Спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин з протизапальною та антиоксидантною активністю

1. Спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин з протизапальною та антиоксидантною активністю, що включає екстракцію гарячою водою хмелю звичайного та фільтрацію, який відрізняє ться тим, що екстракції піддають листя хмелю звичайного, екстракцію здійснюють шестикратною кількістю води принаймні у три етапи з подальшим об'єднанням одержаних екстрактів, упарюванням і сушкою в вакуумі при температурі 90-100°С. 2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що перший етап екстракції здійснюють принаймні протягом двох годин, а тривалість кожного наступного етапу дорівнює чверті цього періоду. 3. Спосіб за п. 1, п. 2, який відрізняється тим, що екстракцію здійснюють при температурі води не менше 70°С. Винахід відноситься до фармації, а саме до способів одержання комплексів біологічно активних речовин рослинного походження з протизапальною та антиоксидантною активністю, що можуть бути використані в якості лікарських субстанцій для одержання засобів у різних лікарських формах. Досить великий перелік засобів рослинного походження одержують шляхом водної екстракції листя лікарських рослин. Відомий, наприклад, спосіб одержання комплексу полісахаридів про-тиалергічної дії [Пат. 24032, Україна, МПК 6 А61К 35/78 3.95125519, заявл. 2812.95, опубл. 31.08.98 Бюл. №4]. Зазначений спосіб здійснюють шляхом екстракції листя смородини чорної водою 90°С при співвідношенні сировина: екстрагент 1:5-6, упарювання одержаного екстракту до 1/7 попереднього об'єму, осадження комплексу біологічно активних речовин [БАР] чотирикратною кількістю етилового спирту, відокремлення осаду з наступною його сушкою і подрі бненням. Вихід готового продукту 13-14% від повітряно сухої сировини. Недоліками відомого способу можна вважати необхідність додаткового використання спирту етилового для осадження БАР та невисокий вихід готового продукту. У фітотерапії ряду захворювань часто використовують хміль як лікарську сировину. Виражені седативні властивості хмелю обумовили його введення до складу відомих лікарських препаратів: уролесан, валокордин, корвалдін [1]. Хміль також використовують у народній медицині. Традиційно для одержання лікувальних засобів використовують лише ши шки хмелю. Відомий спосіб одержання настою з шишок хмелю як засобу, що вгамовує біль при лікуванні радикуліту у період загострення [2]. Згідно з цим способом 25г шишок хмелю заливають 1л води, кип'ятять на водяній бані протягом 15 хвилин, охолоджують 5 хвилин і проціджують. Одержаний водний настій вживають по 200мл тричі на день. UA (11) 85926 (13) (21) a200706252 (22) 06.06.2007 (24) 10.03.2009 (46) 10.03.2009, Бюл.№ 5, 2009 р. (72) КОВАЛЬОВ СЕРГІЙ ВОЛОДИМИРОВИЧ, UA, КОВАЛЬОВ ВОЛОДИ МИР МИКОЛАЙОВИЧ, U A, БЕРЕСТОВА СВІТЛАНА ІГОРІВН А, U A, МАЛОШТАН ЛЮДМИЛА МИКОЛАЇВН А, UA, ГЛАДЧЕНКО ОЛЕГ МИХАЙЛОВИЧ, UA, УЛАНОВА ВІРА АНАТОЛІЇВН А, U A, ЄФРЕМЕНКО ЕДУ АРД АНАТОЛІЙОВИЧ, UA (73) НАЦІОН АЛЬНИЙ ФАРМАЦЕВТИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ, UA (56) SU A 393833, 10.08.1973. SU A 611926, 25.06.1978. RU 2241484, 10.12.2004. UA U 14493, 15.05.2006. UA U 15750, 17.07.2006. UA C2 35409, 15.12.2003. C2 2 (19) 1 3 85926 До недоліків відомого способу можна віднести одержання настою при кип'ятінні, що частково призводить до руйнування термолабільних речовин, до того ж водний настій є нестабільною лікарською формою з коротким терміном застосування. Завданням винаходу є створення способу одержання комплексу біологічно активних речовин з протизапальною та антиоксидантною активністю шляхом екстрагування нетрадиційної лікарської сировини - листя хмелю звичайного, що у сук упності з заявленими параметрами нового способу обумовлює одержання з високим виходом нетоксичного засобу з вираженою фармакологічною активністю, який може бути використаний в якості лікарської субстанції при створення препаратів у різних лікарських формах. Поставлене завдання вирішується таким чином, що у способі одержання комплексу біологічно активних речовин з протизапальною та антиоксидантною активністю, що включає екстракцію гарячою водою хмелю звичайного та фільтрацію, винаходом передбачено, що екстракції піддають листя хмелю звичайного, екстракцію здійснюють десятикратною кількістю води принаймні у 3 етапи з подальшим об'єднанням одержаних екстрактів, упарюванням і сушкою. Згідно з винаходом перший етап екстракції здійснюють принаймні протягом двох годин, а тривалість кожного наступного етапу дорівнює чверті цього періоду. Винаходом також передбачено, що екстракцію здійснюють при температурі води на менше 70°С. З джерел інформації хміль відомий як лікарська сировина з досить широким спектром фармакологічної дії: анальгетичної, протимікробної, противиразкової, седативної, снодійної, сокогонної, такої, що знижує проникливість капілярів [2]. Проте заявлений спосіб обумовлює одержання засобу з протизапальною та антиоксидантною дією. Дослідження авторів розширюють загальновідомі дані про біологічно активні властивості хмелю , що дозволяє передбачити його використання у більш широкому колі лікувальних засобів. Авторами вперше запропоновано використання такого нетрадиційного виду лікарської сировини, як листя хмелю звичайного. Всі параметри заявленого способу визначені дослідним шляхом і не відомі з джерел інформації. Експериментально встановлено, що при здійсненні заявленого способу використання в якості екстрагенту гарячої води при температурі не нижче 70°С забезпечує максимальне вилучення з сировини біологічно активних речовин. Визначені дослідним шляхом такі ознаки, як екстрагування сировини шестикратною кількістю води, проведення екстракції принаймні у три етапи бажано тривалістю відповідно 2 години та по 0,5 години є необхідними і достатніми для здійснення 4 заявленого способу і одержання кінцевого продукту з очікуваними видами активності. Винахід здійснюють наступним чином. Подрібнене до розміру часток 2мм сухе листя хмелю звичайного завантажують у реактор, додають гарячу воду, температура якої не менше 70°С. Екстракцію проводять переважно у 3 етапи з тривалістю першого етапу 2 години, решти - по 0,5 години, одержані екстракти об'єднують, фільтрують та упарюють під вакуумом до одержання сухого залишку. Одержаний сухий екстракт із листя хмелю звичайного являє собою порошок коричневого кольору з характерним запахом. Вихід готового продукту - 29-30% Винахід ілюструється прикладами. Приклад 1 0,5кг подрібненої сировини помістили у реактор з паровою рубашкою та мішалкою, залили водою 70°С у співвідношенні сировина : розчинник 1:6 та екстрагували протягом 2 годин при періодичному перемішуванні, потім профільтрували. Другу та третю екстракції проводили за попередніх умов на протязі 0,5 години кожна. Одержані екстракти об'єднали і випарили у вакуумі при температурі 90-100°С до отримання сухого продукту. Одержали 146,88г готового продукту (29,38%). Приклад 2 Протизапальну активність комплексу біологічно активних речовин (далі - Екстракт), одержаних за заявленим способом, вивчали на моделі карагенінового запалення у дозах 5мг/кг, 10мг/кг, 20мг/кг. В якості препарату порівняння було використано альтан. Досліди проводили на щура х середньою масою 200г. Субплантарним введенням 1% розчину карагеніну у кількості 0,1мл викликали набряк однієї з лап у дослідних тварин. Тваринам дослідних груп за годину до ін'єкції карагеніну вводили вн утрішньошлунково досліджуваний екстракт у різних дозах та альтан у ефективній дозі. Контрольні тварини одержували еквівалентну кількість води. Ступінь набряку оцінювали за збільшенням об'єму лапи, який виміряли у динаміці через 1, 2, 3, 24 години за допомогою механічного онкометру. Протизапальну активність (ПА) досліджуваних засобів визначали за їх здатністю зменшувати набряки у дослідних тварин у порівнянні з контролем. Розрахунок здійснювали за формулою: DVд - DVк ПА = ×100 , де DVк DVд, DVк - різниця між об'ємом набряклої та ненабряклої лапи тварини у досліді та контролі відповідно. Дані експерименту наведені у таблиці 1. 5 85926 6 Таблиця 1 Вивчення протизапальної активності комплексу біологічно активних речовин (Екстракту), одержаного за заявленим способом на моделі карагенінового запалення Варіанти досліду Екстракт, 5мг/кг Екстракт, 10мг/кг Екстракт, 20мг/кг Альтан, 1мг/кг Контроль 1 година Об'єм ПА, % Динаміка досліду 2 години 3 години Об'єм ПА, % Об'єм ПА, % 24 години Об'єм ПА, % 8,0±0,57* 45 9,4±1,15* 55 10,4±0,68 60 13,6±0,91* 58 8,8±1,04* 40 10,5±0,50* 50 11,8±0,60* 55 16,0±0,85* 50 9,4+1,17* 36 11,4±0,93* 45 12,8±0,68* 51 16,8±0,60* 48 9,8±0,47* 33 13,4±0,27* 36 15,6±0,73* 40 16,0±0,89* 50 14,6±0,45 20,8±0,47 26,0±0,57 32,0±0,93 * - достовірно по відношенню до контролю р£0,05 Аналіз одержаних даних свідчить про виражену протизапальну активність Екстракту в усі х досліджених дозах, який достовірно знижував розвиток набряку у порівнянні з контрольною групою. Найбільш виражена протизапальна активність Екстракту зафіксована у дозі 5мг/кг на третю годину дослідження. За протизапальною активністю Екстракт, одержаний за заявленим способом, перевищує препарат порівняння. Приклад 3 З метою одержання об'єктивної оцінки протизапальну активність комплексу біологічно активних речовин (Екстракту), одержаного за заявленим способом, вивчали також на моделі зимозанового набряку. Дослід проводили на щура х масою 200г. Набряк викликали субпланта-рним введенням в одну з лап тварин 2% суспензії зимозану у дозі 0,1мл. В якості препарату порівняння використовувати альтан. Тваринами дослідних груп за годину до ін'єкції зимозану вводили внутрішньошлунково Екстракт у дозах 5мг/кг, 10мг/кг, 20мг/кг та альтан відповідно. Контрольні тварини одержували еквівалентну кількість води. Протизапальну активність досліджуваних засобів (ПА) визначали за критеріями та розрахунками, аналогічними тим, що наведені у прикладі 2. Дані досліду представлені у таблиці 2. Таблиця 2 Вивчення протизапальної активності комплексу біологічно активних речовин (Екстракту), одержаного за заявленим способом, на моделі зимозанового набряку Варіанти досліду Екстракт, 5мг/кг Екстракт, 10мг/кг Екстракт, 20мг/кг Альтан, 1мг/кг Контроль 0,5 години Об'єм ПА, % Динаміка досліду 1 година 2 години Об'єм ПА, % Об'єм ПА, % 3 години Об'єм ПА, % 8,4±0,68* 54 9,0±0,31* 59 10,6±0,67 63 9,8±0,37* 70 10,0±0,55* 45 11,0±0,41* 50 13,0±0,73* 55 14,2±1,56* 60 12,6±0,98* 31 13,2±0,60* 40 14,2±0,66* 51 14,8±0,54* 54 12,2±0,79* 33 13,0±0,73* 41 15,8±0,54* 46 16,0±0,51* 50 18,2±0,54 22,0±0,51 29,0±0,93 32,2±0,91 * - достовірно по відношенню до контролю р£0,05 За даними досліду Екстракт у всіх дозах проявив виражену протизапальну активність, достовірно, знижуючи розвиток набряку у порівнянні з контролем. У дозі 5мг/кг на 3 годину досліду Екстракт за протизапальною активністю перевищує препарат порівняння. Приклад 4 Антиоксиданту активність комплексу біологічно активних речовин (Екстракту), одержаного за заявленим способом, вивчали на моделі гострого тетрахлорметанового ураження печінки токсичного гепатиту дослідних тварин. Дослід проводили на щура х масою 200г. Патологію моделювали одноразовим внутрішньо 7 85926 шлунковим введенням 50% олійного розчину тетрахлор-метану. Досліджуваний Екстракт у дозах 5мг/кг, 10мг/кг та препарат порівняння силібор вводили тваринам дослідним груп за годину і через 2 години після введення тетрахлорметану. Антиоксидантну активність (АА) досліджуваних засобів оцінювали за їх впливом на процеси пере 8 кісного окислення ліпідів і розраховували за формулою: АА=100·(1-С/С0), де С, С0 - вміст ТБК реактантів у сироватці крові тварин дослідної та контрольної груп відповідно. Дані експерименту наведені у таблиці 3. Таблиця 3 Показники Інтакт ТБК-реактанти, мкмоль/% Антиоксидантна активність, % 34,6±0,16* Контрольна па- Екстракт, 5мг/кг Екстракт, 10мг/кг тологія У сироватці крові 92,17±0,33* Силібор, 25мг/кг 55,76±0,38*/** 59,48±0,44*/** 68,5±0,33*/** 39 35 25 * - достовірно по відношенню до груп контрольної патології р£0,05 ** - достовірно по відношенню до інтактного контролю р£0,05 Дані табл. 3 свідчать про достовірну антиоксидантну активність Екстракту, яка у вивчених дозах перевищує дію препарату порівняння. Таким чином, заявлено спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин з протизапальною та антиоксидантною активністю з листя хмелю звичайного. Заявлений спосіб є простим у виконанні, економічним, екологічно чистим, має достатню вітчизняну сировинну базу і може бути здійснений як у лабораторних, так і у виробничих умовах на стандартному обладнанні. Спосіб забезпечує високий, економічно вигідний вихід кінцевого продукту. Останній відзначається практичною нетоксичністю, має виражену протизапальну і Комп’ютерна в ерстка В. Клюкін антиоксидантну активність, вищу за активність препаратів порівняння. Комплекс біологічно активних речовин, одержаний за заявленим способом, може бути використаний в якості лікарської субстанції у складі препаратів різних лікарських форм. Джерела інформації: 1. Е.И. Светличная, И.А. Толок. Этимологический словарь латинских ботанических названий лекарственных растений. Харьков. Издательство НФаУ, «Золотые страницы», 2003, С.125. 2. Б.А. Самура, В.Ф. Черных, И.П. Банный и др. Фитотерапия в клинике внутренних болезней. Харьков. Издательство НФаУ, «Золотые страницы», 2003, С.25, С.350. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601