Спосіб моделювання специфічного деструктивного процесу в легенях

Спосіб моделювання специфічного деструктивного процесу в легенях, який включає введення в організм лабораторної тварини інфекційного збудника туберкульозу у вигляді препарату живої ослабленої вакцини БЦЖ на фоні попереднього зниження резистентності їх організму, який відрізняється тим, що вакцину вводять з розрахунку Винахід належить до медицини, а саме до експериментальної патологи, і може бути використаний при дослідженні особливостей формування і перебігу туберкульозного деструктивного процесу, ефективності засобів його терапевтичної корекції Відомий спосіб моделювання специфічного деструктивного процесу в легенях, який включає введення в організм лабораторної тварини інфекційного збудника туберкульозу у вигляді препарату живої вакцини БЦЖ на фоні попереднього зниження імунної резистентності їх організму [1] Конкретно відомий спосіб полягає у внутрішньовенному введенні білим щурам стандартної живої ослабленої вакцини БЦЖ з розрахунку 0,1 1 мл кг на фоні попередньої інфузм антилімфоцитарної сироватки, що приводить до розвитку специфічного деструктивного процесу в легеневій тканині Недоліком відомого способу є недостатній рівень технологічності і відтворюваності специфічного патологічного процесу в легенях, оскільки вимагає проведення досить складного етапу отримання антилімфоцитарної сироватки, пов'язаного з необхідністю імунізації інших тварин, стандартизації сироватки за вмістом антилімфоцитарних антитіл та ш що знижує інформативність експериментальної моделі в цілому В основу винаходу поставлене завдання вдосконалити відомий спосіб моделювання специфічного деструктивного процесу в легенях, в якому шляхом інфузм ксеногенної нативної сироватки крові з природними антилімфоцитарними власти востями по відношенню до білих щурів досягають відтворюваного зниження функції системи імунного захисту організму тварин до інфекційного збудника туберкульозу, а отже підвищення рівня технологічності та інформативності моделі При розгляді технічного завдання було взято до уваги те, що кров великої рогатої худоби або нативна сироватка при внутрішньовенному введенні білим щурам у сублетальній дозі ІНІЦІЮЄ формування імунопатолопчного деструктивного процесу в легенях, який характеризується вираженим лімфоцитотоксичним ефектом у вигляді лімфоцитолізу з масивним вивільненням числених медіаторних субстанцій На це вказує розвиток надгострого набряку легень в результаті інфузм такої сироватки у летальній дозировці [2] Цілком логічним є очікування різкого зниження резистентності легеневої тканини до інфекційного збудника, яким є туберкульозна паличка у складі препарату живої ослабленої вакцини БЦЖ, якщо останню ввести на фоні попередньої інфузм ксеногенної сироватки у сублетальній дозі О ге -ёаГ1 безпосередньо після внутрішньовенної Д одноразової інфузм нативної сироватки або крові великої рогатої худоби у сублетальній дозі Поставлене завдання вирішують тим, що у відомому способі моделювання специфічного деструктивного процесу в легенях, який включає введення в організм лабораторної тварини інфекційного збудника туберкульозу у вигляді препарату живої ослабленої вакцини БЦЖ на фоні попереднього зниження резистентності їх організму, ВІДПОВІДНО до винаходу вакцину вводять з розрахунку 0,1 мл кг 1 безпосередньо після внутрішньовенної одноразової інфузм нативної сироватки або крові 45192 великої рогатої худоби у сублетальній дозі Перетижнів після інфузій, вказує виражена реакція спелік фігур цифічної альтерації ізольованих лейкоцитів (Фіг 56) при інкубації їх з туберкуліном, виявлена метоФіг 1 (мікрофото) Легенева тканина білого щудом люмінесцентної мікроскопи [2] та іншими мера Гематоксилін-еозин 06 8 х ок 7 Пристінкові тодами в залежності від завдання конкретного долейкоаглютинати після внутрішньовенної інфузм слідження [3] ксеногенної сироватки в сублетальній дозі в комбінації з вакциною БЦЖ Фіг, 2 (мікрофото) ЛюмінесПриклад 1 Фіксованому на дощечці білому центна мікроскопія с в їжоза мороженого зрізу легещуру, самцю масою 215 г, скальпелем провели невої тканин білого щура через ЗО хвилин після розріз шкіри вздовж внутрішньої поверхні стегна внутрішньовенної інфузм ксеногенної сироватки в Вену обережно вивільнили з-під тонкої фасції, піссублетальній дозі в комбінації з вакциною БЦЖ ля чого внутрішньовенно шприцем ввели спочатку Внутрішньосудинна лейкоаглютинація МЛ-4 Акри1,6 мл БС, виходячи з раніше визначеної летальдин оранжевий, 120000 Об 9 х ок 7К ної дози 7,5 мл кг 1 Потім, користуючись туберкуліФіг 3 (мікрофото) Легенева тканина білого щура новим шприцем, внутрішньовенно ввели 0,22 мл Порожнина в легеневій тканині Утворена через 5 живої вакцини БЦЖ Рану обережно зашили ПідМІСЯЦІВ після моделювання специфічного запальдослідну тварину утримували протягом 5 МІСЯЦІВ у ного процесу всередині скупчення макрофагів і літрадиційних умовах віварію Через кожних два тижмфоцитів Гематоксилін-еозин Об 8х ок 7 ня з вен хвоста ПІДДОСЛІДНОГО І контрольного (інтаФіг 4 (мікрофото) Легенева тканина білого щура ктного) щура набирали 0,20 мл крові для лабораСтінка щойно сформованої кавернозної порожниторного дослідження за методикою реакції специни Пристінкове скупчення сенсибілізованих імунофічного пошкодження лейкоцитів при інкубації їх з компетентних клітин (переважно макрофагів) в зотуберкуліном методом люмінесцентної мікроскопи ні деструкції 5-й місяць після введення ксеногенної та кондуктометричного аналізу Через 5 МІСЯЦІВ сироватки з вакциною БЦЖ Гематоксилін-еозін ПІДДОСЛІДНОГО щура декапітували, легені досиджуОб 8 х ок 7 вали патопстолопчним способом з фарбуванням препарату гематоксилін-еозином СвіжозаморожеФіг 5 (мікрофото) Люмінесцентна мікроскопія вггані зрізи тканини легень досліджували у полі зору льно флюорохомованих ізольованих лейкоцитів люмінесцентного мікроскопу з застосуванням периферійної крові інтактного білого щура -контфлюорохрому акридину оранжового у розведенні роль МЛ-4 Акридин оранжевий 1 20000 Об 9 х 1 20000 Контролем були ВІДПОВІДНІ показники ок,7К (препарати) інтактних тварин Фіг 6 (мікрофото) Люмінесцентна мікроскопія вггальне флюорохомованихізольованих лейкоцитів пеПриклад 2 За допомогою запропонованого риферійної крові ПІДДОСЛІДНОГО білого щура після методу провели моделювання специфічного деінкубації клггин із специфічним алергеном —тубеструктивного процесу в легенях у 14 білих щурів ркуліном PPD МЛ-4 Акридин оранжевий 1 20000 9 Про наявність змодельованого патологічного дех ок 7К структивного процесу в легенях у ПІДДОСЛІДНИХ тварин свідчили виражені імуногематолопчні реакСпосіб здійснюють таким чином Білому щуру ції, зокрема, у вигляді вираженої специфічної лейу стегнову вену шприцом вводять цільну стабілізокоаглютинацп (Фіг 6) методом люмінесцентної міквану кров або сироватку великої рогатої худоби, у роскопи, а після декапггацп тварин в КІНЦІ експериподальшому - бичачу кров (БК) або сироватку менту — за даними традиційного патоморфолопч(БС) у сублетальній дозі Для цього попередньо ного дослідження, серед яких найбільш ілюстративизначають летальну дозу шляхом введення 3-4 вними були сформовані кавернозні порожнини із білим щурам зазначений субстрат — кров або сискупченням значної КІЛЬКОСТІ альвеолярних макророватку з розрахунку 5мл кг1 першій тварині, 7мл фагів, як це було представлено на Фіг 3 і 4 Слід кг 1 і 10 мл-кг — другій і третій, ВІДПОВІДНО Летатакож зазначити, що усі тварини в результаті мольною дозою вважають ту КІЛЬКІСТЬ сироватки, при делювання залишалися живими, придатними для введені якої тварина гине від набряку легень у подальших досліджень динаміки специфічного депроміжок часу між 10 — 20 хвилинами після інфузіструктивного процесу в легенях, ефективності заі Сублетальну дозу визначають як 0,75 летальної собів експериментальної терапії дози Відразу після введення крові або сироватки у сублетальній дозі у сіегнову вену щура вводять ваТаким чином, запропонований спосіб забезпекцину БЦЖ з розрахунку 0 1 мл кг 1 При цьому в чує більш високий, у порівнянні із способом-протосудинах легень піддослідної тварини відразу відтипом, рівень відтворення експериментальної мобувається утворення пристінкових лейкоаглютинаделі специфічного деструктивного процесу в легетів (Фіг 1) Внутрішньосудинна лейкоаглютинація нях, и інформативності чітко виявляється при люмінесцентній мікроскопи свіжозамороженого зрізу легеневої тканини білого Джерела інформації, які слід взяти до уваги щура через ЗО хвилин після внутрішньовенної ін1 Авербах М М , Гергерт В Я и Литвинов В И фузм ксеногенної сироватки в сублетальній дозі в Повышенная чувствительность замедленного типа комбінації з вакциною БЦЖ (Фіг 2) и инфекционный процесс М Медицина, 1974 Про сформований протягом 4-6 МІСЯЦІВ де2 Белов Е И , Демьяненко В В , Лазарев А М структивний туберкульозний процес у ПІДДОСЛІДНИХ Определение ангилейкоцшарных свойств сыворотварин свідчать виявлені при патопстолопчному тки при помощи люминесцентной микроскопии дослідженні каверни в легенях (Фіг 3-4) На специ/Пат физиол и эксперим терапия, 1972, т 3, № 1, фічну природу ураження легень у прижиттєвий пес 85-88 ріод формування моделі, починаючи з перших 2х 3 Демьяненко С М Количественная оценка 5 45192 6 клеточно-гуморальной реакции крови больных туСпосіб моделювання специфічного деструктиберкулезом на специфический аллерген — Пробл вного процесу в легенях Туб, 1979 №8, с 60-62 Фіг.1 (мікрофото) Фіг.2 (мікрофото) ото) 45192 Фіг.4 (мікрофото) Фіг.5 (мікрофото) Фіг.6 (мікрофото) ДП "Український інститут промислової власності "(Укрпатент) Україна, 04119, Киів-119, вул сім'ї Хохлових, 15 (044) 456-20-90