Спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин з протизапальною та репаративною активністю

1. Спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин з протизапальною та репаративною активністю з шишок хмелю звичайного шляхом їх екстракції гарячою водою з наступною фільтрацією, який відрізняється тим, що екстракцію здійснюють десятикратною кількістю води при температурі не менше 70 °С принаймні у три етапи з подальшим об'єднанням одержаних екстрактів, упарюванням і сушінням. 2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що перший етап екстракції здійснюють принаймні протягом двох годин, а тривалість кожного наступного етапу дорівнює чверті цього періоду. (19) (21) u200706253 (22) 06.06.2007 (24) 25.10.2007 (72) КОВАЛЬОВ СЕРГІЙ ВОЛОДИМИРОВИЧ, UA, КОВАЛЬОВ ВОЛОДИМИР МИКОЛАЙОВИЧ, UA, БЕРЕСТОВА СВІТЛАНА ІГОРІВНА, UA, МАЛОШТАН ЛЮДМИЛА МИКОЛАЇВНА, UA, ГЛАДЧЕНКО ОЛЕГ МИХАЙЛОВИЧ, UA, УЛАНОВА ВІРА АНАТОЛІЇВНА, UA (73) НАЦІОНАЛЬНИЙ ФАРМАЦЕВТИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ, UA (56) 3 27270 4 фармакологічної дії: анальгетичної, Досліди проводили на щурах середньою протимікробної, проти-виразкової, седативної, масою 200г. Субплантарним введенням 1% снодійної, сокогонної, такої, що знижує розчину карагеніну у кількості 0,1мл викликали проникливість капілярів [2]. Проте заявлений набряк однієї з лап у дослідних тварин. Тваринам спосіб обумовлює одержання засобу з дослідних груп за годину до ін'єкції карагеніну протизапальною та репаративною дією. вводили внутрішньошлунково досліджуваний Дослідження авторів розширюють загальновідомі екстракт у різних дозах та альтан у ефективній дані про біологічно активні властивості хмелю , що дозі. Контрольні тварини одержували еквівалентну дозволяє передбачити його використання у більш кількість води. широкому колі лікувальних засобів. Ступінь набряку оцінювали за збільшенням Всі параметри заявленого способу визначені об'єму лапи , який виміряли у динаміці через 1, 2, дослідним шляхом і не відомі з джерел інформації. 3, 24 години за допомогою механічного онкометру. Експериментально встановлено, що при Протизапальну активність (ПА) досліджуваних здійсненні заявленого способу використання в засобів визначали за їх здатністю зменшувати якості екстрагенту гарячої води при температурі не набряки у дослідних тварин у порівнянні з нижче 70°С забезпечує максимальне вилучення з контролем. Розрахунок здійснювали за формулою: сировини біологічно активних речовин. DVд - DVк ПА = × 100 Визначені дослідним шляхом такі ознаки, як DVк , де екстрагування сировини десятикратною кількістю DVд, DVк- різниця між об'ємом набряклої та води, проведення екстракції принаймні у три етапи ненабряклої лапи тварини у досліді та контролі бажано тривалістю відповідно 2 години та по 0,5 відповідно. години є необхідними і достатніми для здійснення Дані експерименту наведені у таблиці 1. заявленого способу і одержання кінцевого продукту з очікуваними видами активності. Таблиц Кількість етапів екстракції може бути зменшена або збільшена, проте при цьому знижується Вивчення протизапальної активності комплексу біологічно активних економічна доцільність способу: у першому речовин з шишок випадку збільшаться витрати та час здійснення хмелю (Екстракту), одержаного за заявленим способом на моделі способу. Проведення екстракції у 3 етапи є карагенінового запалення оптимальним варіантом. Корисну модель здійснюють наступним чином. Динаміка досліду Варіанти Подрібнені до розміру часток 2 мм сухі шишки досліду хмелю звичайного завантажують у реактор, 1 година 2 години 3 години 24 години додають у десятикратній кількості гарячу воду, Об'єм ПА, Об'єм ПА, Об'єм ПА, Об'єм П температура якої не менше 70°С. Екстракцію % % % проводять переважно у 3 етапи з тривалістю Екстракт, 8,8±0,39* 40 9,4±0,22* 55 10,4±0,68 60 14,4±0,44* першого етапу 2 години, решти - по 0,5 години, 5мг/кг одержані екстракти об'єднують, фільтрують та Екстракт, 9,0+0,27* 38 11,0±0,41* 47 11,8±0,51* 55 15,2±0,65* упарюють під вакуумом до одержання сухого 10мг/кг залишку. Екстракт, 9,4±0,27* 36 11,2±0,62* 46 12,9±0,53* 50 16,2±0,60* Одержаний сухий екстракт з шишок хмелю 20мг/кг звичайного являє собою порошок темноАльтан, 9,8±0,47* 33 13,4±0,27* 36 15,6±0,73* 40 16,0±0,89* коричневого кольору зі специфічним запахом. 1мг/кг Вихід готового продукту - 15-16% Контроль 14,6±0,49 - 20,8±0,47 - 26,0±0,57 - 32,0±0,93 Корисна модель ілюструється прикладами. * - достовірно по відношенню до контролю р£0,05 Приклад 1. 0,5кг подрібненої сировини помістили у реактор з паровою рубашкою та мішалкою, залили водою 70°С у співвідношенні сировина : екстрагент 1:10 та екстрагували протягом 2 годин при періодичному перемішуванні, потім профільтрували. Другу та третю екстракції проводили за попередніх умов на протязі 0,5 години кожна. Одержані екстракти об'єднали і випарили у вакуумі при температурі 90-100°С до отримання сухого продукту. Одержали 80,02г готового продукту (16%). Приклад 2. Протизапальну активність комплексу біологічно активних речовин з шишок хмелю (далі - Екстракт), одержаних за заявленим способом, вивчали на моделі карагенінового запалення у дозах 5мг/кг, 10мг/кг, 20мг/кг. В якості препарату порівняння було використано альтан. Аналіз одержаних даних свідчить про виражену протизапальну активність Екстракту у всіх досліджених дозах, який достовірно знижував розвиток набряку у порівнянні з контрольною групою. Дані перших трьох годин досліджень доводять, що Екстракт за протизапальною активністю перевищує препарат порівняння. Приклад 3. З метою одержання об'єктивної оцінки протизапальну активність комплексу біологічно активних речовин з шишок хмелю (Екстракту), одержаного за заявленим способом, вивчали також на моделі зимозанового набряку. Дослід проводили на щурах масою 200г. Набряк викликали субпланта-рним введенням в одну з лап тварин 2% суспензії зимозану у дозі 0,1мл. В якості препарату порівняння використовувати альтан. Тваринами дослідних груп за годину до ін'єкції зимозану вводили 5 27270 6 Досліджували також показники білкового внутрішньошлунково Екстракт у дозах 5мг/кг, обміну як фактори, що визначають швидкість 10мг/кг, 20мг/кг та альтан відповідно. Контрольні репаративної регенерації: вміст загального білка у тварини одержували еквівалентну кількість води. сироватці крові за біуретовою реакцією та Протизапальну активність досліджуваних засобів концентрацію РНК і ДНК у гомогенаті шкірної рани (ПА) визначали за критеріями та розрахунками, щурів за спектрофотометричним методом при аналогічними тим, що наведені у прикладі 2. Дані реакції з хлорною кислотою. досліду представлені у таблиці 2. Результати досліджень наведені у таблиці 3. Таблиця 2 Вивчення протизапальної активності комплексу біологічно активних речовин з шишок Показники Репаратив-на хмелю (Екстракту), одержаного за заявленим способом, Умови досліду на моделі тензинометрії, (об'єм активність, % зимозанового набряку води), г Контроль 474,16±21,77 Динаміка досліду Екстракт, 5мг/кг 840,83±44,44* 77 Варіанти 0,5 години 1 година 2 години 3 години Екстракт, 10мг/кг 62 766,67±44,95* досліду Об'єм ПА, Об'єм ПА, Об'єм ПА, Об'єм ПА, Альтан, 1мг/кг 40 661,66±55,0* % % % % * - достовірно по відношенню до контролю р£0,05 Екстракт, 8,00±0,36* 56 8,93±0,33* 59 10,2±0,74 65 12,6±0,49* 61 5мг/кг Аналіз даних табл. 3 свідчать про наявність Екстракт, 10,2±0,30* 44 10,6±0,42* 52 13,0±0,73* 55 вираженої репаративної активності Екстракту, 15,0±0,57* 53 10мг/кг одержаного за заявленим способом, що Екстракт, 12,3±0,42* 32 13,2±0,60* 40 14,0±1,14* 52 перевищує препарат порівняння. 13,8±0,60* 57 20мг/кг Таким чином, заявлено спосіб одержання Альтан, 12,2±0,79* 33 13,0±0,73* 41 15,8±0,54* 46 комплексу 50 16,0±0,51* біологічно активних речовин з 1мг/кг протизапальною та репаративною активністю з Контроль 18,2±0,54 - 22,0±0,51 - 29,0±0,93 - шишок хмелю звичайного. Заявлений спосіб є 32,2±0,91 * - достовірно по відношенню до контролю р£0,05 простим у виконанні, економічним, екологічно чистим, має достатню вітчизняну сировинну базу і За даними досліду Екстракт у всіх дозах може бути здійснений як у лабораторних, так і у проявив виражену протизапальну активність, виробничих умовах на стандартному обладнанні, достовірно, знижуючи розвиток набряку у відзначається практичною нетоксичністю, має порівнянні з контролем у дозах 5мг/кг, 10мг/кг на 1 виражену протизапальну та репаративну та 2 годину досліду, а на 2-3 години досліду - у активність і може бути використаний в якості всіх вивчених дозах Екстракт перевершує за лікарської субстанції у складі препаратів різних протизапальною активністю препарат порівняння. лікарських форм. Приклад 4. Джерела інформації Вивчення репаративної активності комплексу 1. Е.И. Светличная, И.А. Толок. біологічно активних речовин, (далі Екстракт), Этимологический словарь латинских ботанических одержаних з шишок хмелю за заявленим названий лекарственных растений. Харьков. способом, проводили на моделі лінійних різаних Издательство НФаУ, «Золотые страницы», 2003, ран у щурів. Дослідним щурам у наркотичному С. 125 стані наносили лінійні рани, на які накладали шви. 2. Б.А. Самура, В.Ф. Черных, И.П. Банный и Після виходу з наркозу тварини дослідних груп др. Фитотерапия в клинике внутренних болезней. одержували перорально Екстракт у дозах 5мг/кг, Харьков. Издательство НФаУ, «Золотые 10мг/кг та препарат порівняння альтан у страницы», 2003, С.25, С.350 ефективній дозі. Лікування тривало 5 днів. Тварини дослідної групи залишались нелакованими. Після виведення тварин з досліду було проведено дослідження міцності зростання країв рани на ранотензиометрі. Для цього зразок клаптику шкіри зі швом затискували з одного краю шва, а з іншого краю закріплювали ємність для води в якості навантаження. При рівномірному наливанні води відмічали її об'єм, при якому шов розривається. Міцність шва відповідає об'єму води, що обумовлює розрив шва. Репаративну активність (РА) досліджуваних засобів розраховували за формулою: РА=(DVд-100%)/DVк-100, де DVд, DVк - об'єм води, при якому розривається шов відповідно на зразках з дослідної та контрольної групи. Загальн білок, г 72,88±2, 87,53±3, 90,52±5, 84,63±3,