Спосіб лікування експериментального ураження нейрорецепторного апарата зорового аналізатора при інтоксикації метанолом

Спосіб лікування експериментальних уражень нейрорецепторного апарата зорового аналізатора при інтоксикації метанолом, що включає використання медикаментозної терапії і трансплантацію ембріональної нервової тканини, який відрізняється тим, що трансплантацію ембріональної нервової тканини здійснюють під оболонки штракраніальної частини n opticus Винахід відноситься до експериментальної офтальмології і може бути використаний як теоретична база для розробки нових методів лікування токсичних уражень нейрорецепторного апарату зорового аналізатора Ураження зорового аналізатора частіше є не самостійними захворюваннями, а наслідком різноманітних патологічних процесів, що локалізовані у різних відділах зорового тракту Серед причин уражень зорового аналізатора переважають різні захворювання центральної нервової системи (штракраніальні пухлини, запальні процеси мозку та його оболонок), включаючи черепно-мозкову травму, на другому МІСЦІ знаходяться загальні захворювання (атеросклероз і гіпертонічна хвороба) та інтоксикації, на третьому - захворювання очного яблука У багатьох випадках патологічний процес в ушкодженому оці призводить до таких змін очного яблука, що збережений в ньому зір не перевищує 10%, що обумовлює потребу в розробці нових методів лікування уражень нейрорецепторного апарату зорового аналізатора, які є найбільш тяжким ускладненням очних травм, ХІМІЧНИХ І ТОКСИЧНИХ отруєнь, неврологічної і кардіологічної патологи [1] никає при патологічних процесах, що охоплюють зоровий тракт, призводить до дистрофії, дегенерації і загибелі нейрональних клітин Однак, завдяки пластичності зорової системи, водночас відбувається посилена перебудова нейронів, що залишилися збереженими у зоні дефекту, яка завершується ростом нейритів з утворенням нових міжнейрональних зв'язків Нейрони, що раніше були малоактивними, активуються в усіх відділах зорового аналізатора, що сприяє компенсаторному перекриттю дефекту Важливо, що частина нервових волокон при ураженнях нейрорецепторного апарату зорового аналізатора не має виражених морфологічних змін, але втрачає функцію збудження і проведення нервового імпульсу - тобто знаходиться в стані парабютичного пригнічення Саме тому ВІДОМІ способи лікування уражень нейрорецепторного апарату зорового аналізатора засновані на створенні функціонального навантаження на зоровий нерв, без якого відновлення і нормалізація порушених функцій нейронів вважаються неможливими Зазвичай використовуються різні способи електростимуляції зорового нерва [2] Результатом такого лікування часткової атрофії зорового нерва є збільшення гостроти зору на 0,03-0,2, підвищення електричної, світлової чутливості, лабільності, розширення периферичного поля зору, зменшення або зникнення скотом Однак, результати такого лікування зберігаються в середньому впродовж 6-8 МІСЯЦІВ [3] Отже, недоліком способу електростимуляції зорового нерва є те, що він не забезпечує стабільного покращання функції нейронів зорового тракту, а також те, що спосіб передбачає стимулюючий вплив на Не дивлячись на різницю в етю патогенез і уражень нейрорецепторного апарату зорового аналізатора, їх загальною морфологічною основою є ушкодження нейронів на різних рівнях зорового тракту - від ганглюнарних клітин СІТКІВКИ ДО зорової кори головного мозку Високу чутливість нервової тканини до енергодефіциту обумовлює надзвичайна вимогливість нейрона до енергозабезпечення Тому енергетичний дефіцит, який ви ю ю ю 57525 парабютичні нейрони, які знаходяться в умовах енергодефіциту Аналогом запропонованого способу лікування експериментальних уражень нейрорецепторного апарату зорового аналізатора при інтоксикації метанолом є спосіб Є В Рогатиної, що полягає в електростимуляції частково атрофованого зорового нерва і патологічне зміненої СІТКІВКИ [4] Результатом такого лікування є підвищення гостроти зору і зникнення скотом у полі зору Однак, суттєвим недоліком електростимуляції, як відмічає особисто автор, є те, що часткове відновлення гостроти зору спостерігається тільки в разі відсутності морфологічних змін волокон зорового нерва Найбільш близьким аналогом (прототипом) запропонованого нами способу є спосіб лікування уражень нейрорецепторного апарату зорового аналізатора дистрофії СІТКІВКИ ока, описаний в патенті України 17297 А [5], який передбачає використання традиційної медикаментозної терапії і підсадку в субтеноновий простір ока ембріональної нервової тканини Традиційна медикаментозна терапія полягає у використанні тренталу по 1 таблетці 3 рази на день, натрію нітриту по 0,5мл під шкіру скроні №15, вітамінів В1, В6 по 1,0мл, чергуючи внутрішньом'язово №15, торфоту, ФіБСу по 1,0мл підшкірне №15, полівітаміни А, В, С, Е по 1 таблетці 3 рази в день, нікотинової кислоти по схемі внутрішньом'язово №15 Операція виконується таким чином після проведення місцевої анестезії роблять розріз кон'юнктиви довжиною близько 5мм на відстані 8мм від лімбу в верхньозовнішньому квадранті очного яблука Ретельно проводять гемостаз, потім відсепаровують тупо тенонову оболонку з епісклерою від склери, і тупою дугоподібною канюлею в утворений тунель до заднього полюсу ока вводять суспензію ЕНТ, ретельно звільнену від мозкових оболонок, об'ємом 8-1 Омм3 Кон'юнктивальний розріз закривають безперервним швом Накладають асептичну монокулярну пов'язку Проте, при даному способі введення, ЕНТ знаходиться на достатній відстані від зорового нерва, і тому потрібний терапевтичний ефект здійснюється неповною мірою, нейростимуляція та посилення репаративної регенерації нейронів за рахунок забезпечення безпосереднього контакту регіональних стовбурових клітин з ураженими ділянками n opticus відбувається недостатньо тання медикаментозної терапії і трансплантацію ембріональної нервової тканини, згідно винаходу, трансплантацію ембріональної нервової тканини здійснюють під оболонки штракраніальної частини n opticus ВІДМІННОЮ особливістю запропонованого способу є те, що ембріональна нервова тканина імплантується штракраніально під оболонки уражених зорових нервів, що забезпечує безпосередній контакт регіональних стовбурових клітин з ураженими ділянками n opticus та зменшує ступінь порушення його функції після інтоксикації метанолом Запропонований спосіб лікування експериментального ураження нейрорецепторного апарату зорового аналізатора при інтоксикації метанолом здійснюють наступним чином Моделювання ураження нейрорецепторного апарату зорового аналізатора проводять на кролях породи Шиншила на тлі традиційної медикаментозної терапії (трентал по 1 таблетці 3 рази на день, натрію нітрит по 0,5мл під шкіру скроні №15, вітаміни В1, В6 по 1,0мл, чергуючи внутрішньом'язово №15, торфот, ФіБС по 1,0мл підшкірне №15, полівітаміни А, В, С, Е по 1 таблетці 3 рази в день, нікотинова кислота по схемі внутрішньом'язово №15) шляхом внутрішньовенного введення метилового спирту в дозі 1,8г на кг маси тіла, попередньо розведеного 0,9% розчином натрію хлориду 50 50 Через 3 доби після введення метанолу, на тлі традиційної медикаментозної терапії, що включає (описати), проводять трансплантацію ембріональної нервової тканини Для трансплантації використовують тканину головного мозку 14добових ембріонів, отриманих шляхом кесаревого розтину вагітної самки, який проводять в стерильних умовах під внутрішньовенним наркозом сумішшю каліпсолу та реланіуму на 0,9% розчині натрію хлориду (50 та Юмг на кг маси ТІЛІ, ВІДПОВІДНО) Виділення головного мозку виконують під мікроскопом за стерильних умов з використанням мікрохірургічного інструментарію Після виділення головний мозок ретельно вивільняють з оболонок, розрізають на фрагменти розмірами 0,10,2мм3, відмивають в ізотонічному розчині натрію хлориду і розміщують в стерильних чашках Петрі з середовищем 199 в термостаті при температурі 37,5°С Об'єм трансплантата становить 0,15±0,05мм3 Задача, яку вирішує спосіб, що заявляється, полягає в оптимізацм умов для стабілізації і регресу патологічного процесу, стимуляції компенсаторно-відновних процесів, нейростимуляцм та посилення репаративної регенерації нейронів за рахунок забезпечення безпосереднього контакту регіональних стовбурових клітин з ураженими ділянками n opticus Технічний результат - експериментальне обґрунтування способу лікування уражень нейрорецепторного апарату зорового аналізатора при інтоксикації метанолом за допомогою алогенної трансплантації ембріональної нервової тканини Поставлена задача вирішується тим, що у способі лікування експериментального ураження нейрорецепторного апарату зорового аналізатора при інтоксикації метанолом, що включає викорис Трансплантацію ембріональної нервової тканини проводять через субфронтальний штракраніальний доступ до зорового нерва Після асептичної обробки операційного поля розтинають м'які тканини - перпендикулярно верхньому краю орбіти на межі внутрішньої і середньої третин Довжина розрізу становить 4-5см М'які тканини розводять розширювачем Янсена За допомогою распатера кісткуу МІСЦІ трепанації на площі 3,5x3,5см звільняють від окістя За допомогою фрези і пістолетних щипців Кюрісона виконують резекційну трепанацію черепа Тверду мозкову оболонку в площині трепанаційного вікна розтинають хрестоподібно та фіксують вузловими швами Надалі операційне втручання виконують з використанням операційного мікроскопа Обережно мозковим шпателем піднімають полюс лобної долі 57525 головного мозку, чим забезпечується доступ до штракраніальної частини зорового нерва від місця виходу з однойменного каналу до хіазми Очним скальпелем надсікають м'яку мозкову оболонку на віддалі 2-3 мм по виходу нерва із зорового каналу та проводять трансплантацію Введення трансплантату виконують за допомогою пристрою, що складається з вузла градуйованої мікроподачі, мікрогвинт якої жорстко зв'язаний з поршнем мікрошприца Гамільтона До шприца приєднана поліхлорвшілова трубочка, кінець якої з'єднаній зі скляною канюлею L-подібноі конфігурації, що потоншується в дистальному напрямку Вся система заповнена живильним середовищем 199 За допомогою мікрогвинта шматочок ембріональної нервової тканини засмоктують в кінчик скляної канюлі і поступовим зворотним обертанням мікрогвинта вичавлюють під оболонки зорового нерва Контроль ефективності лікування проводять за допомогою способу викликаних електропотенціалів, що є об'єктивним методом дослідження функціонального стану нейронального апарату ока [6] Численні дослідження засвідчують, що застосування цієї методики в КЛІНІЦІ сприяє більш ЯКІСНІЙ діагностиці, дозволяє визначити рівень ураження і оцінити динаміку патологічного процесу та ефективність лікування [7,8] Конкретний приклад здійснення винаходу Моделювання ураження зорового нерва було проведене на 10 кроликах породи Шиншила (маса тіла 3,0-3,2кг) шляхом внутрішньовенного введення метилового спирту в дозі 1,8 г на кг маси тіла, розводячи метанол 0,9% розчином натрію хлориду ВДВІЧІ Трансплантацію ембріональної нервової тканини проводили через 3 доби після введення меОб'єм танолу трансплантата становив 0,15±0,05мм Трансплантацію ембріональної нервової тканини проводили через субфронтальний штракраніальний доступ до зорового нерва вищеописаним способом із застосуванням спеціального пристрою (описаний вище) Тваринам групи порівняння виконували всі етапи операції, але замість ембріональної нервової тканини вводили 0,15-0,20мкл середовища 199 Контрольну групу склали 5 здорових кроликів Контроль ефективності лікування проводили за допомогою способу викликаних електропотенціалів, Міжнародне товариство КЛІНІЧНИХ електрофізіологіє зору радить проводити саме електрофізіологічні дослідження для оцінки функції зорового нерва при травмі, при сидерозі, симпатичній офтальмії, ендофтальміті Для запису електропотенціалів використовували комплекс електрофізіологічної системи Nicolet Потенціали реєстрували при монокулярній стимуляції Для світлової стимуляції застосовували спалахи білого кольору з інтенсивністю О.ЗДж і тривалістю 1,9с Активні електроди накладали на потилично-тім'яну ділянку, близьку до проекції зорової зони кори, індиферентний електрод накладали на лобну ділянку по середній лінії Накопичували 100 біоелектричних відповідей Час аналізу зорової викликаної активності складав 200мс Дослідження проводили на першу, третю, сьому, чотирнадцяту і тридцяту добу після введення ембріональної нервової тканини Внутрішньовенне введення метилового спирту не викликало утварин зміни періодів латентності, але значно зменшувало амплітуду зорових потенціалів, що за даними Гнездицького В В та Шамшинової А М , Волкова В В [10,11] є патогномонічною ознакою атрофії зорового нерва (табл 1) Застосування ембріональної нервової тканини не впливало на тривалість періодів латентності і сприяло збільшенню амплітуди викликаних електропотенціалів, інколи до нормальних величин, що свідчить про досить високу ефективність запропонованого способу лікування експериментального ураження нейрорецепторного апарата зорового аналізатора при інтоксикації метанолом Таблиця 1 Вплив ембріональної нервової тканини (ЕНТ) на амплітуду (мкВт) викликаних потенціалів ока у кроликів з метанольною інтоксикацією (x±Sx) 3-тя доба досліду 10-та доба досліду = 30-та доба досліду 27-ма доба після Введення ЕНТ 7-ма доба після ввевведення ЕНТ дення ЕНТ амплітуда Р60 6,46±0,96 6,90±0,88 5,49±0,75 Період досліду 1-ша доба досліду Контроль, п=5 5,85±0,83 Метанол, п=5 1 група 4,76±0,52 р>0,05 2,09±0,10 р