Засіб визначення органоспецифічних аутоімунних процесів

Я РЕСПУ6ЯИН 4294597/28-14 (22) 07,08.87 (46) 15.09.89, Бюл, № 34 (71) Киевский медицинский институт им, акад, АяА.Богомольца (72) В.Г.Бордонос, Н.И.Якуба и Л*И,Скрипка (53) 615.375 (088.8) (56) Злотницкая Р.П. и Фрадкин ВвА, Реакция нейтрофрлов периферической крови на печеночный антиген у больных с хроническими заболеваниями печени» Советская медицина, 1982, № 3» с.3437, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОРГАНОСПЕЦИШЧЕСКИХ АУТОШУННЫХ ПРОЦЕССОВ (57) Изобретение относится к медицине и может найти применение Б терапии я педиатрии при диагностике хронических заболеваний, сопровождающихся аутоиммунными процессами органоспецифического типа. Цель изобретения повышение точности способа. Исследуемый тканевой антиген наслаивают на частицы латекса и производят постановку реакции фагоцитоза и НСТ-теста с частицами латекса без антигена и с латексом» нагруженным определенным органоспецифическим антигеном, определяют процент фагоцитоза, фагоцитарное число и НСТ-тест в опытной и контрольной проблемах н результаты сопоставляют. При снижении показателей поглощения в опытной пробе в 2 и более раз по сравнению с контрольной наряду с повышением НСТ-теста в опытной пробе в 1,5 раза по сравнению с контрольной диагностируют наличие аутоимунного процесса к данному органоспецифическому антигену. Точность способа возрастает с 62 до 96%. Изобретение относится к медицине а может найти применение в терапии и педиатрии при диагностике хронических заболеваний, сопровождающихся аутоимуиными процессами органоспецифического типа, Цель изобретения - повышение точности способа определения аутоиммунных процессов, Способ осуществляется следующим образом, 1 этап, Наслоение тканевого антигена на латекс. Инертные частицы латекса размером 1,2 мк в концентрации 10 в соотношении 1:1 смешивают с тканевым антигеном, приготовленным по обычной методике. Полученную смесь помещают в испарительное отделение холодильника на 18 ч ( после чего центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин, нэдосадочную жидкость снимают, К осадку, содержащему латекс, нагруженный тканевым антигеном, добавляют физиологический раствор в количестве, равном первоначальному количеству антигена (концентрация латекса с антигеном сохраняется в пределах 10 ) , II этап. Постановка реакции поглощения и НСТ-теста с латексом, нагруженным тканевым антигеном (опытная про СО с З 1508162 без антигена ^кон ба) и с латексом трольная проба)„ Кровь из пальца больного в количестве 0,4 мл собирают в пробирку, _ содержащую 1 каплю гепарина, центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10 мин, снимают лейковзвесь и растворяют ее в 0,2 мл среды Игла, Полученную взвесь по 0,1 мл наносят (0 на покровные стекла, ломеценные в* маленькие пластмассовые чашки, добавляют 0,1 мл 1%~ного раствора нитросинего тетризолия, после чего в контрольную пробу вносят 0,05 мл латекса без ан- 15 тигена, а в опытную пробу - 0,05 мл л а т е к с а , нагруженного тканевым антигеном. Пробы в закрытых чашечках инкубируют в термостате 30 мин, после чего надосадочную жидкость на покров- 20 ных стеклах сливают, стекла высушивают и фиксируют в парах формалина в течение 15 мин. Докрашивают препараты ядерным красителем (например, 1%-ным раствором метилового зеленого в 25 течение 7 мин), Пробы оценивают под иммерссиоиным микроскопом, определяя проЛ*2нт нейтрофилов, поглотивших частицы латекса (процент фагоцитоза), и процент" нейтрофилов, восстановивших нитроси- 30 ний тетразолий в кераствошлый форма™ зан (НСТ-тест). 05а показателя определяются на одном и том же препарате как в контрольной, так и в опытной пробе. Латекс при этом служит как ^5 фагоцитируемым объектом в реакции поглощения нейтрофилога, так и стимулятором НСТ-теста, Сопоставляют результаты полученных исследований (процент фагоцитоза и 40 НСТ-тест) в контрольной и опытной пробах, достоверным диагностическим критерием считая снижение фагоцитоза в 2 и более раз ниже по сравнению с контрольной наряду с повышением НС1- ^$ теста в опытной пробе в 1,5 р а з а выше по сравнению с контролем диагностируют наличие аутоиммунноготроцесса к данному оргаиоспецифическому антигену. 5 0 П р и м е р Ї, Больной К,, 12 л е т в Впервые заболел вирусным гепатитом в возрасте 10 лет, Поступил в стационар на 7-ой день болезни в состоянии средней тяжести с умеренно выраженной ик- .„ теричностью склер, болями в животе, печень выступала из-под реберной дуги на 3,5 см. Билирубин крови 28,5 мг/о, АЛТ-715 ед Е АСТ-545 ад. Протром снижен до 63%, осгаточныи азот 0,2 7 г / л , общий белок 71 г/л, альбумины33 г / л , глобулины Р ( , - 3 г 7 л ; е І £ - 8 г / л ; р - 9 г / л , £ - 1 8 г / л . Общий анализ крови: эритр, 4 # /и10* й /1 мкл; гемоглобин 132,5 г/л; лейкоциты 5*2 '10 ; э—9% j п-7%, с-26%; лимф, 58%. м-5%; СОЭ 8 мм/ч. При многократном исследовании НВ& - антиген обнаружен не был, •Эхограмма, сигналы от границ печени хорошо выражены, но кмеют измененную форму» Дополнительные импульсы средней амплитуды правильной формы регистрируются в области ворот печени . При обследовании по известному способу ЇЇЇЇН без печеночного антигена 0 , 0 5 ; П Н с печеночным антигеном 0,14, П Обследование по предлагаемому способу * В контрольной пробе (при фагоцитозе л а т е к с а без антигена) процент фагоцитоза 47%, НСТ-тест 28%, а в опытной пробе (при фагоцитозе л а т е к са, нагруженного печеночным антигеном) процент фагоцитоза 23%, НСТ-тест 42%. Следовательно, фагоцитарная активность нейтрофилон при применении л а т е к с а , нагруженного печеночным антигеном снижалась в 2 р а з а , тогда как НСТ-тест стимулированный латексом, нагруженным печеночным актигеном ( повышался в і 0 5 р а з а , Следовательно f полученные данные входят в диагностические критерии формулы изобретения и свидетельствуют о наличии аутоимун™ ного процесса в отношении печеночного антигена* Поставлен диагноз: хронический гепатит. Дальнейшее течение заболевания поззопил.о подтвердить установленный д и агноз в Под давлением проведенного л е чения, включакщего дезинтоксикациоиную терапию, предниэолон, витаминные препараты, стимуляторы иммунитета и д р , , на 1-й день болезни состояние больного нормализовалось, однако полаая нормализация лабораторных показателей наступила только на 68-й д е н ь , С диагностической целью при удовлетворительном самочувствии и удовлетворительных биохимических показателямпроизведена пункциональная биопсия, в заключение которой выставлен окончательный диагноз: хроиический гепатит умеренно вьфійженной активности без признаков цирротических изменений, В данном примере диагноз подтэарждается совокупностью клинических 3 6 15081 62 и лабораторных данных, показано также ем, наличия аутоиммуного процесса и совпадение исследования f проведенного позволяет поставить диагноз неспеципо предлагаемому способу с наиболее фического яэвенного колита. достоверным методом исследования - гис--_ После стиханий острых проявлений тологическим, тогда как при обследоваязвенного колита с диагностической нии по известному способу положительцелью ребенку проведено ректороманоный результат не получен. Это подтверскопию, при которой выявлено отсек и ждает большую точность заязляємого мегиперемию слизистой оболочки толтода по сравнению с прототипом, jg, стой кишки, утолщение ее складок, наличие геморрагии t отдельных эрозий, И Р и м е р 2, Больной Д, , 8 л е т , поступил в стационар с жалобами на боли в нижних отделах живота, преиТаким образом, в данном примере мущественно f после еды и перед актом показаны кликико-лабораторные дандефекации а Периодически отмечается |5 ные и данные диагностики по предлаганеустойчивость ступа^ примесь слизи емому способу. Объективность диагноза и крови е При объективном исследоваподтверждена методом ректоромаиосконии - выражены симптомы интоксикации, пии, тогда как при обследовании по значительная болезненность при пальизвестному способу положительного дипации в левой подвоздошной области, 20 агностического результата не получено, сигмовидная кишка спастически уплотчто подтверждает большую точность нена, болезненна при пальпации, В предлагаемого способа» общем анализе крови; гемоглобин 80г/л в лейкоцитов 8»9 10 , э - 2 , п - 8 , с~62, м-9, СОЭ 25, Белковые фракции: общий 25 Для проверки диагностической ценбелок 61 г / л , альбумины 28 г / л , глоности способа проведено исследование булиновые фракции: Ы,-- 2 % ; Ы г ~ 6 , Й - П „ у 20 здоровык лиц и 68 больных р а з личными хроническими заболеваниями, У '•14, При копроскопин кала - слизь сопровождающимися аутоиммунными прои кровь в уиеренном количестьзе, бактериологическое исследование ™ дне30 цессами. сбактериоэ з а усиленного роста пато™ гєнньпі ттаіЧмов кишечной пале ЧЕКИ в Для повышения точности способа в При обследование по известному споформулу изобретения включены пограсобу іШН без антигена 0 , 0 8 ; Ш Н с анТ ничные значения величин, характеритигеном кишечника 0.1Й, зующих снижение поглотительной и повышение НСТ-восстанавливающей способОбследование по изобретению провености при специфическом фагоцитозе дено з два этапа; 1-й ' наслоение анчастиц л а т е к с , нагруженных соответтигена кишечника на л а т е к с ; 11-й ствующим тканевым антигеном по сравнепостановка фогоцитарных реакций с л а нию с неслецифическим фагоцитозом тексом без антигена и с латексом,, на- ^ (при применении и в качестве фагоцигруженным антигеном кишечника. тируемого объекта частиц л а т е к с а без Получены следующего результаты; поа н т и г е н а ) , На высокую достоверность глотительная способность иеитрофилов данных указывает отсутствие разницы при і єспецифическом (без антигена кишечника) фагоцитозе 52% t HCT-TecTs .- показателей поглотительной и НСТ-восстанавливающей способности при постастимулированный латексом, не нагруловке неспецифического и специфичесженным антигеном кишечника, 32%0 При кого ( с различными тканевыми антигеспецифическом латексфагоцкте ( с и с нами) фагоцитоза у здоровых лиц пользованием л а т е к с а , нагруженного кишечным антигеном) процент фагоци™ д« (р