Спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин з діуретичною та анаболічною активністю

Спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин з діуретичною та анаболічною акти 3 та 0,5 годин відповідно з подальшою фільтрацією та упарюванням об'єднаних екстрактів до густої консистенції з вмістом сухого залишку 65-75%. Загальний вихід екстрактивних речовин 32,44% від повітряно-сухої сировини. Вищезазначений спосіб не дозволяє одержати комплекс біологічно активних речовин з комплексною діуретичною та анаболічною активністю [3]. Завданням корисної моделі є створення нового способу одержання комплексу біологічно активних речовин з діуретичною та анаболічною активністю, який завдяки використанню в якості сировини трави нуту звичайного і проведення процесу при заданих параметрах забезпечує одержання ефективного засобу у формі сухого рослинного екстракту з вираженою фармакологічною активністю, обумовленою комплексом біологічно активних речовин, вилучених саме таким способом, а заявлений спосіб є простим і економічно доцільним при промисловому здійсненні. Поставлене завдання вирішується таким чином, що у способі одержання комплексу біологічно активних речовин з діуретичною та анаболічною активністю шляхом двократної екстракції подрібненої рослинної сировини водою при температурі 85-90°С з подальшим об'єднанням відфільтрованих екстрактів, упарюванням та сушкою, згідно з корисною моделлю, передбачено, що в якості рослинної сировини використовують, траву нуту звичайного (Сісеr arietinum L.), першу екстракцію здійснюють при співвідношенні сировина:екстрагент 1:12 протягом 2,0 годин, другу - 1:10 протягом 1,0 години при температурі 85-90°С з подальшим упарюванням екстракту до сухого залишку. Всі параметри заявленого способу визначено експериментальним шляхом з урахуванням біологічної активності одержаних комплексів, ефективності, доступності та нешкідливості реактивів, практичного відтворення способу у промислових умовах. Дослідним шляхом було визначено, що оптимальним екстрагентом для трави нуту звичайного є вода. Саме такий екстрагент у сукупності з рештою параметрів заявленого способу, а саме двократною екстракцією сировини при загальному співвідношенні сировини до екстрагента 1:22 і тривалості першої екстракції - 2 години, другої - 1 годину при постійно підтримуваній температурі 8590°С забезпечує інтенсифікування процесу екстрагування, що дозволяє максимально вилучати з сировини комплекс БАР, який має діуретичну та анаболічну дію. Крім того, такий екстрагент вигідний з боку технологічних вимог до здійснення способу, бо є доступним, дешевим та екологічно безпечним. Сумарне співвідношення сировини до екстрагента 1:22 встановлено експериментально та є оптимальним для вибраної сировини. Перший етап екстракції здійснюють при співвідношенні сировина:екстрагент 1:12 (з урахування коефіцієнту водопоглинання сировини, К=0,19), другий - при співвідношенні 1:10. Менша кількість екстрагенту на кожному етапі не дозволяє ефективно провести екстракцію, а більша кількість є нераціональною, 58719 4 тому, що повна екстракція досягається заявленою кількістю екстрагента. Загальна тривалість усіх етапів екстракції складає 3,0 години і є достатньою для вичерпного вилучення з сировини комплексу біологічно активних сполук з діуретичною та анаболічною активністю. В результаті здійснення заявленого способу одержують комплекс БАР - порошок світлокоричневого кольору зі специфічним запахом, гіркуватий на смак, добре розчинний у воді, практично не розчинний в ефірі та хлороформі. Авторами вперше запропоновано використання трави нуту для одержання комплексу біологічно активних сполук з діуретичною та анаболічною активністю. Заявлений спосіб є новим, невідомим з джерел інформації і здійснюється наступним чином. Висушену і подрібнену траву нуту звичайного піддають двократній екстракції гарячою водою при загальному співвідношенні сировина:екстрагент 1:22 та загальній тривалості екстракції - 3 години при температурі 85-90°С. Першу екстракцію здійснюють при співвідношенні сировина:екстрагент 1:12 протягом 2,0 годин, другу - 1:10 протягом 1,0 години. Одержані водні екстракти об'єднують, відфільтровують, упарюють та висушують. Сухий екстракт подрібнюють. Вихід готового продукту становить 25,5-26,0% від повітряно-сухої сировини. Корисна модель ілюструється прикладами. Приклад 1 1,0 кг подрібненої повітряно-сухої трави нуту звичайного заливають 11,9 л гарячої води і екстрагують при перемішуванні та постійно підтримуваній температурі 85°С протягом 2,0 годин. Екстракцію повторюють 10,0 л води протягом 1 години. Одержані екстракти 9,8 л та 7,9 л відповідно, об'єднують, відфільтровують та упарюють до повного висушування. Сухий екстракт подрібнюють. Вихід сухого екстракту становить 257,0 г, тобто 25,7%. Приклад 2 Вивчення діуретичної активності комплексу БАР одержаного за заявленим способом, проводили на білих нелінійних щурах чоловічої та жіночої статі масою 120-220 г у дослідах за методом Є.Б. Берхіна [4]. Досліджуваний екстракт у вигляді водного розчину та препарат порівняння - настій листя ортосифону тичинкового, вводили перорально внутрішньошлунково у дозі 150 мг/кг та 40 мг/кг відповідно. Усі тварини одержували водне навантаження через шлунковий зонд, яке складало 3% від маси тіла тварини. Після ведення речовин тварин поміщали в «обмінні клітки» для збору сечі та реєстрували діурез через 4 години. За показник інтенсивності сечовиділення приймали кількість сечі, виділеної твариною за 4 години у перерахунку на 100 г їх маси. Кількість сечі, виділену контрольною групою, що одержувала тільки водне навантаження, приймали за 100%. Діуретичну активність розраховували за формулою: Vдосл.  100 A  100% , де Vконтр. 5 58719 А - діуретична активність, %; Vдосл. - середній об'єм сечі, виділений досліджуваною групою тварин, мл/100 г; 6 Vконтр. - середній об'єм сечі, виділений контрольною групою тварин, мл/100 г. Результати експерименту наведені у таблиці 1. Таблиця 1 Вивчення діуретичної активності комплексу БАР трави нуту звичайного, одержаного за заявленим способом Об'єм сечі, мл Діуретична активність, % 3,57±0,4 58,7* 4,04±0,4 3,17±0,5 40,8* 2,77±0,3 Комплекс БАР трави нуту звичайного, 150 мг/кг Настій листя ортосифону тичинкового, 40 мг/кг Контроль Об'єм сечі, мл/100 г маси 4,78±0,3 Досліджуваний зразок 2,25±0,4 Примітка: *р≤0,05 достовірність результатів по відношенню до контролю Аналіз результатів дослідження свідчить, що комплекс біологічно активних речовин трави нуту звичайного достовірно збільшує сечовиділення і становить 58,7%. Приклад 3 Вивчення анаболічної активності комплексу БАР трави нуту звичайного, одержаного за заявленим способом, проводили на моделі примусового плавання з навантаженням на статево незрілих щурах [5]. Як інтегральні критерії анаболічної дії було обрано: приріст загальної маси тіла та гомілкового м'язу дослідних тварин по відношенню до інтактного контролю, вміст загального білка у тканинах внутрішніх органів та гомілковому м'язі, вміст сечовини у сироватці крові та сечі. Досліди проводилися на білих нелінійних щурах масою 60,0±5,0 г. Тварин поділили на 3 групи та протягом всього досліду (28 днів) утримували в умовах віварію на традиційному водно-харчовому раціоні. Групи тварин, характеризувалися таким чином: 1 група - інтактний контроль; 2 - тварини, що одержували комплекс БАР трави нуту звичайного, одержаний за заявленим способом, у дозі 150 мк/кг; 3 - тварини, що одержували препарат порівняння, а саме калію оротат у дозі 100 мг/кг. На 28-му добу від початку експерименту всіх тварин зважували та виводили з експерименту шляхом декапітації під тіопентаноловим наркозом, після чого препарували та визначали масу серця та литкового м'язу. Основні біохімічні показники білкового обміну визначали за допомогою стандартних діагностичних наборів: загальний білок крові - біуретовим методом, рівень сечовини в сироватці крові та сечі за допомогою тест-набора Biotest, UREA 450, загальний білок у тканинах - методом Лоурі у модифікації Міллера. Результати дослідження наведені у таблиці 2. Таблиця 2 Вивчення анаболічної активності комплексу БАР трави нуту звичайного, одержаного за заявленим способом Досліджуваний показник Маса тіла тварин на початку досліджень, г Маса тіла тварин наприкінці досліджень, г Приріст маси тіла, г Збільшення маси тіла стосовно контролю, % Кількість білка у литковому м'язі, мг/100 мг тканини Кількість білка у серцевому м'язі, мг/100 мг тканини Сечовина у сироватці крові, ммоль/л Сечовина у сечі, ммоль/л Умови експерименту Комплекс БАР трави нуту Інтактний контроль Калію оротат, 100 мг/кг звичайного, 150 мг/кг 86,4±0,71 89,9±1,41 87,2±1,30 107,1±2,1 124,2±3,1 117,3±2,13 20,7±1,4 34,4±2,1* 30,1±2,2* 65,7 45,4 54,0±2,0 79,0±11,0* 65,3±4,7* 48,0±4,0 73,6±6,0* 79,7±3,4* 7,51±1,7 6,3±1,7* 6,9±2,2 106,9±2,3 80,0±3,5* 95,8±1,9 Примітка: *р≤0,05, відхилення вірогідне по відношенню до контролю. 7 58719 Одержані результати свідчать, що 28-денне застосування одержаного за заявленим способом комплексу БАР трави нуту звичайного на моделі примусового плавання з вантажем у дозі 150 мг/кг викликає виражений анаболічний ефект, який виявляється у достовірному збільшенні маси литкового м'язу і вмісту рівня білка в тканинах м'яза та серці. Під впливом досліджуваного засобу відмічається зниження вмісту сечовини у сироватці крові та у сечі по відношенню до контролю та препарату порівняння, що не прямо свідчить про стимуляцію 8 білковосинтетичних процесів в організмі та підтверджує анаболічну активність. Ерготропний вплив досліджуваного комплексу БАР трави нуту звичайного оцінювали по здатності зменшувати час стомлюваності щурів. Експеримент проводили на 11 і 28 день перед введенням досліджуваних речовин (вихідні дані). Вантаж, 7,5% від маси тіла, прикріплювали до основи хвоста щурів за допомогою гумового кільця [5]. Результати дослідження наведені у таблиці 3. Таблиця 3 Вивчення ерготропної дії комплексу БАР трави нуту звичайного, одержаного за заявленим способом Об'єкт дослідження Інтактні тварини Екстракт трави нуту 150 мг/кг Калію оротат, 100 мг/кг Вихідні дані, (с) 152,1±19,7 151,7±18,3 150,9±20,3 Фізична витривалість 11 день 28 день 150,7±20,1 150,7±20,1 178,9±19,7 188,7±23,7* 175,9±21,2 190,9±17,4* Примітка: *р≤0,05, відхилення вірогідне по відношенню до контролю. Аналіз даних таблиці 3 свідчить, що комплекс БАР трави нуту звичайного, одержаний за заявленим способом, проявляє помірну ерготропну дію на рівні з препаратом порівняння. Таким чином, заявлено спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин рослинного походження з вираженою діуретичною та анаболічною активністю. Спосіб є простим у відтворенні, економічним, екологічно безпечним та може бути здійснений в умовах промислового виробництва з використанням стандартного обладнання. Екстракт, одержаний за заявленим способом, проявляє виражену діуретичну та анаболічну активність, є ефективним, нетоксичним, практично не має протипоказань і є перспективним для створення нових лікарських засобів для лікування та профілактики захворювань сечовидільної системи. Джерела інформації: 1. Патент на винахід 74465, Україна, МПК(2006) А61К 36/00, А61Р 7/16, з. Комп’ютерна верстка А. Рябко №2004021134, заявл. 17.02.2004, опубл. 15.12.2005, бюл. №12. 2. Патент на корисну модель 14493, Україна, МПК(2006) А61К 36/61 (2007.01), А61К 127/00 (2007.01), А61К 9/14. Спосіб одержання засобу з протизапальною та анаболічною активністю. Заявка u200511277, заявл. 28.11.2005, опубл. 15.05.2006, Бюл. №5. 3. Патент на корисну модель 33401, Україна, МПК(2006) А61К 36/48 (2008.01). Спосіб одержання біологічно активної субстанції рослинного походження з анаболічною дією. Заявка u200800470, заявл. 14.01.2008, опубол. 25.06.2008, Бюл. №12. 4. Берхин Е.Б. Методы изучения новых химических соединений на функции почек // Хим. фарм. журнал. - 1997. - Т. 11, №5 - с. 3-11. 5. Експериментальне вивчення нових анаболічних засобів: Методичні рекомендації / Л.Я. Яковлева, С.М. Марчишин та ін. - Київ, 2007. - 31 с. Підписне Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601