Спосіб приготування порошкоподібного пульмонологічного порошкоподібного препарату та препарат, одержаний в такий спосіб

1 Спосіб приготування протеїнового порошкоподібного препарату легеневого сурфактанта, який містить гідрофобний протеїн легеневого сурфактанта, який відрізняється тим, що органічний розчин або суспензію, що містить гідрофобний протеїн легеневого сурфактанта, і, необов'язково, ІНШІ компоненти, піддають розпорошувальному сушінню Винахід стосується способу приготування порошкоподібних препаратів легеневого сурфактанту Рівень техніки Легені всіх хребетних тварин містять суміш речовин, яку позначають як «легеневий сурфактант» Він ВИЯВЛЯЄ поверхнево-активні властивості і зменшує поверхневе напруження в альвеолярній зоні легенів настільки значно, що уникається колапс фінальних ділянок дихальних шляхів при видиханні Ця суміш речовин динамічно регулює поверхневе напруження, так що уникається очікуваний згідно закону Лапласа колапс малих альвеол на користь великим завдяки відповідному пристосуванню поверхневого напруження Внаслідок цього виникає досить врівноважена, ГІСТОЛОГІЧНО і фізіологічно стабільна структура легенів 2 Спосіб за п 1, який відрізняється тим, що гідрофобний протеїн легеневого сурфактанта в органічному розчині або суспензії являє собою протеїни SP-C і/або SP- В 3 Спосіб за п 2, який відрізняється тим, що SP-C присутній у вигляді органічного розчину 4 Спосіб за п 1, який відрізняється тим, що органічний розчин або суспензія містять 5-15 вагових % води 5 Спосіб за п 1, який відрізняється тим, що як ІНШІ компоненти містяться фосфоліпіди 6 Спосіб за п 1, який відрізняється тим, що процес розпорошувального сушіння проводять у нагрітому газі 7 Спосіб за п 6, який відрізняється тим, що як газ застосовують повітря або азот 8 Спосіб за п 6, який відрізняється тим, що газ має температуру на вході від 60 до 200 °С, а температуру на виході від 40 до 80 °С 9 Спосіб за п 6, який відрізняється тим, що газ має температуру на вході від 90 до 150 °С, а температуру на виході від 50 до 70 °С 10 Порошкоподібний препарат легеневого сурфактанта, одержаний за способом за будь-яким з пп 1-9 Легеневий сурфактант виділяють з альвеолярних пневмоцитів типу II у формі пластинчастих тілець (lamellares bodies) Ця речовина являє собою компактні елементи зі складу подвійних шарів фосфоліпідів (bilayern) з великим вмістом діпалмітоілфосфатіділхолшу (DPPC) і фосфатіділгліцеріну (PG) 3 наступних істотних компонентів у легеневому сурфактанті містяться протеїни, які позначають як SP-A, SP-B і SP-C SP-A являє собою високомолекулярний глікопротеш, який грає вирішальну роль при регуляції секреції Гідрофобні протеши SP-C і, в незначній мірі, SP-B при створенні мономолекулярної поверхневої плівки (у вузькому значенні у сурфактанті) грають роль «термодинамічних каталізаторів» Завдяки присутності цих протеїнів надмірно прикорюєтся кінетика розстилання По-перше, завдяки цьому стає можливим негайне пристосування О 00 ю со о> ю 59358 складу сурфактанта до будь-яких вимог поверхневого напруження Ці властивості відбиваються у екстремально гідрофобному характері протеїнів, особливо SP-C У завчасно народжених малюків легені ще не спроможні, або в недостатній мірі спроможні виробляти легеневий сурфактант, що через недостатність кисню загрожує життю (Infant Respiratory Distress Syndrome, IRDS) IRDS у завчасно народжених малюків стає головною причиною смерті На протязі багатьох років виявилося придатним лікувати IRDS шляхом введення препаратів легеневого сурфактанту у легені вражених дітей З результатів контрольних досліджень стало відомо, що препарати легеневого сурфактанту виявляють клінічну ефективність також щодо ARDS (Adult Respiratory Distress Syndrom), включаючи ALI (Acute Lung Injury) Препарати легеневого сурфактанту можна одержувати з легенів тварин у витратному процесі ектрагування і центрифугування, або складати з окремих компонентів У патенті №WO 92/06703 описується спосіб приготування синтетичних препаратів легеневого сурфактанту шляхом випарювання розчину хлороформу, що містить фосфоліпіди, такі як діпальмітоілфосфатіділхолш (DPPC) і дюлеїлфосфатіділетаноламш (DOPE), і холестерол, на ротаційному випарювачі до тонкої плівки, яка при бажанні ресуспендує разом з придатними протеїнами у буферному розчині З патенту №WO 92/06703 відомий принцип сгущення органічного розчину препарату легеневого сурфактанту, що містить виготовлений з допомогою генної технології легеневий сурфактант-протеш, наступної гідратації його і безпосередньо після цього люфілізацм Одержаний люфілізат має той недолік, що він перед використанням має бути репдратованим на протязі 15 хвилин при температурі 37°С, що несе безпосередньо користувачу відчуття дуже великої складності і можливості припуститися помилки У патенті №ЕР 0119056 наведений спосіб приготування препарату легеневого сурфактанту, причому всі складові частини розчиняють у органічному розчиннику, одержаний розчин згущують в умовах зменшеного тиску до сухого стану, одержаний осад на протязі досить довгого проміжку часу ресуспендують у водянистому середовищі при підвищеній температурі і одержану суспензію піддають процесу сублімаційного сушіння Цей спосіб технічно також дуже витратний Патент №DE 3229179 розкриває сутність способу приготування препарату легеневого сурфактанту, що не містить протеїнів, причому складові частини розчиняють у льодяній оцтовій кислоті, а одержаний розчин піддають процесу сублімаційного сушіння Недоліком цього способу є застосування льодяної оцтової кислоти, через те що це потребує прийняття дуже масштабних заходів щодо безпеки У патенті №ЕР 0655237 пропонується виготовляти лікарські препарати, які використовують у формі суспензійного аерозолю інгалятивним шляхом, способом розпорошувального сушіння з суміші етанол/вода Цей спосіб серед інших описаний як придатний для складів, які містять гідрофільні протеши, такі як екатібантасетат, інсулін для людини і бусерелінацетат Опис винаходу Покладене в основу цього винаходу завдання полягає в тому, щоб розробити спосіб приготування протеїнових порошкоподібних препаратів легеневого сурфактанту, які містять гідрофобні протеїни, як складові частини легеневого сурфактанту, який був би з технічного боку по можливості мало витратним і давав змогу одержувати переважно застосовуваний стабільний при збереженні продукт Несподівано було встановлено, що це завдання може бути вирішене завдяки тому, що органічний розчин або суспензії, що містять гідрофобні протеїни, як складові частини легеневого сурфактанту, і по бажанню ІНШІ складові частини, піддають процесу розпорошувального сушіння Завдяки цьому способу одержують продукт, що довгий час залишається стабільним при збереженні і без особливих витрат може бути ресуспендованим перед застосуванням Як особливу перевагу одержуваного порошку слід підкреслити незначний розмір його частинок (1-5мкм), що дозволяє застосувати використання інгалятивним шляхом Цей аспект набуває особливого значення при застосуванні препаратів легеневого сурфактанту у вигляді носія для ЛІКІВ, які подають у організм через легені Дуже дивно і до цих пір ще не з'ясовано, яким чином частково дуже чутливі до температури складові частини легеневого сурфактанту протистоять умовам процесу розпорошувального сушіння Так, наприклад, відомо, що протеїн, який міститься у легеневому сурфактанті, позначений як SP-C, дуже швидко агрегує при температурі вище за -20°С і внаслідок цього стає неактивним У противагу цьому цей протеїн протистоїть процесу розпорошувального сушіння згідно винаходу без помітного розкладання і існує у вигляді пухкого порошку, що має можливість зберігатися при кімнатній температурі Тому об'єктом винаходу є спосіб, який відрізняється тим, що органічний розчин або суспензії, що містять гідрофобні протеїни, як складові частини легеневого сурфактанту, і по бажанню ІНШІ складові частини, піддають процесу розпорошувального сушіння Інші об'єкти винаходу випливають з наступних пунктів формули винаходу За гідрофобні протеїни, як складові частини легеневого сурфактанту, до уваги беруть у рівній мірі як синтетичні, включаючи виготовлені з допомогою генної технологи, протеїни, зокрема SPВ і SP-C, так також і їх суміші Під синтетичними протеїнами слід розуміти також такі протеїни, амінокислотна ПОСЛІДОВНІСТЬ ЯКИХ більш або менш сильно відхиляється від амінокислотної ПОСЛІДОВНОСТІ протеїнів природного походження, що входять складовою частиною до легеневого сурфактанту, включаючи такі з синтетичних протеїнів, які цілком самостійно з погляду на їх влас 59358 тивість втілювати легеневий сурфаісгант виявляють мало помітну амінокислотну ПОСЛІДОВНІСТЬ, таку, яка описана в патентах №ЕР 0593094 і №ЕР 92/22315 Ці протеши можуть бути ізольовані відомими способами, синтезовані і очищені Як розчинники для приготування органічного розчину або суспензій придатні згідно винаходу спирти, такі як метанол, етанол, 1-пропанол, 2пропанол, бутаноли, хлорпохідні вуглеводнів, такі як діхлорметан, хлорметан і ІНШІ, ацетон, ефір, вуглеводні, бензол, толуол і їх суміші, причому може міститися також вода, в такій мірі, в якій існує властивість змішуватися з водою Максимальний вміст води досягає 25 вагових- % Переважно вміст води складає 5-15 вагових-% Спеціалістові буде досить легко на основі його професійних знань в галузі розпорошувального сушіння і в разі необхідності шляхом загальновживаних ДОСЛІДІВ вибрати для висушуваних сумішей сурфактанту найбільш придатні розчинники або суміші розчинників У вигляді інших складових частин препарати легеневого сурфактанту містять звичайні речовини, зокрема фосфоліпіди, карбонові кислоти і буферні субстанції Перед початком розпорошувального сушіння розчин можна профільтрувати через стерильний фільтр Процес розпорошувального сушіння проходить само по собі відомим шляхом Більш докладний виклад цієї технології поданий у посібниках К Masters, Spray Drying Hanbook, 5th Ed 1991, і J Broadhead, S K Edmond Ronan, CT Rhodes, The Spray Drying of Pharmaceuticals, Drug Dev Ind Pharm 18,1169(1992) Принцип розпорошувального сушіння полягає в тому, щоб розчин або суспензії висушуваного продукту роздрібнити на найтонкіші крапельки і висушити потоком гарячого газу Частку твердої речовини, що залишається після випарювання розчинника виділяють з газового потоку з допомогою циклону і/або фільтрувального пристрою і збирають Згідно винаходу виявилося доцільним застосовувати у вигляді розчинів спирти і хлорпохідні вуглеводнів, зокрема метанол, етанол, 2пропанол, і хлороформ та їх суміші, в даному разі з незначною добавкою води (максимально до 25 вагових-%) Як сушильний газ до уваги беруть зокрема повітря і азот Температуру газу на вході доцільно підтримувати у межах 60-200°С, переважно 90-150°С Температуру газу на виході підтримують шляхом ВІДПОВІДНОГО регулювання продуктивності сушіння і/або КІЛЬКОСТІ газу у межах 40-80°С, переважно 50-70°С Приклади приготування Приклад 1 7,0г 1,2-діпальмітоіл-3-єп-фосфатіділхоліну, 2,5г 1-пальмітоіл-2-олеоіл-3-єп-фосфатіділгліцерол натрію, 205мг кальціумхлорідціпдрату і 250мг пальмітінової кислоти розчиняють при нагріванні до 60°С у ЗООмл суміші етанолу з водою (85 15), охолоджують до кімнатної температури і змішують з 350мл розчину SP-C у суміші хлороформу з метанолом у відношенні 9 1 (с=429мг/л) Одержаний внаслідок розчин сушать у процесі розпорошувального сушіння у лабораторній розпорошувальній сушарці марки Buchi В 191 Умови розпорошування сушильний газ - повітря, температура газу на вході 90°С, температура газу на виході 52-54°С Одержують пухкий порошок Приклад 2 Розчин одержуваного з легенів великої рогатої худоби сурфактанту (одержують шляхом екстракції і наступного очищення, як описано, наприклад, у патенті №ЕР 406732) у суміші хлороформа з метанолом сушать у процесі розпорошувального сушіння у слідуючих умовах лабораторна розпорошувальна сушарка марки Buchi В 191, сушильний газ -азот, температура газу на вході 80°С, температура газу на виході 50-52°С Одержують дрібний, жовтуватий порошок Приклад З 10,95г 1,2-діпальмітоіл-3-єпфосфатіділхоліну, 4,6г 1-пальмітоіл-2-олеоіл-3sn-фосфатіділгліцероламмонію, 418мг кальціумхлорідціпдрату і 750мг пальмітінової кислоти розчиняють при температурі 50°С у ЗООмл суміші 2пропанол/вода (85 15), і після охолодження до 30°С змішують з 620мл розчину SP-C у суміші ізопропанол/вода (95 5, с = 484 мг/л) Одержаний внаслідок розчин сушать у процесі розпорошувального сушіння у лабораторній розпорошувальній сушарці марки Buchi В 191 Умови розпорошування сушильний газ - азот, температура газу на вході 100°С, температура газу на виході 58-60°С Одержують порошок без кольору Приклад 4 3,74г (5,1ммоль) 1,2-діпальмітоіл-3-єпфосфатіділхоліну, 2,81г (3,7ммоль) 1-пальмітоіл2-олеоіл-3-єп-холіну, 2,90г (3,9ммоль) 1,2діпальмггоілфосфатіділ-З-зп-фосфатіділгліцеролнатрію, 234мг пальмітінової кислоти і 279мг (1,9ммоль) кальціумхлоріддіпдрату розчиняють при температурі 50°С у 160мл суміші 2пропанол/вода (85 15), і після охолодження до 30°С змішують з 566мл розчину SP-C у суміші ізопропанол/вода (92 8, с=330мг/л) при температурі 30°С Одержаний внаслідок розчин сушать у процесі розпорошувального сушіння у лабораторній розпорошувальній сушарці марки Buchi В 191 Умови розпорошування сушильний газ азот, температура газу на вході 90°С, температура газу на виході 58-60°С Одержують порошок без кольору Приклад 5 0,5г RLLLLRLLLLRLLLLRLLLLR (R=Arg, l_=l_eu), 7,125г 1,2-діпальмітоіл-3-5пфосфатіділхоліну і 2,43г 1-пальмітоіл-2-олеоіл-3sn-фосфатіділ-гліцерол-аммонію розчиняють у 500мл суміші хлороформа з метанолом у відношенні 1 1 при нагріванні до 45°С і сушать у процесі розпорошувального сушіння у лабораторній розпорошувальній сушарці марки Buchi В 191 Умови розпорошування сушильний газ - азот, температура газу на вході 85 °С, температура газу на виході 55°С Одержують порошок без кольору 59358 Комп'ютерна верстка Т Чепелєва Підписано до друку 06 10 2003 ТиражЗЭприм Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна