Спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин з гіпоазотемічною, гепатопротекторною, антиоксидантною та протизапальною активністю

Спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин з гіпоазотемічною, гепатопротекторною, антиоксидантною та протизапальною активністю шляхом екстракції подрібненої рослинної сировини етанолом, упарювання до водного залишку, очищення хлороформом з подальшим сушінням, який відрізняється тим, що як рослинну сировину використовують листя робінії псевдоакації, екстракцію здійснюють 12-кратною кількістю 29-31% етанолу протягом 13-15 годин, одержаний після упарювання при температурі 65ºС водний залишок додатково відстоюють протягом 12 годин і фільтрують, а очищення хлороформом здійснюють при співвідношенні водного залишку та хлороформу як 2:1 в чотири етапи. UA (21) a200612196 (22) 20.11.2006 (24) 10.10.2008 (46) 10.10.2008, Бюл.№ 19, 2008 р. (72) ДЕМЕШКО ОЛЬГА ВОЛОДИМИРІВН А, U A, КОВАЛЬОВ СЕРГІЙ ВОЛОДИ МИРОВИЧ, U A, ЯКОВЛЄВА ЛАРИСА ВАСИЛІВНА, UA, ЧОРНА НАТАЛІЯ СТЕПАНІВН А, UA, ФАЙЗУЛІН ОЛЕКСАНДР ВАЛЕРІЙОВИЧ, U A (73) НАЦІОН АЛЬНИЙ ФАРМАЦЕВТИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ, UA (56) UA A1 48031, 15.08.2002. UA A 30879, 15.12.2000. UA C2 44927, 15.03.2002. UA A 56771, 15.05.2003. UA C2 76063, 15.06.2006. C2 2 (19) 1 3 84336 способом подрібнену траву квасолі золотавої піддають екстракції 50% етанолом при співвідношенні сировина: екстрагент 1:8-1:10, одержаний екстракт упарюють до 1/18-1/20 попереднього об'єму, водний залишок очищують послідовно спиртом і хлористим метиленом. До недоліків відомого способу можна віднести моноспрямовану фармакологічну активність кінцевого продукту та значні витрати етанолу внаслідок введення додаткової операції очищення екстракту спиртом. За прототип вибраний спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин, що має гепатопротекторну дію [2]. Спосіб здійснюють шляхом екстрагування подрібненої сухої трави гороху посівного 10-кратною кількістю 49-51% етанолу протягом 11-12 годин. Одержаний екстракт упарюють до водного залишку, який очищують від речовин ліпофільної природи хлористим метиленом при співвідношенні водний залишок : хлористий метилен 3:4 з подальшим сушінням до сухого залишку. Недоліком способу за прототипом можна вважати одержання кінцевого продукту з вузькоспрямованою фармакологічною дією та надмірні витрати хлористого метилену. Завдання, що вирішується даним винаходом, полягає у створенні способу одержання комплексу біологічно активних речовин (БАР) з широким спектром фармакологічної активності, шляхом екстракції листя робінії псевдоакації етанолом при заявленій сукупності операцій і технологічних параметрів, що дозволяє одержати сухий екстракт з вираженою гіпоазотемічною, гепатопротекторною, антиоксидантною та протизапальною активністю, який може бути використаний при створенні нових засобів для лікування нирок та токсичних уражень печінки. Поставлене завдання вирішується таким чином, що у способі одержання комплексу біологічно активних речовин з гіпоазотемічною, гепатопротекторною, антиоксидантною та протизапальною активністю, шляхом екстракції подрібненої рослинної сировини етанолом, упарювання до водного залишку, очищення хлороформом з подальшим сушінням, згідно з винаходом передбачено, що в якості рослинної сировини використовують листя робінії псевдоакації, екстракцію здійснюють 12кратною кількістю 29-31% етанолу протягом 13-15 годин, одержаний після упарювання водний залишок додатково відстоюють і фільтрують, а очищення хлороформом здійснюють при співвідношенні водного залишку до хлороформу як 2:1. Параметри заявленого способу визначені дослідним шляхом. Вибір етанолу в якості екстрагента обумовлений його здатністю вилучити з листя робінії псевдоакації комплексу БАР з заданим спектром фармакологічної активності. При здійсненні серії експериментів з визначення концентрації етанолу було встановлено, що вичерпна екстракція необхідного комплексу БАР забезпечується 29-31% етанолом. При концентрації етанолу, нижчим за 29%, зменшується вихід екстрактивних речовин з сировини. Збільшення концентрації етанолу понад 4 31% недоцільне внаслідок забезпечення вичерпного екстрагування комплексу БАР з заданими властивостями етанолом у заявленому інтервалі концентрацій. Оптимальним екстрагентом є 30% етанол. Визначені експериментальним шляхом такі ознаки, як кількісне співвідношення сировини до екстрагенту 1:12 (12-кратна кількість екстрагенту) та тривалість екстракції протягом 13-15 годин, є необхідними і достатніми для ефективного здійснення заявленого способу і одержання кінцевого продукту з очікуваними видами активності. Очищення одержаного після упарювання екстракту у вигляді водного залишку здійснюється його послідовним відстоюванням, що призводить до осадження нерозчинної фракції, відокремлення осаду шляхом фільтрування та очищення хлороформом у співвідношенні водний залишок : хлороформ як 2:1. Експерименти показали, що саме така сукупність зазначених показників забезпечує достатній рівень чистоти кінцевого продукту. Виявлений спосіб дозволяє за допомогою відомих операцій, але здійснених у заданій послідовності при заданих параметрах, одержати з листя робінії псевдоакації комплекс біологічно активних речовин, який має гіпоазотемічну, гепатопротекторну, антиоксидантну та протизапальну активність. Спосіб здійснюється таким чином. Подрібнену до розміру часток 2,0-3,0мм сухе листя робінії псевдоакації екстрагують методом перколяції 12кратною кількістю 29-31% етанолу протягом 13-15 годин. Одержаний екстракт упарюють під вакуумом при температурі 60-70°С до водного залишку, який охолоджують при кімнатній температурі та відстоюють в холодильнику на протязі 12 годин. Осад відфільтровують, а водний залишок очищують від речовин ліпофільної природи хлороформом у співвідношенні водний залишок - хлороформ 2:1 з подальшим сушінням до сухого залишку. Одержують сухий екстракт листя робінії псевдоакації (акації білої) - гігроскопічний порошок від світло-коричневого до коричневого кольору. Вихід готового продукту 7-9%. Винахід ілюструється прикладами. Приклад 1. 5кг подрібненого до 2,0-3,0мм сухого листя робінії псевдоакації екстрагують 60л 30% етанолу у перколяторі протягом 14 годин зі швидкістю збору екстракту 4л/год. Одержаний екстракт упарюють при температурі 65°С під вакуумом у вакуум-циркуляційному апараті при розрідженні 550мм рт. ст. до обсягу водного залишку 3,0л. Водний залишок після охолодження до кімнатної температури поміщують у холодильник на 12 годин, після чого осад відокремлюють. Обробку очищеного водного залишку хлороформом проводять в реакторі з мішалкою в 4 етапи, додаючи послідовно по 1,5л хлороформу на кожному етапі з подальшим перемішуванням протягом 10 хвилин і відстоюванням протягом 2 години на кожному етапі. Одержаний водний концентрат сушать у вакуум-сушильній шафі до отримання сухого екстракту. Приклад 2. Гіпоазотемічну активність комплексу БАР з листя робінії псевдоакації, одержаного за 5 84336 заявленим способом, вивчали на моделі гострої ниркової недостатності, викликаної хроматом калію. Дослід проводили на 24 білих безпородних щурах масою тіла 180-210г. Гостру ниркову недостатність відтворювали шляхом підшкірного введення 2,5% розчину хромату калію у кількості 0,7мл/кг. Як препарат порівняння використовували препарат рослинного походження леспефлан. Тваринам після введення 6 хромату калію протягом тижня внутрішньошлунково вводили досліджувані препарати: комплекс БАР з листя робінії псевдоакації у дозі 0,005мл/кг, леспефлан - 2мл/кг. Щурам групи контрольної патології вводили відповідну кількість води. За контроль взято 6 здорових щурів. На 8 день експерименту в сироватці крові дослідних тварин визначали концентрацію креатиніну та сечовини. Результати експерименту наведені у таблиці 1. Таблиця 1 Гіпоазотемічна активність комплексу БАР з листя робінії псевдоакації, одержаного за заявленим способом, на моделі гострої ниркової недостатності у щурів (n=6) Показники Інтактний контроль Креатинін мкмоль/л Сечовина ммоль/л 63,80±3,53 4,13±0,12 Контрольна патоло- Комплекс БАР робінії псевдоакації, гія 0,005 мл/кг 185,23±26,56* 102,68±7,50** 23,72±2,48* 10,92±1,67** Леспефлан,2мл/кг 120,97±21,06** 14,38±3,51** Примітки: 1. * - відхилення показника достовірне щодо інтактного контролю, р