Спосіб виявлення обструктивних змін в органах дихання експериментальних тварин із спонтанною артеріальною гіпертензією

1 .Спосіб виявлення обструктивних змін в органах дихання експериментальних тварин із спонтанною артеріальною гіпертензією, який включає дослідження морфофункціональних змін в органах дихання при есенціальній гіпертензії, який відрізняється тим, що здійснюють морфологічне порівняльне дослідження структурних змін в легенях тварин на ранніх етапах появи артеріальної гіпертензії, при цьому тварин розміщують окремо в спеціалізованих клітках і утримують на стандартному харчовому раціоні в умовах вільного доступу до їжі і води і акліматизують до кімнатних умов для проведення дослідження, після чого, після забою тварин, легені видаляють повністю, а одну долю легенів беруть для гістологічного дослідження, причому при проведенні мікроскопічного дослідження фрагменти досліджуваних органів фіксу U 2 (19) 1 3 дження морфофункціональних змін в органах дихання при есенціальній гіпертензії, який, згідно з корисною моделлю, здійснюють морфологічне порівняльне дослідження структурних змін в легенях тварин на ранніх етапах появи артеріальної гіпертензії, при цьому тварин розміщують окремо в спеціалізованих клітках і утримують на стандартному харчовому раціоні в умовах вільного доступу до їжі і води і акліматизують до кімнатних умов для проведення дослідження, після чого, після забою тварин, легені видаляють повністю, а одну долю легенів беруть для гістологічного дослідження, причому при проведенні мікроскопічного дослідження фрагменти досліджуваних органів фіксують в 10% розчині нейтрального формаліну, промивають проточною водою, дегідратують у спиртах зростаючої концентрації та занурюють у парафін, після чого на санному мікротомі виготовляють зрізи товщиною 5-7 мкм і забарвлюють їх гематоксиліном та еозином по ван Гізону, а зображення на монітор компьютера виводять з мікроскопа Zeiss Canon за допомогою відеокамери Ахіо Vision Camera і програми Inter Video Win DVR. Спосіб відрізняється тим, що важкість ураження легень оцінюють за шкалою від 0 до 3 балів за такими ознаками: 1) обструкція дихальних шляхів (ДШ) (0 - нема; 1 - часткова або повна обструкція 2 ДШ; 3 - часткова або повна обструкція 3 і більше ДШ); 2) кількість залозистих клітин, їх процентне співвідношення (0 - нема; 1 - 0-5%; 2 - 5-20%; 3 більше 20%); 3) розширення альвеол, руйнування альвеолярних перегородок (0 - нема; 1 - п'ятниста паренхіма; 2 - змінено до 50% паренхіми легень; 3 - змінено більше 50% паренхіми); 4) лімфоїдна гіперплазія: периваскулярна, перибронхіальна або лімфоїдні вогнища у паренхімі легень (0 - нема; 1 1 вогнище у частці легені; 2 - 2 вогнище у частці легені; 3 - 3 і більше вогнищ у частці легені). Запропонований спосіб передбачає дослідження структурних та пов'язаних з ними метаболічних змін органів дихальної системи, враховуючи клінічні та лабораторні дані, є необхідним кроком у визначенні природи легеневої дисфункції при есенціальній гіпертензії та розробки методів корекції даних порушень. Крім того, спосіб відрізняється доступністю, оригінальністю виконання, точністю даних дослідження обструктивних змін в органах дихання експериментальних тварин із спонтанною артеріальною гіпертензією. Спосіб здійснюють наступним чином. Приклад Дослідження проводилося на гіпертензивних щурах лінії SHR та нормотензивних щурах лінії Вістар (WKY - normotensive Wistar-Kyoto rats). Досліджувані лінії тварин не відрізнялися між собою за статевим і віковим складом. В експерименті було використано 25 щурів віком 3 місяці та вагою 230300 г. Тварини розміщувалися окремо в спеціалізованих клітках і утримувалися на стандартному харчовому раціоні в умовах вільного доступу до їжі і води, їх акліматизували до умов кімнати для проведення випробувань. Після забиття тварин легені видалялися повністю. Одна доля легенів бралася для гістологічного дослідження. 61980 4 При проведенні мікроскопічного дослідження фрагменти досліджуваних органів фіксували в 10% розчині нейтрального формаліну, промивали проточною водою, дегідратували у спиртах зростаючої концентрації та занурювали у парафін. На санному мікротомі виготовлялися зрізи товщиною 5-7 мкм і забарвлювали гематоксиліном та еозином по ван Гізону. На монітор комп'ютера зображення виводили з мікроскопа Zeiss Canon за допомогою відеокамери Ахіо Vision Camera і програми Inter Video WinDVR. Тяжкість ураження легень ми оцінювали за шкалою від 0 до 3 балів за такими ознаками: 1) обструкція дихальних шляхів (ДШ) (0 - нема; 1 часткова або повна обструкція 2 ДШ; 3 - часткова або повна обструкція 3 і більше ДШ); 2) кількість залозистих клітин, їх процентне співвідношення (0 - нема; 1 - 0-5%; 2 - 5-20%; 3 - більше 20%); 3) розширення альвеол, руйнування альвеолярних перегородок (0 - нема; 1 - п'ятниста паренхіма; 2 змінено до 50% паренхіми легень; 3 - змінено більше 50% паренхіми); 4) лімфоїдна гіперплазія: периваскулярна, перибронхіальна або лімфоїдні вогнища у паренхімі легень (0 - нема; 1 - 1 вогнище у частці легені; 2 - 2 вогнища у частці легені; 3 3 і більше вогнищ у частці легені). У піддослідних тварин зі спонтанною артеріальною гіпертензією мікроскопічно було виявлено звуження просвіту бронхів (див. Фіг.1), збільшення продукції слизу та порушення дренажної функції бронхіального дерева (Фіг.2). У стінках бронхів була збільшена кількість сполучної тканини, що сприяла стійкому прогресуючому стенозу мілких бронхів і приводила до розширення респіраторних бронхіол, альвеолярних ходів і мішечків та супроводжувалася зменшенням площі альвеолярної поверхні легень. В результаті пошкоджувався еластичний каркас міжальвеолярних перегородок і виникала емфізема легень (Фіг.5, 6). Навколо бронхів та судинних стінок були локалізовані лімфоїдні інфільтрати різних розмірів (Фіг.3, 4). Поява лімфоїдних вогнищ, які виявлялися при гістологічному дослідженні у кожному зрізі, можна пояснити імунологічними змінами, характерними для даної лінії тварин (імуносупресія) [5], застоєм слизу у бронхах та змінами коагуляційних властивостей крові. Паралельно з цими змінами був виявлений і склероз стінок судин (Фіг.5). Таким чином, у щурів зі спонтанною артеріальною гіпертензією реєструються зміни структурних компонентів паренхіми легень, які є характерними для хронічного обструктивного захворювання легень [6, 7] Висновок: щурі лінії SHR зі спонтанною артеріальною гіпертензією можуть використовуватися в експериментальних дослідженнях для вивчення патогенетичних та морфофункціональних змін в органах і системах, що виникають при поєднанні есенціальної гіпертензії та хронічного обструктивного захворювання легень. Корисна модель може бути використана у науково-дослідних лабораторіях при проведенні експериментів на піддослідних щурах лінії SHR. Джерела інформації: 5 1. Заноздра Н.С. Особеннности адаптации кислороднотранспортной системы к физическим нагрузкам у больных пограничной артериальной гипертензией / Н.С. Заноздра, Л.Н. Малышко // Врачеб. дело. - 1983. - №1. - С. 33-37. 2. Катюхин В.Н. Сосотояние функции внешнего дыхания у больных гипертонической болезнью / В.Н. Катюхин // Врачеб. дело. - 1988. - №6. - С. 3235. 3. Туев А.В. Функция внешнего дыхания оксигенации крови и содержание биогенных аминов при различных гемодинамических вариантах гипертонической болезни / А.В. Туев, В.В. Щекотов // Кардиология. - 1986. - №8. - С. 77-81. 61980 6 4. Бобров В.О. Системна артеріальна гіпертензія при хронічних обструктивних захворюваннях легень / В.О. Бобров. - К.: Здоров'я, 1994. - 208 с. 5. Yu Bei. Acute Tobacco Smoke-Induced Airways Inflammation in Spontaneously Hypertensive Rats / Yu Bei, Kodavanti Urmila, Takeuchi Minoru at al. // Inhalation Toxicology. - 2008. - Vol. 20. - P. 623633. – прототип. 6. Hogg J.C. Lung structure and function in COPD / J.C. Hogg // The International Journal of Tuberculosis and Lung Disease. - 2008. - Vol. 12(5). P. 467-479. 7. Черняев А.Л. Патоморфология. Хронический бронхит / А.Л. Черняев. // Русский медицинский журнал. - 1997. - Т. 5. - №17. - 110. 7 Комп’ютерна верстка А. Рябко 61980 8 Підписне Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601