Спосіб очистки агару

ЯЛЯ СЛУЖЇ-LHOfO ПОЛЬЗОВАНИЯ JK3 № СОЮЗ СОВЕТСНИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИН (19) 3(51) S I L 1122001 С 12 N А" 1/06 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИИ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3514410/30-15 (22) 19.11.82 (71) Украинский научно-исследовательский ветеринарный институт (72) А.И.Завирюха (53) 576.8.093 *0§8.8) (56) 1.Сибирская язва, под ред. С.Г.Колесова, М., "Колос", 1976, с. 114. 2, Авторское свидетельство СССР R 737454, С 12 N 1/00, 1978. (54)(57) СПОСОБ ОЧИСТКИ АГАРА, включающий замачивание его, расплавление, добавление хлористого кальция, охлаждение расплава агара до 45-50°С, осветление яичным белком и фильтрацию агара для удаления коагулированного белка, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения степени очистки агара, осветление осуществляют 2,5-3,0% раствором яичного белка в присутствии 0,2-5,0% полиэтиленгликоля. § (Л 2 1 11 22001 5 г агара 1 белок, на Ю О г 20, на Изобретение относится к ветерина10С0 г 200); рии и другим смежным областям, где используется агар-агар высокой степе'> Г) очищенный агар-агар несмотря ни очистки, а более конкретно к техна свою высокую прозрачность пригонологии очистки (осветления) низ5 ден не только для постановки реакций ких сортов агара с целью получения диффузионной преципитации и не может продукта высокого качества для исбыть использован в вирусологических пользования его в иммунохимичесисследованиях при изучении вирусов ких, бактериологических, электрофометодом бляшек из-за наличия токсиретических, вирусологических и друЮ ческих для культуры ткани вешеств. гих исследрваниях. Целью настоящего изобретения яв« ляется повышение степени очистки агаПоявление новых методов исследо- ра. вания в биологии, медицине и ветеринарии (электрофорез в агаровом геПоставленная цель в способе очистле, радиальная иммунодиффузия в ага- ім ки агара, включающем замачивание ровом геле, изучение вирусов метоего, расплавление, добавление хлорисдом бляшек и др.)» в которых обязатого кальция, охлаждение расплава тельно используются высокоочищенные агара до 45-50 С, осветление яичным импортные сорта, например агар Дифко, белком и фильтрацию агара для удапоставило в зависимость проведение 2® ления коагулированного белка, доститаких исследований от наличия импортгается тем, что осветление осуществного агара. ляют 2,5-3,0% раствором яичного белка в присутствии 0,2-5,0% полиэтилен"Известен способ очистки агар-агаглик оля. ра с помощью хлористого кальция, ко25 торый заключается в том, что расплавОстаток токсических веществ в очиленный агар-агар смешивают с хлорисщенном агаре удаляют путем диализа тым кальцием, фильтруют, разливают расплавленного геля, заключенного в в сосуды с плоским дном, дают остыть, емкость из полупроницаемой мембраны а затем измельчают на кусочки, при(например, из целлофана) против дис30 тиллированной воды, или путем промымерно 1 М см, и промывают под проточной водой в течение 3-х суток и вания кусочков застывшего геля в дисдистиллированной водой 1 сутки [ ] і. тиллированной воде. Основные недостатки - очищенный П р и м е р 1. 10 г агар-агара агароЕьій І ель не достаточно проззаливают 300 мл дистиллированной рачен; большой расход времени (4 су- 35 воды, расплавляют на кипящей водяток) на промывку. ной баке и добавляют 1,5 хлористого кальция ( СаС1 г * 6Н О) . Известен способ очистки агар-агаПока плавится агар, берут один ра, включающий замачивание агара в белок среднего по размеру куриного ' нейтральной дистиллированной воде * " яйца и растворяют в 1000 мл дистил*• рН 7,0-7,2, его расплавление и охлированной воды. лаждение расплава до 45-5С С с посРасплавленный агар охлаждают до ледующей обработкой хлористым каль&5-50°С, чтобы избежать быстрого цием и взбитым до пенообразного соссвертывания белка, и добавляют тояния яичным белком при нагревании 100,0 г приготовленного водного смеси до образования хлопьев коагураствора куриного .белка, 4,0 г поляции с последующим осветлением пулиэтиленгликоля, например ПЭГ-115 тем фильтрации, причем процесс осветпо ТУ ГОСТ 6-14-826-78. ления повторяют до получения необРастворы хорошо смешивают, стаходимой степени очистки агара [2]. 50 вят на кипящую водяную баню и нагНедостатками указанного способа ревают до образования хлопьев коагуявляются ляции (примерно 30-45 мин). A) необходимость приготовления нейтральной дистиллированной воды; Горячий раствор агара фильтруют. Б) взбивание белка до пенообраз55 К профильтрованному агару (Т 45-50 С) ного состояния при растворении его вторично добавляют 1,5 г хлористого в нейтральной дистиллированной воде; кальция и 100 мл раствора белка. ХоB) большой расход куриных яиц на рошо смешивают растворы, добавляют единицу веса очищаемого агара ( на 4,0 г полиэтиленгликоля и снова наг 2200! . 4 . После диализа агар расфасовывают ревают в кипящей водяной бане до появления хлопьев коагуляции. Горяв стерильные флаконы, стерилизуют чий раствор агара снова фильтруют и под давлением 0,25 атм 15-20 мин выливают в кювету для застывания тонили в кипящей водяной бане 40-50 мин ким слоем, например 1-1:6 см. и в герметически укупоренном виде сохранят при температуре +8-10°С. Для удаления остатков токсических'' для культуры ткани веществ застывший гель измельчают на мелкие, например Кусочки застывшего геля после их 0,5^0,5 см кусочки, и заливают дисотмывки можно также расплавить, рас10 фасовать, простерилизовать или же тиллированной водой в соотношении 1:2-1:10. Отмывку проводят в течение высушить, не допуская карамелизации, 24-48 ч. Воду сменяют 1-2 раза. и сохранять в виде пластин или поС целью ускорения очистки агара рошка, используя по мере надобности. от остатков токсических веществ можно использовать диалиэирующую емкость Технико-экономическая эффективиз полупроницаемой мембраны, наприность предлагаемого способа состоит мер из целлофана. в исключении необходимости централиЗаполненную расплавленным агаром зованного снабжения, высокоочищенныемкость помещают в сосуд с дистиллими импортными сортами агара, напрированной водой, нагретой до 45-50 С. 20 мер агар Дифко; сокращение в 10 Уровень агара в емкости совмещают, с раз расхода куриных яиц на едиуровнем воды и диализируют -при та;ницу веса агар-агара, взятого кой же температуре в течение 3-12 ч. для очистки; упрощение технолоСоотношение агара к воде такое же. гии очистки ( исключает приго25 товление нейтральной дистиллиБ течение диализа воду желательно сменить 1-2 раза. рованной воды; взбивание белка до пенообразного состояния при его растАгаровый гель, полученный после ворении в воде); повышает качество очистки, должен быть совершенно прозочистки (очищенный по данному спосорачным, но в зависимости от исходнобу агар пригоден для использования го сырья может иметь слегка беловане только в иммунохимических, но то-голубоватый или желтовато-зелеи вирусологических исследованиях). новатый оттенок. V \ Редактор Й.Ходакова Составитель В.Адамушкин Техред М.Ходанич Корректор л.Пилипенко Заказ 53/ДСП Тираж 367 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР ; по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород,, ул. Проектная, 4