Комплекси ртуті з цистеїном і метіоніном, спосіб їх одержання та засіб імуномодулюючої, противірусної, протипухлинної та протиалергічної дії

1 Комплекси ртуті з цистеїном формули Нд(СзНбО23г\І)2 або з метіоніном формули Hg(CsHio02SN)2, які мають імуномодулюючу, противірусну, протипухлинну та протиалерпчну дію 2 Спосіб одержання комплексів ртуті з цистеїном або метіоніном, який включає взаємодію дихлориду ртуті з водним розчином цистеїну або метіоніну при співвідношенні ртуті і відповідної аамінокислоти, яке дорівнює 1 (2-3), отриманий розчин витримують при 50-60 ° С протягом доби, упарюють, залишок охолоджують до кімнатної температури, а осад, який утворився, обробляють ацетоном і сушать до постійної ваги Винахід відноситься до біоорганічної хімії та експериментальної медицини, зокрема до одержання комплексів сіркувміщуючих а-амшокислот із ртуттю, а також композицій на їх основі, які мають імуномодулюючу, противірусну, протипухлинну та проти алергічну дії Широко ВІДОМІ різні лікарські препарати, які моделюють процеси імунітету Зокрема, здатністю стимулювати імунні реакції організму володіють ПОХІДНІ нуклеїнової кислоти Здатністю специфічно активувати імунокомпетентні клітини (Т- і В- лімфоцити) володіють препарати пірогенан, продіпозон та ІНШІ (див Машковский М Д "Лекарственные средства" Харьков, "Торсинг", 1997, т 2, с 206, 206) Заявнику невідомі комплекси сіркувміщуючих а-амшокислот (цистеїн, метіонін) із ртуттю, або іншою речовиною, які мають імуномодулюючу, противірусну, протипухлинну та проти алерпйну Д" Відомий засіб імуномодулюючої, протипухлин ТА ЗАСІБ 3 Засіб імуномодулюючої, противірусної, протипухлинної та протиалерпчної дії, що містить ртутєорганічний комплекс і розріджувач, який відрізняється тим, що як ртутєорганічний комплекс він містить комплекс ртуті з цистеїном формули Нд(СзНбО23г\І)2 або з метіоніном формули Hg(CsHio02SN)2, а як розріджувач - дистильовану воду або безалкогольний бальзам "ВИН-ВІТА", при такому співвідношенні компонентів, мас % комплекс ртуті з цистеїном або метіоніном 0,048-0,066 дистильована вода або безалкогольний бальзам "ВИН - ВІТА" до 100 4 Засіб за п 3, який відрізняється тим, що комплекс ртуті з цистеїном формули Нд(СзНбО23г\І)2 він містить у КІЛЬКОСТІ 0,048 - 0,059 мас % 5 Засіб за п 3, який відрізняється тим, що комплекс ртуті з метіоніном формули Hg(CsHio він містить у КІЛЬКОСТІ 0,054 - 0,066 мас % ної, противірусної та знеболюючої дії, який містить діючу речовину і розріджувач Як діючу речовину засіб містить дихлорид ртуті або калію арсеніт, або натрію арсенат Як розріджувач засіб містить натуральне біле виноградне вино з вмістом цукру 3 4 мас %, або молочну сироватку, також з вмістом цукру 3 - 4 мас % Діючу речовину розріджувач містить 0,001 -1,5 мас %, а розріджувач - решту до 100 мас % (див патент України № 26641, С1 на винахід "Засіб імуномодулюючої, протипухлинної, противірусної та знеболюючої дії", 1999 р ) Можна припустити, що ця система уявляє собою ртутьорганічний комплекс, в якому дихлорид ртуті (сулема) знаходиться в структурнозв'язаному стані з органічними сполуками, зокрема білого вина Цей засіб обрано прототипом засобу імуномодулюючої, противірусної, протипухлинної та протиалерпчної дії, що заявляється Прототип співпадає з винаходом, що заявля 00 о со ю ю 55308 ється, в наявності спільних ознак - діюча речовина, до складу якої входить ртуть, - розріджувач (багатоводна система) Але ртутьорганічний комплекс, який має місце у відомому засобі, не виділений у чистому виді, склад його невідомий і не вивчений Добре відомо, що сулема (дихлорид ртуті) має здатність взаємодіяти не тільки зтюловими сполуками вина, а й зі сполуками, до складу яких входять такі функціональні групи як -СООН, -NH, -ОН, що значно утруднює одержання об'єктивних даних Посереднім підтвердженням цього є дані, наведені в патенті Індії № 167710, 1990 р, в якому наведена композиція непевного складу, що призначена для внутрішнього застосування при захворюванні на рак м'яких тканин Крім того, складність і неповнота дослідження біоорганічного комплексу білого вина, властивості якого в значному ступені залежать від багатьох природних умов (температура, вологість, грунт і т інш ) не дозволяє стандартизувати відомий засіб Це викликає певні сумніви щодо об'єктивності даних про стабільність фармакологічної дії відомого засобу В основу винаходу поставлено задачу створити діючу речовину, розробити спосіб її одержання й отримати засіб імуномодулюючої, противірусної, протипухлинної та протиалерпчної дії, до складу якого увійде діюча речовина, який забезпечить фармакологічну дію і можливість стандартизації як фармацевтичного засобу Поставлена задача вирішена групою винаходів, що об'єднані єдиним винахідницьким задумом, а саме 1 Комплексами ртуті з цистеїном і метіоніном, 2 Способом одержання раніше не відомих комплексів, 3 Імуномоделюючим, противірусним, протипухлинним та протиалерпчним засобом, який містить як діючу речовину вказані комплекси В першому винаході поставлена задача вирішена синтезом комплексів ртуті з цистеїном формули Нд(СзНбО23І\І)2 або з метіоніном формули Hg(CsHio02SN)2, які мають імуномодулюючу, противірусну, протипухлинну та протиалерпчну дії В другому винаході поставлена задача вирішена тим, що до розчину цистеша чи метюніна в дистильованій воді додають дихлорид ртуті, після повного розчинення якого і термостатирування розчину компонентів на протязі доби, воду відганяють на роторному випарнику, колбу з залишком поміщають у баню з льодом, осад що утворився обробляють ацетоном, відфільтровують і сушать В третьому винаході поставлена задача вирішена в засобі імуномодулюючої, противірусної, протипухлинної та протиалерпчної дії, що містить ртутьорганічний комплекс і розріджувач тим, що як ртутьорганічний комплекс він містить комплекс ртуті з цистеїном формули Нд(СзНбО23І\І)2 або з метіоніном формули Hg(CsHio02SN)2, а як розріджувач - дистильовану воду або безалкогольний бальзам "ВИН-ВІТА", при такому співвідношенні компонентів, мас % з метіоніном або цистеїном 0,048 - 0,066 дистильована вода або безалкогольний бальзам "ВИН-ВІТА" до 100 З науково-технічної і патентної літератури невідома структура і властивості синтезованих комплексів ртуті з цистеїном і метіоніном Заявляємі комплекси - конкретні ХІМІЧНІ сполуки, які мають стабільну медико-бюлопчну активність Невідомий також засіб, що містить вказані комплекси ртуті з цистеїном або метіоніном і дистильовану воду або безалкогольний бальзам "ВИН-ВІТА", який має імуномодулюючу, противірусну, протипухлинну та протиалерпчну дії Безалкогольний бальзам "ВИН-ВІТА" - це концентрат бюфлавоноідів, які виділені з шкірки темних сортів винограду, типа "Каберне" (ТУУ 21032903-001-95) Він рекомендований для вживання як тонізуючий засіб, природний антиоксидант (Висновок Міністерства охорони здоров'я України № 22-04-02 /1480 від 09 111995р. Реєстраційне свідоцтво Міністерства здоров'я Російської Федерації № 001154 21 від 04 10 99р) Режими здійснення способу підібрані експериментально Зокрема, співвідношення дихлорида ртуті і аамінокислоти (цистеїну або метіоніну) повинні бути в межах 1 (2-3) Зменшення КІЛЬКОСТІ аамінокислоти, або збільшення КІЛЬКОСТІ дихлорида ртуті призводить до суттєвого зменшення виходу комплексів Сказане підтверджується даними, наведеними в таблиці 1 Таблиця 1 Одержання комплексів дихлорида ртуті з сірковмістними а-амінокислотами (цістеїном і метіоніном) N п/п 1 2 3 4 Мольне співвідношення дихло- Вихід комплексу від максимально- Вихід комплексу від максимальрид ртуті а-амшокислота го, % (для цистеша) ного, % (для метюніна) 12 100 100 13 100 100 1 1 50 45 21 50 ЗО Зниження температури витримки розчину також призводить до зниження виходу комплексів Збільшення температури недоцільно Сказане підтверджується даними, наведеними в таблиці 2 55308 Таблиця 2 Вплив температури на одержання комплексів дихлорида ртуті з сірковмістними а-амшокислотами N п/п Температура, °С одержання комплексів Вихід комплексу від максимального, % (для цистеша) Вихід комплексу від максимального, % (для метюніна) 5 6 7 8 ЗО 40 50 60 50 80 100 90 40 80 100 95 КІЛЬКІСТЬ комплексу Нд(СзНбО23І\І)2 у складі засобу пояснюється наступним зменшення ( 0,059 мас %) призводить до появи нерозчинних часток, що недопустимо Аналогічна закономірність має місце і для комплексу Hg(CsHio02SN)2 Приклад 1 До розчину 2,42г (0,02 моля) цистеша в 50см дистильованої води додають 2,71г (0,01 моля) подрібненої солі дихлорида ртуті, диспергують м за допомогою мішалки до повного розчинення й отриманий розчин компонентів термостатують при температурі 50°С на протязі доби Потім, за допомогою роторного випарника, при температурі 80 - 85°С випарюють розчин, а колбу з залишком поміщають у баню з льодом Осад, що утворився, обробляють ацетоном, відфільтровують і сушать при кімнатній температурі до постійної ваги Отриманий комплекс має склад Hg(C3H6O2SN)2 Вихід продукту 35% від теоретичного Молекулярна маса, визначена методом масспектрометри складає 439 в о Ртуть визначали на атомно-абсорбційному спектрофотометрі "Сатурн" (погрішність виміру не перевищує 5%) Результати елементного аналізу наведені в таблиці З Таблиця З ХІМІЧНИЙ елемент Ртуть Вуглець Водень Кисень Сірка Азот Розраховане значення, % 45,5 16,3 Визначене експериментально, % 45,0 16,0 2,7 2,5 14,5 14,5 14,7 14,3 6,3 6,0 Приклад 2 До розчину метіоніну (0,02 моля) у 100см3 дистильованої води додають 2,71г (0,01 моля) подрібненої солі дихлорида ртуті, диспергують м за допомогою мішалки до повного розчинення й отриманий розчин компонентів термостатують при температурі 50°С на протязі доби Потім, за допомогою роторного випарника, при температурі 80 - 85°С випарюють розчин, а колбу з залишком поміщають у баню з льодом Осад, що утворився, обробляють ацетоном, відфільтровують і сушать при кімнатній температурі до постійної ва ги Отриманий комплекс має склад Hg(C5H10O2SN)2 Вихід продукту 30% від теоретичного Молекулярна маса, визначена методом масспектрометри складає 495 в о Результати елементного аналізу наведені в таблиці 4 Таблиця 4 ХІМІЧНИЙ елемент Ртуть Вуглець Водень Кисень Сірка Азот Розраховане значення, % 40,4 24,2 Визначене експериментально, % 39,7 24,0 40 3,7 12,9 12,9 12,6 13,3 6,6 5,5 Лікувальні властивості комплексів ртуті із сіркувміщуючими а-амшокислотами - цистеїном ("С") і метіоніном ("М"), досліджували у вигляді їхніх водяних розчинів та розчинів з безалкогольним бальзамом "ВИН-ВІТА" ("К") Для кращого розуміння дійсного винаходу приводяться наступні конкретні приклади приготування засобу, що заявляється, і його КЛІНІЧНИХ ІСПИТІВ Приклад 3 - засіб, що заявляється, наступного складу комплекс ртуті з цистеїном 0,48г (0,048 мас %) дистильована вода ЮООмл Засіб, що заявляється, готують таким чином Порошок комплексу ртуті з цистеїном розчиняють в дистильованій воді у вказаній КІЛЬКОСТІ у звичайних умовах при кімнатній температурі Отримують прозорий розчин, який придатний для використання Приклад 4 - засіб, що заявляється, наступного складу комплекс ртуті з метіоніном 0,54г (0,054 мас %) дистильована вода ЮООмл Засіб, що заявляється, готують аналогічно, як у Прикладі 3 Приклад 5 - засіб, що заявляється, наступного складу комплекс ртуті з цистеїном 0,59г (0,059 мас %) безалкогольний бальзам "ВИН-ВІТА" ЮООмл Порошок комплексу ртуті з цистеїном розчи 55308 няють в безалкогольному бальзамі "ВИН-ВІТА" у вказаній КІЛЬКОСТІ у звичайних умовах при кімнатній температурі Отримують прозорий розчин червоного кольору, який придатний для використання Приклад 6 - засіб, що заявляється, наступного складу комплекс ртуті з метіоніном 0,66г (0,066 мас %) безалкогольний бальзам "ВИН-ВІТА" ЮООмл Засіб, що заявляється, готують аналогічно, як у Прикладі 5 Фармакоімунолопчна ефективність препаратів комплексів ртуті із сіркувміщуючими аамінокислотами вивчалася на групі, що складалася з 32 хворих із наступними захворюваннями запальні процеси з алерпйним компонентом (10), без алергії і вірусного характеру (10), без активного запального процесу (7), меланобластоми (5) Критерієм імуномодулюючої активності препаратів служив навантажувальний тест з Е-РОК, що проводився в умовах стандартної інкубації лімфоцитів, що утворюють розетки з еритроцитами барана в присутності комплексів ртуті із сіркувміщуючими а-амшокислотами ВІДПОВІДНО ДО ЦЬОГО тесту, проводилося ви значення відносної процентної КІЛЬКОСТІ Тлімфоцитів за тестом спонтанного розеткоутворювання з еритроцитами барана (Е-РОК) і, після інкубації, з лікарським препаратом Об'єктом дослідження служила лейкоцитарнолімфоцитарна (Л/Л) суспензія клітин, отриманих ВІДПОВІДНО до методичних рекомендацій (Дегтяренко Т В , Макульнин Р Ф "Биогенные стимуляторы и иммунореактивность", т II, Одесса, 1997 — 194 с) 8 Постановка методу включає наступні етапи - Л/Л суспензія клітин по 0,05мл капалася в лунки імунологічної планшети Перша лунка - контрольна (додається 0,05мл середовища 199), в ІНШІ додається тестуємий препарат, - інкубація Л/Л суспензії в термостаті протягом ЗОхв при температурі 37°С, - додавання в лунки 0,05мл еритроцитів барана в стандартній концентрації (0,02%), - інкубація протягом 5 хвилин при кімнатній температурі і готування мазків, - підрахунок відносної КІЛЬКОСТІ активних ЕРОК на 100 кліток лімфоцитарного ряду в контролі і ДОСЛІДІ Оскільки, ОДНИМ З ГОЛОВНИХ факторів імуномодуляцм є здатність лікарського препарату взаємодіяти з мембранними адсорбованими білками, з денатурацією онкоасоційованого білка і звільненням від нього поверхні клітинної мембрани, що призводить до відновлення нормальної клітинної активності (Артемов А В "Нетоксическая лекарственная терапия рака, патофизиологические механизмы и клинические особенности", Одесса, 2002 — 244 с ) і виходячи з фармакоімунолопчної оцінки цього ефекту, імуномодулюючий вплив лікарського препарату можна оцінювати за аналогією зі ступенем сенсибілізації до аутоантигенів (Дегтяренко Т В , Макульнин Р Ф "Биогенные стимуляторы и иммунореактивность", т II, Одесса,1997 — 194 с ) Таким чином, розрізняють незначну сенсибілізацію - шпбірування Е-РОК у межах 5 - 10%, виражену - до 15% і високу - понад 15% Результати дослідження впливу препаратів на Е-РОК пацієнтів наведені в таблиці 5 Таблиця 5 Вплив препаратів на Е-РОК Зміна Е-РОК після інкубації з препаратом, % Нозологія "С" 2 1 Без активного запального процесу Запальні процеси з алергічним компонентом Вірусні та ІНШІ аутоімунні хронічні процеси Пухлини (меланоми) 2,6 ±2,0 21,2 ±1,4 13,3 ±4,4 15,3 ±9,5 Таким чином, отримані дані дозволяють зробити висновок про наявність вираженого імуномодулюючого ефекту в усіх тестуємих препаратах, що дозволяє рекомендувати їх для клінічної апро "М" 3 "К" 4 20,7 ±8,6 14,0 ±8,6 14,0±70 52,6 ±7,4 56,6 ±8,8 15,3 ±8,7 бації при цілому ряді хронічних процесів (алергії, вірусні інфекцій, аутоімунна патологія), а також при онкологічному процесі спільно з традиційними методами лікування Підписано до друку 03 04 2003 р Тираж 39 прим ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24