліферативних захворювань. Винахід відноситься до медицини, зокрема, до онкології і стосується цитологічної (морфологічної) діагностики лімфопроліферативних захворювань. В літературі відомий спосіб морфометричних досліджень (2, 3), за допомогою якого автори проводили морфометрію фонових лімфатичних клітин при різних захворюваннях щитовидно» залози, які по суті патологічного процесу не можна перенести на лімфатичні клітини лімфопроліферативних захворювань Крім того, автори міряли розміри непошкоджених лімфатичних клітин, що рідко зустрічається при лімфомах і лімфаденітах, і тому не можуть бути використаними при діагностиці лімфопроліфєративних захворювань Прототипом запропонованого "Способу цитологічної діагностики доброякісних і злоякісних лімфопроліферативних захворювань" може служити дослідження А.Ч. Дубровського (А.Ч. Дубровский. Цитологическая характеристика неходжкинских лимфом Автореф. канд. дисс, г. Минск. 1994. - 18с). Автор проводив морфометрію пухлинних клітин по забарвленим препаратам за допомогою цитоаналізатора "Интеграл - 2МТ1. Перевагою згаданого способу є об'єктивізація цитологічних ознак, що дає змогу більш точно ставити догноз окремих типів неходжкінських лімфом. Недоліком зазначеного способу є відсутність морфометричних параметрів лімфоідних клітин доброякісних лімфопроліферативних захворювань, на яких можна базувати диференційну діагностику зі злоякісними лімфомами Крім того, автор проводить морфометрію непошкоджених клітин, а пе реважна більшість клітин у цитологічних препаратах дистрофічно змінені, цитоплазма їх пізована і діагностика як доброякісних, так і злоякісних лімфопроліферативних захворювань проводиться частіше всього за одними ядрами, що спонукало нас проводити морфометрію лише ядер (каріометрію). В основу "Способу ЦИТОЛОГІЧНОЇ діагностики доброякісних і злоякісних лімфопроліферативних захворювань" покладена задача підвищення точності диференційної цитоморфологічної' діагностики доброякісних І злоякісних лімфопроліферативних захворювань шляхом проведення морфометрії для забезпечення об'єктивізації цитологічної діагностики і прийняття правильного діагностичного рішення Запропонований спосіб цитологічної діагностики доброякісних і злоякісних лімфопроліферативних захворювань базується на карюметрії чотирьох параметрів: площі, периметру, коефіцієнту форми і діаметра ядра. Дослідження виконано на двох групах спостережень: злоякісні лімфоми (27 хворих) і доброякісні лімфопроліфєративні процеси (12 хворих). В кожному випадку проводилась каріометрія 100 основних лімфоїдних клітин, якими характеризувався патологічний процес Морфометрія проводилась за допомогою цитоаналізатора "Интеграл - 2 МТ" по забарвленим за методом Паппенгейма цитологічним препаратам. Отримані параметри каріометричних показників двох найскладніших у цитологічній диференційній діагностиці патологічних процесів - пролімфо о» 39579 цитарних лімфом (13 хворих) і доброякісних лімфопроліферативних процесів (12 хворих) Встановлені ймовірні ВІДМІННОСТІ ПЛОЩІ пе риметру і діаметра ядер злоякісних неходжкінських лмфом ВІДПОВІДНО (108,35±2,76 мкм 2 , 38,98±0,83 мкм, 11,70+0,22 мкм) і доброякісних лімфопроліферативних захворювань ВІДПОВІДНО (72,42±2,57 мкм 2 , 31,66±0 50 мкм, 9 58tO,14 мкм), на основі яких з урахуванням цигоморфолопчних ознак можна виносити об'єктивне діагностичне рішення (табл 1-3) Карюмеіричні показники інших видів неходжкінських лімфом значно більші і бтьш гуттгво відрізняються ВІД таких при доброякісних п(мфопролїфєрагивних захворюванняу Технічний результат винаходу полягає о тому, що при його використанні поряд з урахуванням цитоморфолопчних ознак лїмфоідних клітин патологічного процесу можна отримати ЧІТКІ морфологічні показники для більш точної диференційної діагностики лімфаценопанй доброякісного та злоякісного генезу Прикладами конкретного використання запропонованого "Способу цитологічної діагностики доброякісних \ злоякісних л»мфолрол*феративних захворювань" є 1 Чепель С Н , 1983 р н , історія хвороби № 6466/97 р , який обстежувався в Українському НДІ онкологи і радіологи з ! 12 97 до 16 12 97 р Захворів місяць тому, коли ВІДМІНИВ збільшення шийних лімфатичних вузлів 3 12 9 7 р хворому під місцевою анестезію проведена 6'ОЛСІЯ лімфатичного вузла І Ш І зроблені відбитки з розоиу лімфатичноіо вузпа на предмети* скельця, які пофарбовані за методом Паппенгеиіуа Мікроскопічне дослідження троводили за допомогою мікроскопа МБі-3, з використанням об'єктивів (хЮ, х20, х40, х90) Цитологічне дослідження № 497/97 р Цитологічний висновок в препаратах багато лімфоідних клітин різного ступеня зрілості Відмічаються діг.янки анаплазовяних дистрофічно змінених лімфоЬластів та поодинокі клігичи Ходжкіна еозинофіли, МІСЦЯМИ - багато лейкоцитів Заключения підозра на хворобу Ходжкіна Морфометрія ЮО лімфогдних клітин, ЯКІ характеризували патологічний, процес, проводилась за допомогою цитоаналізатора "Интеграл-2 Мї" Статистична обробка отриманих даних дозволила визначити середні морфометричж параметри площа ядра і89,60±3 70) мкм", периметр (35 80±0,60) м ш , коефіцієнт форми (1,157*0,006) VM од і діаметр (10 70±0,20) мкм які свідчать про доброякісний характер патологічного процесу Пагпстолопчне дослідження №1647172/9 їр гранулематозний епітелюклітинний лімфаденіт і присутністю багатоядерних клітин Пирогова Пангханса Заключний КЛІНІЧНИЙ діагноз туберкульозний лімфаденіт 2 Руденко А Д . 1979 р н , історія хвороби №2498/90 р , який знаходився у КЛІНІЦІ УНДЮР З 11 02 98 до 26 02 98 р з заключним діагнозом - неходжкінська лімфома, пролімфоцитарна 3 моменту ускладнення носового дихання хворів 2 МІСЯЦІ Проведена аденоідектомія, протибактеріальна терапія, але через 2 тижні з'явилися збільшені лімфатичні вузли підщелепові, пахвинні, носоглотка була також виповнена пухлиною Хворому під місцевою анестезією проведена біопсія надключичного лімфатичного вузла Зроблені відбитки з розрізу лімфатичного вузла на предметні скельця, які пофарбували за методом Паппенгейма Мікроскопічне дослідження проводили за допомогою мікроскопа МБї-3, з використанням об'єктивів (хЮ,х20х40,х90) Цитоморфолопчні ознаки клітин, які характеризували патологічний процес, св«дчили про наявність ЗПОЯКІСНОІ лімфоми Цитологічне заключения №594/98 злоякісна пухлина лімфоідного генезу Морфометрія 100 лімфоідних клітин, які ха рактеризували патологічний процес проводилась за допомогою цитоаналізатора 'Интеграл-2МТ" Статистична обробка отриманих даних дозволила визначити середи» морфометричні параметри 2 площа ядра (132,30±3,30) мкм , периметр (43,70±0,60) мкм, коефіцієнт форми (1,169±0 004) ум од і діаметр (12 90±0,10) мкм, які свідчать про злоякісний лімфопроліферативний процес Патпстолопчний висновок №2361-4/98р злоякісна лімфома, переважно пролімфоцитарна лімфосаркома, нодулярно-дифузного рос^у Хворий отримав поліхімютерапію, ефекг добрий Порівняння морфометричних даних хворих Ченєль С Н і Руденко А Д виявили вірогідну різ ницю, завдяки чому можна більш точно встановити морфолопччий діагноз (вказати характер патологічного процесу - доброякісний чи ЗЛОЯКІСНИЙ), що має вирішальне значення при виборі тактики лікування при використанні лише цитологічного методу дослідження, коли клітини з лімфатичного вузла отримуються методом пункції тонкою голкою Джерела інформації 1 Дубровский А Ч Цитологическая характеристика неходжкинских лимфом Автореф канд дисс , г Минск -1994 -24 с (прототип) 2 Кириллов В А , Ющенко Ю П , Демидчук Ь П Морфометрическое исследование популяции лкшфондных клеток s биопсийном материале пациентов с различной патологией щитовидной железы Цитология - 1996 -Т 38 №1 -С 89-93 3 Кириллов В А , Ющенко Ю П Цитометрическая оценка популяции лимфоидных клеток в пункционном материале больных раком щитовидной железы Вопросы онкологии -1996 -Т42, №3 -С 22-25 39579 Таблиці 1 Карюметричні показники пролшфоцитарних лімфом п/н Прізвище Площа (мкм 7 ) Периметр (мкм) 1 Б-о 95,311,62 55-136 28,8-49,1 2 Б-о 134,012,34 81 198 35 1 - 52,7 3 Г-в 82JJ2J36 44-147 4 3-ц 5 3-к 6 И-к 7 К-н 8 Л-ц 9 Л-к 10 Р-о 11 С-о 12 4-й 13 С-о Середні значення Коефіцієнт форми (ум о д ) Діампгр Кмкм) 1J 57*0,0068 1,07-1,41 11,02*0,09 8 35-13,16 1і!36±0 і 008 1,05-1,47 13,07 ±0 J 1 10,16-15 88 25 0-45 1 1,06-1,26 WJBjtOJ? 7 49-13,68 111,4*32,6 49-212 104,013,7 34-219 39,3 ±0,54 21,6 55,8 U U 4*0,003 1 06-1,2 1,12*0,0048 1,06-1,3 12^07*0,33 7,9-16 43 11,51*0 2 6,58 16 7 99,3*3,94 37 -234 З Л 1*0,63 27,7 - 59,0 1,12610.0042 і,06-1 27 11,25*0,2.1 6,87-17,27 114,5*3,2 66-226 103,6*3 6 41-221 97,9±2.52 57-183 13? ,3*3,38 73 - 242 89,2*1,68 56-140 112*9*2^42 53-174 12.9J ±1,66 83-170 108,3i>±2J6 37 - 242 40,2*0,53 31,6-57,4 1,148*0,004 1,07-1 29 12,08*0,16 9,17-16,97 37,7*0,64 1*117*0,0034 1,05 1,22 1^2.8*0,0042 1,06-1,27 1J69±0J)0_46 1,09-1,32 U_67±0,0046 1,09-1,39 1*22*0,0148 1,0-1 83 1^33*0,046 1,06-1 24 1J43tOJJ4 1 06-1,83 11,4910,19 7,23-16,78 11,17*0,13 8,52-15,27 12,98*0 J 6 6 64-17,56 10^6610,09 8 45-13,35 11,99*0,13 8,22-14,89 J2,82±Q,009 10 2-14,7 37,1*0,4 43,5*0,35 ^ 33,6*0,4 2о 3- 53 4 37,0*0,68 24,0 55,8 3_7L0±0J4 29,6 50,0 43,7*0,59 34,0 - 63 4 36,0*0,35 29 6 47,1 41лЗ±0А4 32 2-54,1 42.7±0 t 35 36,4 - 54 0 3_8,93*QJJ3 21 6-63 4 Карюметричні показники доброякісних лімфопроліферативних захворювань 11*7*0,22 6 58-17,56 Таблиця 2 п/н Прізвище Ппоща (мкм 2 ) Периметр (мкм) Коефіцієнт форми (ум о д ) Діаметр (мкм) 1 Б-р 46,9*1,1 18,0-86,0 25_J8±0J2 19,8-36,1 1,145*0,005 1,06-1 31 7 73*0,09 5,97-10.53 2 В-о 3 Г-ц 4 К-е 5 К-ь 31,7*0,47 20,9 - 44,6 315*0,33 24,2 - 40,5 31,2_±0_хЗЗ 24 9 41,6 31,1-041 6 К-ь 7 М-к 8 Н-а 72,0*2,34 ЗО 0-147,0 71.8*1,58 42 0-1210 • 69,9* 1J32 44-125 69.5*2,14 39-146 72J*3,24 30-125 75,2*3,24 34-Г96 76,9±2J 42-191 9 П-в 75^3*3,24 44 - 206 1,136*0,005 1 006-1,3 1,117*0,005 1,05-1 31 1,124*0,006 1 06-1.36 Ц 3 1 * 0 0046 1,06 1 29 U.18*0,0032 1,07-1,23 1,125*0^008 1,06-1.26 1,148*0,007 1,05-1,39 1,129*0,009 1,05-1.25 9^58*0^15 6,18-13 68 9,56*0,1 7,31 12 42 9,44*0,1 7 47 12,62 9,41*0,13 7,05-13 64 9,62*0,13 6,18-12 62 9^79*0,26 6 58-16,5 9^9*0J 7 7,31-15.6 9J9±Q.17 7,49-16,2 23,7-44,4 31^*0^3 20,2-41,7 3JJ>±(L89 21 6-66 32,9*0.54 25,4 - 52.7 32^4*0,56 25,1-53,1 39579 Продовження табл 2 п/н Прізвище 10 П-а 11 Х-а 12 Ч-ь Середні значения Площа (мкм2) Периметр (мкм) Коефіцієнт форми (ум о д ) Діаметр (мкм) 78,912,92 38 184 70,412,0 43- 143 89,613,7 39 - 224 72,4212,5 28- 242 33,010,55 23 1 - 50,7 31^310,48 24 8 - 46.7 35,610,64 24 1 - 55,9 1.13110.006 1,06-1,39 1.12210.004 1.06-1,25 1.15710.006 1,06-1,36 1,13210,0058 1,05-1,36 10.03Ю.17 6,96-15,31 9.4710.12 7.4-13.5 10.68А0.19 7.05-16,89 9.5810.148 5.97-16.5 31^6610,5 19 8-66 Таблиця З Карюметричні показники доброякісних та злоякісних лімфопроліферативних захворювань № Карюметричні показники клітин Нозологічна форма КІЛЬКІСТЬ КЛІПімфопропіфераТИН тивний процес Площа, мкм2 1 Доброякісний 1200 2 Злоякісний Периметр, мкм Коефіцієнт форми (ум од.) Діаметр, мкм ~28Г242~ 31,6610,5* 19,8-66 1,13210.0058 1,05-1,36 9,5810,14* 5,97-16.5 1.14310.154 1,06-1,83 11.7*0.22* 6,58-17,56 1300 108,3512 J6* 38.98Ю.83* 37 - 242 21,6-63,4 Примітка В чисельнику - М і т , в знаменнику - коливання показників •Достовірна різниця при Р < 0,05 Тираж 50 екз Відкрите акціонерне товариство «Патент» Україна. 88000, м Ужгород, вул Гагаріна. 101 (03122)3-72-89 (03122)2-57-03