Спосіб імунотерапії аутовакциною хворих раком легені

Спосіб імунотерапії аутовакциною хворих раком легені, який полягає в тому, що імунотерапію починають на 7 - 10 день після радикальної операції шляхом 3-разового підшкірного введення аутовакцини з інтервалом в 7 днів, який відрізняється тим, що застосовують аутовакцину, виготовлену з пухлинних клітин, оброблених фільтратом культуральної рідини мікроорганізму В subtihs В-7025 в дозі 2,5 - 4,5мл по наростаючій з наступною ревакцинацією через 3 - 4 МІСЯЦІ Винахід стосується медицини, а саме онкології і може використовуватися при імунотерапії оперованих хворих раком легені Статистичні дані свідчать, що у зв'язку з погіршенням екологичної ситуації, на початку третього тисячоліття основною причиною смерті на планеті стане рак легені У багатьох державах Европи, США, а також в Україні рак легені вийшов на перше місце в структурі онкологічної захворюваності чоловічого населення За даними ВООЗ в Европі щодня від раку легені помирає біля 300 хворих В Україні захворюваність на рак легені в 1999 році становила 43,7, а смертность від раку легені становила 35,9 на 100 тисяч населення [1] 70% хворих на рак легені виявляють лише при III-IV стадії Тому радикальне хірургічне лікування можливе тільки у обмеженого контингенту хворих Розширення об'єму операції, до цього часу, характеризується незадовільними віддаленими результатами п'ятирічний термін переживають лише 10 - 20% оперованих хворих Особливо важливе прогностичне значення має наявність метатсатичного пошкодження репонарних лімфатичних вузлів В такому випадку більше 3-х років живуть тільки 8% хворих, тоді як 3- і 5-річне виживання хворих з інтактними лімфатичними вузлами становить ВІДПО імунотерапії при комбінованому лікуванні хворих обумовлена и перевагами перед променевою та хіміотерапією Імунотерапевтичні заходи діють на ЗЛОЯКІСНІ клітини незалежно від фази клітинного циклу і на відміну хімюпроменевої терапії не пошкоджують нормальні клітини Найчастіше імунотерапія застосовується як ад'ювантний (післяопераційний) спосіб при лікуванні злоякісних пухлин Відомо, ЩО імунотерапевтичні методи і без залучення хімю-або радіологічних методів можуть забезпечити пролонгований КЛІНІЧНИЙ ефект Саме тому імунотерпія розглядається як четвертий основний спосіб в онкології і включає в себе різні методи впливу як на злоякісну клітину, так і на імунну систему Перші спроби лікування починалися з неспецифічної імунотерапії раку за допомогою мікробів Один з мікробних імуностимуляторів відомий під назвою БЦЖ При роботі з ним розкрито основні явища, властиві неспецифічній імуномодуляцм Проведені рандомізовані випробування (терапія БЦЖ раку легені) показали, що статистично значущої різниці між досліджуваними і контрольними групами не виявлено Ефективність імунотерапії за допомогою мікроорганізмів-імуномодуляторів у хворих на рак легені в цілому низька Але є спостереження про збільшення тривалості життя у хворих при використанні імунотерапії за допомогою БЦЖ [2] ВІДНО 40 і 20% Порушення в системі імунітету у хворих на рак легені доведено багатьма дослідженнями Спочатку виникають зміни в системі управління функціями лімфоідних клітин, так як ця система виявляється найбільш вразливою У зв'язку з цим все більшого значення набувають комбіновані методи лікування раку легені Актуальність використання У зв'язку з цим актуальний пошук нових способів комбінованого лікування хворих раком легені при використанні специфічної імунотерапії Відомо, ЩО специфічна імунотерапія включає методи активації специфічного протипухлинного ю 51420 імунітету за допомогою імунізації шактивованими або живими ауто-та алогенними пухлинними клітинами, які входять до складу протиракових вакцин Такі вакцини містять пухлиноасоційовані антигени (ПАА), котрі стимулюють активність Тлімфоцитів, цитотоксичних антитіл проти специфічних мішеней, а також утворення цитокинів Такі ПАА містяться в цілих або лізованих пухлинних клітинах Найчастіше в ОНКОЛОГІЧНІЙ практиці використовують аутолопчні вакцини, в яких імуногенність ПАА підсилена за допомогою ХІМІЧНИХ речоп 0МЄНІВ вин, у- Р > непатогенних вірусів і мікроорганізмів (вірус коров'ячої віспи, хвороби Ньюкастла, БЦЖ) Частіше всього для імунотерапії хворих на рак п 0МІНенІ легені використовували у - ° Р аутолопчні пухлинні клітини сумісно з БЦЖ [3, 4], при цьому суттєвий лікувальний ефект досягався лише при ранніх (І-ІІ) стадіях захворювання Відомий спосіб лікування хворих на рак легені після радикальної операції за допомогою пухлиноасоційованих глікопротешів, виділених з клітин раку легені, який свідчить про суттєве збільшення лікувального ефекту лише у пацієнтів з І - II стадією захворювання [5] Також ВІДОМІ розробки способу специфічної імунотерапії онкологічних хворих, засновані на використанні універсальних технологій приготування імуномодуляторів з пухлин різного походження з високою терапевтичною активністю Такий спосіб був розроблений Д Г Затулою і заснований на інактивації пухлинних клітин без втрати імуногенних властивостей за допомогою культуральної рідини мікроорганізму В subtihs АБ-56 Оброблені таким способом клітини як експериментальних, так і пухлин людини одержували здатність активувати імунні реакції, що ефективно попереджало розвиток рецидивів та метастазів у післяопераційному періоді [ 6 ] Найбільш близьким аналогом до способу, що заявляється, є спосіб післяопераційної імунотерапії хворих раком легені [7], який полягає втому, що імунізацію хворих починали на 7 - 10 день після операції шляхом підшкірного введення аутовакцини, виготовленої з використанням штаму В subtihs АБ-56 Курс імунізації складався з 3 ІН'ЄКЦІЙ (3 5мл) по наростаючій з тижневим інтервалом, з наступною ревакцинацією через 3 МІСЯЦІ Сумарна доза введення по білку становила 220мг У вакцинованих пацієнтів не зареєстровано побічних ефектів і тільки у 21,2% хворих спостерігали пірогенні реакції транзиторного характеру (підвищення температури тіла до 37,5 - 37,8°С на протязі 4 - 6 годин), котрі після прийняття парацетамола зникали без ускладнень, 17,3% пацієнтів скаржились на біль в МІСЦІ введення вакцини В основу винаходу, що заявляється, поставлено задачу удосконалення способу імунотерапії хворих раком легені після операції, шляхом використання протипухлинної аутовакцини з вищою імуногенністю і створення такої схеми лікування хворих, яка дозволила б стимулювати більш виражену протипухлинну резистентність організму, щоб забезпечити попередження розвитку рецидивів та метастазів, покращити якість життя лікованих пацієнтів і таким чином підвищити ефективність лікування Поставлена задача вирішується тим, що застосовують протипухлинну аутовакцину, виготовлену з пухлинних клітин, оброблених фільтратом культуральної рідини мікроорганізму В subtihs B7025 [8], в дозі 2,5 - 4,5мл по наростаючій з наступною ревакцинацією через 3 - 4 МІСЯЦІ Використання аутовакцини з більш вираженою імуногенністю дозволяє зменшити дозу введення вакцини для зменшення білкового навантаження на організм, що позитивно впливає на стан хворих раком легені при імунотерапії Імунотерапію аутовакциною починають на 7 10 день після операції, щоб дати хворому достатньо часу на реабілітацію після імунодепресії, яку могли викликати анестезія і хірургічне втручання Суть способу імунотерапії аутовакциною хворих раком легені полягає втому, що на 7 -10 день після операції хворим проводять підшкірне 3разову імунізацію аутовакциною, виготовленою з пухлинних клітин, оброблених фільтратом культуральної рідини мікроорганізму В subtihs B-7025 в дозі 2,5 - 2,5мл по наростаючій з наступною ревакцинацією через 3 - 4 МІСЯЦІ Аутовакцину стандартизували по білку, визначали його по методу Lowry, сумарна доза становила 185мг Дозу аутовакцини для терапії підбирали і контролювали, використовуючи реакції гиперчутливості уповільненого типу (РГУТ) В КЛІНІЧНІЙ імунологи позитивна РГУТ розцінюється як сприятлива прогностична ознака і свідчить про формування клітинного імунітету Тобто корелює з активністю Т-лімфоцитів-хелперів періферійної крові, котрі є необхідними для генерації специфічних протипухлинних лімфоцитів Вивчення імунологічних параметрів у крові лікованих пацієнтів проводили до вакцинації і після и завершення, відмічена нормалізація показників КЛІНІЧНІ випробування способу проводили у відділенні торакальної онкології Інституту онкології АМН України Способом, що заявляється, у післяопераційному періоді проліковано протипухлинною аутовакциною (ПАВ) 27 хворих - основна група Серед них 24 (88,9%) ЧОЛОВІКІВ та 3 (11,1%) жінок Вік хворих знаходився у межах 31 - 72 років Середній вік складав 54,1 ± 5,8 роки Центральна форма раку відмічена у 14 (51,8%), періферична - у 13 (48,1%) Розповсюдженість процесу ВІДПОВІДНО до міжнародної класифікації TNM подана утаблиці 1 Таблиця 1 Розподіл хворих на рак легені по стадіях TNM Стадія КІЛЬКІСТЬ хворих Абсолютне число Ті No Mo Ті Ni Mo Т2 No Mo T2 Ni Mo Тз No Mo Тз Ni Mo Тз N2 Mo Всього 1 1 5 4 10 3 3 27 % 3,7 3,7 18,5 14,8 37,1 11,1 11,1 100,0 51420 Розподіл хворих на рак легені по стадіях (ВОРО 58,82 38,24 03) І стадія - 7 (25,93%), II стадія - 4 (14,81%) хвоРО+ПАВ 70,00 40,00 Ті з Ni 2Mo рих, ІІІА стадія - 16 (59,26%) хворих У 37,04% хвоРО 30,00 20,00 рих виявлено метастази в лімфатичних вузлах Морфологічна структура пухлин представлена в Враховуючи незначну КІЛЬКІСТЬ хворих, для таблиці 2 аналізу виживання в залежності від гістологічної форми пухлини, всіх хворих (з ІІІА стадією) розпоТаблиця 2 діляли на 2 підгрупи хворі з плоскоклітинним раком і хворі з іншими ГІСТОЛОГІЧНИМИ формами раку ГІСТОЛОГІЧНІ форми раку легені Таблиця 4 ГІСТОЛОГІЧНИЙ ТИП КІЛЬКІСТЬ хворих % Абсолютне число ПЛОСКОКЛІТИННИЙ Аденокарцинома Недиференційований Всього 11 12 4 27 40,74 44,44 14,82 100,0 Всім хворим проведені радикальні оперативні втручання пневмонектомія - 10 (37,1%), лоб- та білобектомія - 15 (55,5%), часткова резекція - 2 (7,4%) В контрольній групі були аналогічні хворі (54 пацієнта), яким проведена тільки радикальна операція (РО) Вказані групи були однорідними за віком, стадіями захворювання, наявністю супроводжуючої патологи, видами оперативних втручань Результати ефективності лікування хворих на рак легені після імунотерапії аутовакциною порівнювали з результатами лікування у групі хворих після самостійної радикальної операції (контрольна група) Основними критеріями ефективності лікування були якість і тривалість життя лікованих пацієнтів Враховуючи те, що більше половини хворих на рак легені помирає на протязі перших двох років, основну увагу приділяли двох-та п'ятирічному виживанню хворих Віддалені результати радикального хірургічного лікування з використанням способу імунотерапії аутовакциною аналізували в залежності від основних прогностичних факторів стадії розповсюдженості по лімфатичних вузлах (N) - таблиця 3, гістологічної форми пухлини -таблиця 4 Приведені дані 2-х та 5-ти річного виживання в усіх групах хворих які одержували лікування за способом, що заявляється, перевищували аналогічні в групах хворих, лікованих за способом - прототипом Таблиця З Виживання хворих раком легені в залежності від стадії хвороби та наявності репонарних метастазів (No або Ni 2) після лікування Стадія пухСпосіб лікулинного провання цесу РО+ПАВ І-ІІ РО ІІІА Ті з NoMo РО+ПАВ РО РО+ПАВ Виживання,% 2 роки 5 років 100,00 77,27 62,50 28,13 82,35 63,64 54,55 43,75 9,38 58,82 Залежність виживання хворих від гістологічної форми раку легені (ІІІА стадія) після лікування Гістологічна фо- Спосіб лірма раку кування РО+ПАВ Плоскоклітинний РО Не плоскоклі- РО+ПАВ тиннии РО Виживання,% 2 роки 5 років 72,73 63,64 31,82 13,64 62,50 31,25 21,88 9,38 Дані таблиці свідчать, що найбільш виражений лікувальний ефект спостерігали при 5-річному виживанні у пацієнтів з плоскоклітинною формою раку після лікування їх способом, що заявляється Аналізуючи одержані результати, необхідно підкреслити, що показники виживання в групах імунізованих хворих перевищували аналогічні в контрольних групах Але слід ВІДМІТИТИ, ЩО у хворих раком легені І-ІІ стадії тільки через 2 роки після операції відмічено достовірну різницю між групами, тоді як у хворих ІІІА стадії застосування протипухлинної аутовакцини сприяло суттєвому збільшенню показників виживання як через два, так і через п'ять років спостереження Показники 5річного виживання становили 43,75% проти 9,38% в контролі Необхідно підкреслити, що імунотерапія аутовакциною сприяє підвищенню показників виживаності, як при плоскоклітинному раку легені, так і при його не плоскоклітинних формах Лише з тією різницею, що найкращі показники ефективності лікування спостерігали при 5-річному виживанні хворих з плоскоклітинним раком - 63,64% проти 13,64% в контролі Після імунізації аутовакциною у пацієнтів не спостерігали ніяких побічних реакцій Відмічена нормалізація імунологічних показників та покращення якості життя лікованих пацієнтів на 70% ( по Карневському) Отже, одержані позитивні результати ефективності лікування хворих за способом, що заявляється, свідчать про ДОЦІЛЬНІСТЬ і перспективність застосування імунотерапії аутовакциною хворих раком легені, особливо при ІІІА стадії і навіть при наявності метастазів (Ni 2) Суть способу пояснюють таблиці 1-4 і приклади (1,2) конкретного виконання Приклад 1 Хворий Чег-цев Є П , 1949 р н , історія хвороби № 5077 Діагноз рак легені III стадія, II кл гр (T3N0M0) Операція 18 09 96-пневпульмонектомія зліва Через 8 днів після операції провели імунотерапію аутовакциною 3-разово, підшкірне в дозі 51420 2,5мл, 3,5мл, 4,5мл з інтервалом 7 днів Після закінчення імунізації через 3 МІСЯЦІ провели одноразову ревакцинацію в дозі 4,5мл В процесі лікування визначали імунологічні показники КІЛЬКІСТЬ Т-лімфоцитів - до операції 20,7 ± 2,4%, після імунізації 38,9 ± 1,9% (норма 40,4 ± 2,1%) Проліферативна активність лімфоідних клітин (РБТЛ) з ФГА-до операції 43,1 ± 2,5%, після імунізацм-65,5 ± 4,3%, (норма 70,1 ± 3,6%) Фагоцитарна активність нейтрофілів крові по відношенню В megatenum H (модель пухлинної клітини) - до операції 52,1 ± 3,9%, після І введення аутовакцини -65,3 ± 4 , 1 % , після III введення аутовакцини -89,5 + 7,5% Рівень, імуноглобулінів в сироватці крові ІдА до операції - 2,6 ± 0,05г/л, після імунізації - 1,7 ± 02г/л (норма -1,58 ± 0,08г/л ), ІдМ -до операції -1,2 ± 0,07г/л, після імунізації - 0,92 ± 0,03г/л,(норма 0,85±0,06г/л) Концентрація циркулюючих імунних комплексів (ЦІК) до операції -90,5 ± 11,0од , після імунізацм57,1 ± 5,8од , (норма - 58,9 ± 7,8од) Отже імунотерапія аутовакциною сприяла активації і нормалізації імунного комплексу Приклад 2 Хворий Біл-ко О О , 1951 р н , історія хвороби № 1361 Діагноз рак легені ІІІА стадія (T3NoMo) Операція 18 03 98-пневмонектомія зліва Через 7 днів після операції провели імунотерапію аутовакциною 3-разово підшкірно в дозі 2,5мл, 3,5мл, 4,5мл з інтервалом 7 днів Після закінчення імунізації через 4 МІСЯЦІ провели одноразову ревакцинацію в дозі 4,5мл В процесі лікування визначали імунологічні показники КІЛЬКІСТЬ Т-лімфоцитів - до операцм-26,7 ± 2,7%, після імунізації -38,0 ± 1,0% (норма 40,4 ± 2,1%) Проліферативна активність лімфоідних клітин - до операції 48,1 ± 2,6%, після імунізацм-66,8 ± 4,8%, (норма 70,1 ± 3 , 6 % ) Фагоцитарна активність нейтрофілів крові по відношенню В megatenum H (модель пухлинної клітини) - до операції 53,8 ± 3,0%, після І введення аутовакцини -65,8 ± 4,7%, після III введення аутовакцини -88,6 ± 7,8% Рівень, імуноглобулінів в сироватці крові - ІдА 8 до операції - 2,8 ± 0,06г/л, після імунізації - 1,78 ± 02г/л (норма -1,58 ± 0,08г/л ), ІдМ -до операцм-1,4 ± 0,07г/л, після імунізації - 0,98 ± 0,08г/л, (норма 0,85±0,06г/л) Концентрація циркулюючих імунних комплексів (ЦІК) - до операції -96,5 ± 10,6од , після імунізацм59,7 ± 6,8од , (норма- 58,9 ± 7,8 од) Концентрація циркулюючих імунних комплексів (ЦІК) - до операції -90,5 ± 11,0од , після імунізацм57,1 ± 5,8од , (норма- 58,9 ± 7,8 од) Джерела інформації 1 Захворюваність, смертність, показники ДІЯЛЬНОСТІ онкологічної служби Бюллетень національного канцер-реєстру України Київ, 2001 116с 2 Macchiarim P, Hardm M, Angiletti C A Longterm evaluation of mtrapleural bacillus CalmetteGuenn with or without adjuvant chemotherapy in completely resected stages II and III non-small-cell lung cancer AmJ Clm Oncol 1991, 14(4) 291-7 3 Schulof RS, Mai D, Nelson MA, Paxton HM, Cox JWJr, Turner ML, Mills M, Hix WR, Nochomovitz LE, Peters LS Active specific immunotherapy with an autologous tumor cell vaccine in patients with resected non-small cell lung cancer Мої Biother 1988, 1 30-6 4 Stack BH, McSwan N, Stirling JM Autologous X-irradiated tumour cells and percutaneous BCG in operable lung cancer Thorax 1982, 37 588-93 5 Takita H, Hollmshead AC, Adler RH, Bhayana J, Ramundo M, Moskowitz R, Rao UN, Raman S Adjuvant, specific, active immunotherapy for resectable quamous cell lung carcinoma a 5-year survival analysis J S u r g Oncol 1991, 46(1) 9-14 6 Затула ДГ Микроорганизмы, рак и противоопухолевый иммунитет Киев Наук думка, 1985 247с 7 Потебня ГП, Смоланка ИИ, Лисовенко ГС, Ромашко НИ, Семерников ВА, Колесник ЕА Эффективность иммунотерапии аутовакциной при лечении больных раком легкого Онкология 2000, 2(3) 191-4 8 Заявка № 2001042565 від 17 04 2001 на винахід «Штам бактерій Bacillus subtihs продуцент протипухлинних цитотоксичних речовин» ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71