Спосіб прогнозування розвитку кризу відторгнення рогівкового трансплантата при проведенні кератопластики у хворих з васкуляризованими більмами рогівки

Спосіб прогнозування розвитку кризу відторгнення рогівкового трансплантата при здійсненні кератопластики у хворих з васкуляризованими більмами рогової оболонки ока, пропонований на підставі оцінки ступеня сенсибілізації організму до антигенів рогової оболонки ока, полягає в заборі 0,1-0,2 мл периферійної крові хворого в відділенні лейкоцитарно-лімфоцитарної суміші клітин, розподілі її на контрольний та дослідний зразки, який відрізняється тим, що в контрольний зразок додають фізіологічний розчин, а в дослідний стандартизований за білком антиген рогової оболонки ока ( концентрація 120 мкг/мл), здійснюють тест "активних" Е-РУЛ (розеткоутворюючих лімфоцитів) і при різниці відсотка "активних" Е-РУЛ в дослідному та контрольному зразках, що перевищує 10%, констатують можливість розвитку кризу відторгнення рогівкового трансплантата Винахід відноситься до медицини, зокрема до офтальмологи, може бути використаний для прогнозування кризу відторгнення трансплантата при проведенні пересадки рогівки у хворих з васкуляризованими більмами, у яких є високий ризик його розвитку Відомо, ЩО рогова оболонка ока уявляє собою високоспеціалізовану та багатокомпонентну за вмістом специфічних антигенів тканину (комплекс антигенів епітелію, строми та ендотелію) Імуноелекторофоретичним та імуноферментним методами встановлена наявність в рогівці майже 20 антигенів і при цьому визначено, що найбільш високий антигенний потенціал має епітелій рогової оболонки ока (Fujikawa L S , Calvin R В , Bhan А К , Fuller T С , Foster С S Expression of HLA-A/B/C and DR locus antigens on epithelial stromal and endothehal cells of the human cornea // Cornea 1982 - Voll - P 213-216) Внаслідок травми і ОПІКІВ очей, а також в результаті різних за етіологією патологічних процесів білкові компоненти рогової оболонки ока змінюють свої антигенні властивості і це веде до ймовірного розвитку аутосенсибілізацм організму до антигенів рогівки Внаслідок запальних процесів, які супроводжують рецидивуючі персистуючі дефекти та ерозії епітелію рогівки при дистрофічних захворюваннях рогової оболонки ока, як правило розвивається неоваскуляризація рогівки і при таких ускладнених більмах необхідним є проведення кератопластики з оптичною метою Дуже важливим є досягнення прозорого приживлення трансплантата з донорської рогівки та запобігання кризу відторгнення алотрансплантата в разі можливого розвитку реакції тканинної антигенної несувмістності (РТАН) Не дивлячись на те , що рогівка ока сама по собі є аваскулярною тканиною і дуже зручна для пересадки, появлення судин у неї ставить и близькою до паренхіматозних органів і значно підвищує ризик відторгнення трансплантата За даними літератури ризик відторгнення рогівкового трансплантата спостерігається у 75-80% хворих з васкуляризованими більмами рогівки (Каспаров А А , Аладинская И В Комбинированное применение циклоспорина при сквозной кератопластике//Материалы Юбилейной Всероссийской Научно-практической конференции, посвященной 100-летию Городской глазной больницы В А и А А Алексеевых Московского научно-исследовательского института глазных болезней им Гемгольца Москва - 2 0 0 0 - С 146) 00 ю 47258 Основною причиною розвитку кризу відторгнення трансплантата є наявність сенсибілізації організму до аутоантигенів рогівки і тому можливого розвитку специфічної іммунолопчної ВІДПОВІДІ до них В наслідку високого ризику розвитку кризу відторгнення рогівкового трансплантату у хворих з васкуляризованими більмами проводять імуносупресивну терапію Приймаючи до уваги те, що розвиток РТАН повязаний з розгортанням специфічного імунологічного конфлікту в тканинах рогівки, дуже важливим € своєчасне прогнозування кризу розвитку відторгення трансплантату І тому доцільно для його попередження визначити ступінь сенсибілізації організму до антигенів рогової оболонки Для прогнозування кризу відторгнення трансплантата пропонується використовувати нескладний імунологічний тест "активних" Е-РУЛ з додаванням антигену рогівки ока для визначення ступеня сенсибілізації організму до антигенів рогової оболонки, постанову якого легко здійснити в КЛІНІЧНИХ умовах для реалізації імунологічного моніторингу Найбільш близьким до заявляемого є спосіб прогнозування кризу відторгнення трансплантата за таким імунологічним методом, як HLA типування пар донора та реціпієнта за системою лейкоцитарних антигенів локусів А, В, С, DR (Р И Игнатов Изучение значения антигенов HLAсистемы для приживлення аллотрансплантата при кеартопластике на ожоговых бельмах и эти о патогенеза некоторых процессов патологических процессов органа зрения//Дис канд мед наук,- Одесса,- 1977) Недоліками цього імунологічного методу є те, що він надто складний для КЛІНІЧНОГО застосування , потребує попередньої оцінки ступеня тканинної несумістності за шкалою Рапопорта-Досе із врахуванням ступеня тканинної сумістності за HLA системою, ідентичності та неідентичності донора та реціпієнта за HLA системою Ймовірним є отримання ложних відповідей (можливі пререхресні імунологічні реакції"), а також нереальність проведення повсякденного імунологічного слідкування Проведення цієї методики потребує багато часу, складного обладнання та занадто дорогі іноземні реактиви Пропонуєма нами методика безпосередньо вказує на можливість розвитку РТАН, бо відбиває наявність та ступінь сенсибілізації організму до антигенів рогової оболонки ока, і необхідно підкреслити , що саме наслідком розвитку спеціфичної імунологічної ВІДПОВІДІ до цих спеціалізованих антигенів є розвиток кризу відторгнення трансплантата Крім того, слід зазначити, що в розвитку РТАН провідна роль належить реакціям Т-залежного клітинного імунітету і ці реакції мають високу специфічність Поставлена задача вирішується тим, що прогнозування розвитку криза відторгнення трансплантата, згідно за винаходом , визнається за імунологічним тестом, який оцінює ступінь сенсибілізації організму хворого до антигенів рогової оболонки ока на підставі змінення функціонального стану Т-лімфоцитів при контакті з вищезазначеними антигенами Причинно-наслідкові звязки Прогнозування здійснюють наступним чином З периферійної крові Можливість хворого виділяють розвитку криза лімфоцитарну взвісь отторгнення КЛІТИН, ОЦІНЮЮТЬ трансплантата функціональну активність визначають на підставі ступені Т-лімфоцитів за тестом оцінки "активних" Е-РУЛ in vitro сенсибілізації Використовують організму до антигенів фізіологічний розчин та рогівки ока стандартизований за збільшення інверсії % білком антиген рогової "активних" Е-РУЛ в оболонки ока ДОСЛІДНІЙ пробі в порівнянні з контрольною більшу ніж на 10% Спосіб прогнозування криза відторгнення трансплантата на підставі пропонуємого імунологічного тесту здійснюють таким чином 1 Вранці до прийому їжі периферійну кров 0,10,2мл з пальця, відокремлюють лейкоцитарнолімфоцитарну суміш клітин 2 Розкапують лейкоцитарно-лімфоцитарну суміш клітин у лунки імунологічної планшети по 0,05мл у кожну 3 Додають у дослідну лунку 0,05 стандартизований за білком (по Лоурі) антиген рогової оболонки ока (концентрація (20мкг мл), а у контрольну лунку - 0,05 фізіологічного розчину 4 Виконують інкубацію лейкоцитарнолімфоцитарної суміші у термостаті протягом ЗО хвилин 5 Додають у лунки імунологічної плати в усі проби облігатний Т-антиген - -0,05мл ерітроцитів баранав стандартній концентрації 0,02%, 6 Проводять інкубацію протягом 5 хвилин і зразу ж роблять мазки Мазки окрашують за Романовським-Гімзою 7 Лічать відносну КІЛЬКІСТЬ "активних" Е-РУЛ (розеткоутворуючих лімфоцитів) на 100 клітин лімфоцитарнош ряду в контрольних і дослідних зразках Різниця у відсотку " активних Т-клітин в контрольних і дослідних зразках визначає ступінь сенсибілізації організму до антигенів рогової оболонки 8 При збільшенні відсотку інверсії" активних" Е-РУЛ в дослідному зразку в порівнянні з контрольним більше як на 10% свідчить про можливість розвитку кризу відторгнення трансплантата КЛІНІЧНІ дослідження проведені в Інституті очних хвороб та тканинної терапії їм В П Філатова АМН України у відділах пересадки рогової оболонки ока та ОПІКІВ очей Обґрунтування щодо використання імунологічного тесту оцінки ступеня сенсибілізації організму до антигенів рогівки з метою прогнозування кризу відторгнення трансплантата стала клінічна розробка та імунологічний контроль в динаміці спостережень за 139 хворими з опіками очей 111 -V ступенів, а також за 26 пацієнтами з 47258 судинною стадією вторинної єндотедіальноепітеліальною дистрофією рогівки Обстежені хворі з опіками очей тяжких ступенів були розподілені на такі групи 1 група - (41 хворий) з опіками очей III ступеня важкості уражень коньюнктиви і рогівки, в цій групі хворих була застосована консервативна терапія без хірургічного лікування 2 група - 63 хворих ( опіки III і IV ступенів ) отримувана консервативне і оперативне лікування, у них була здійснена однократна кератопластика 3 група - 35 хворих (опіки III-IV ступенів) отримувала консервативне і оперативне лікування, однак вони в подальшому потребували ретрансплантацм, яка була необхідна внаслідок расплавления трансплантата після першого проведення пересадки рогової оболонки ока Дані, щодо ступеню сенсибілізації організму до антигенів рогової оболонки ока у хворих вищезазначених груп за пропонуємим імунологічнім тестом представлені в таблиці 1 Таблиця 1 Ступінь сенсибілізації організму до антигенів рогової оболонки ока у хворих з опіками очей тяжких ступенів за тестом " активних" Е-РУЛ Групи хворих з опіками очей Контроль (п=74) Ігрупа(п=41) Ступінь сенсібілізацм організму до антигенів рогової оболонки ока (М=±ш) 5,4 ±0,61 8,34±1,03 дистрофії рогівки проведено також вивчення можливості застосування запропонованого тесту для прогнозування криза відторгнення рогівкового трансплантата при проведенні у цих хворих кератопластики з оптичною метою Імунологічне обстеження у всіх хворих проведено до оперативного лікування Обстежені хворі були розподілені на 2 групи в залежності рій від ступеню сесибілізацм організму до антигенів рогівки ) В 1-шій групі (15 пацієнтів ) відмічалися КЛІНІЧНІ ознаки розвитку РТАН, в 2-ій групі (11 пацієнтів) КЛІНІЧНИХ ознак кризу відторгнення трансплантату не визначалося, В таблиці 2 наведені фактичні дані, що до визначення за пропонуємим тестом "актвних" ЕРУЛ ступені сенсибілізації організму до антигенів рогової оболонки ока у хворих з васкуляризованою стадією ендотеліально-єпітеліальній дистрофії рогівки, у яких була здійснена кератопластика Таблиця 2 Ступінь сенсибілізації організму до антигенів рогової оболонки ока у хворих з судинною стадією вторинної ендотеліально- епітеліальній дістрофм рогівки за тестом "активних" Е-РУЛ Групи хворих з дістрофією рогівки Р Ступінь сенсібілізацм організму до антигенів рогової оболонки ока (М=±г) 1 група п=15 2 група п=11 РК-І