Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл класу igm до вірусів простого герпесу 1 і 2 типів уніфікована “dia-hsv 1/2-igm-u”

Реферат: Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл класу IgM до вірусу простого герпесу 1 і 2 типів уніфікована "DIA-HSV ½-IgM-u", в якій антигени вірусу простого герпесу з культури клітин використані в складі імуносорбенту. Як кон'югат застосовані антилюдські-антитіла проти IgM, зв'язані з пероксидазою. В тест-системі застосовується імуносорбент з сорбованими на твердій фазі моноклональними антитілами проти IgM людини. Пероксидазний кон'югат - рекомбінантні антигени G1 HSV1 та G1 HSV2 аналоги білків вірусів простого герпесу 1 і 2 типів, який виявляють за допомогою однокомпонентного розчину хромогену. UA 72440 U (12) UA 72440 U UA 72440 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Корисна модель належить до біотехнології, імунохімії та медицини і може бути використана для виявлення антитіл класу IgM до вірусів простого герпесу 1 (HSV1) і 2 (HSV2) типів в сироватці або плазмі крові людини з метою визначення активного перебігу інфекції - вперше набутої або її рецидиву. Відома тест-система для виявлення імуноглобулінів класу М проти вірусу простого герпесу у сироватках і плазмі крові людини при діагностиці герпесвірусної інфекції [1]. В основі тестсистеми лежать: імуносорбент - полістироловий планшет, в лунках якого сорбовані антигени вірусу простого герпесу з культури клітин, а як кон'югат застосовані антилюдські антитіла проти IgM, зв'язані з пероксидазою. Задача корисної моделі полягає в створенні імуноферментної тест-системи для визначення наявності антитіл класу IgM до вірусів простого герпесу 1 і 2 типів в сироватці або плазмі крові людини. Поставлена задача вирішується шляхом створення тест-системи, в основу роботи якої закладено принцип "захоплення антитіл" твердофазного імуноферментного аналізу, де імуносорбентом є моноклональні анти-IgM антитіла, а кон'югатом - рекомбінантні антигени Gl HSVlTa G2 HSV2, мічені пероксидазою. При внесенні в лунки досліджуваної сироватки всі антитіла класу IgM, присутні в зразку, зв'язуються з моноклональними антитілами на твердій фазі, утворюючи комплекси анти-IgMIgM. На наступному етапі IgM, специфічні саме до вірусів простого герпесу 1 і 2 типів, виявляють за допомогою антигенів HSV1 та HSV2 у складі пероксидазного кон'югату. Після відмивання незв'язаних компонентів в лунки додають розчин однокомпонентного хромогену. Пероксидазну реакцію зупиняють, додаючи стоп-реагент, і вимірюють оптичну густину суміші у лунках при довжині хвилі 450/620 нм, яка пропорційна концентрації специфічних IgM антитіл до HSV1 та HSV2 у зразках сироваток або плазми крові. Приклад 1. Визначення наявності антитіл до CMV в сироватці крові хворої К., 1989 року народження. Визначення проводять за відомою методикою [2] твердофазного імуноферментного аналізу. Для цього в лунки імуносорбенту з фіксованими на ньому моноклональними антитілами проти IgM людини вносять по 90 мкл розчину для розведення сироваток і по 10 мкл досліджувані зразки і позитивний та негативний контролі. Накривають планшет кришкою та інкубують при температурі (37±2)°С протягом 60 хв. Після закінчення інкубації промивають планшет 4 рази розчином для промивання і вносять в лунки по 100 мкл кон'югату. Знову інкубують планшет при (37±2)°С протягом 30 хвилин. Промивають планшет 6 разів розчином для промивання і вносять в лунки по 100 мкл однокомпонентного розчину хромогену ТМБ. Накривають планшет кришкою та інкубують при температурі (18-25)°С в темному місці протягом 30 хвилин. Для зупинення кольорової реакції вносять в лунки по 100 мкл стоп-реагенту (в тій же послідовності внесення що й ТМБ). Не більше як через 5 хв. після зупинення кольорової реакції визначають оптичну густину (ОГ) в лунках у двохвильовому режимі (450 нм відносно 620 нм). Для обліку результатів розраховують середнє значення ОГ негативного контролю - НКсер і граничне значення (ГЗ) по формулі: ГЗ=НКсер+0,3. Результат аналізу вважається негативним, якщо ОГ досліджуваного зразка менше ГЗ. Результат аналізу вважається позитивним, якщо ОГ досліджуваного зразка більше ГЗ. Досліджений матеріал від хворої було ідентифіковано як позитивний на наявність герпесвірусної інфекції. Використана Джерела інформації: 1. Інструкція по застосуванню тест-системи "HSV-IgM-ELISA test for detection of IgM antibodies to Herpes simplex virus in human serum" фірми Human. - Німеччина.-2011.-20 с. 2. Михайлов А.Т., Симирский В.Н. Методы иммунохимического анализа в биологии развития. - М.: Наука, 1981. 50 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 55 60 Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл класу IgM до вірусу простого герпесу 1 і 2 типів уніфікована "DIA-HSV ½-IgM-u", в якій антигени вірусу простого герпесу з культури клітин використані в складіімуносорбенту, а як кон'югат застосовані антилюдські антитіла проти IgM, зв'язані з пероксидазою, яка відрізняється тим, що в тест-системі застосовується імуносорбент з сорбованими на твердій фазі моноклональними антитілами проти IgM людини, а як пероксидазний кон'югат - рекомбінантні антигени G1 HSV1 та G1 HSV2 аналоги білків вірусів простого герпесу 1 і 2 типів, який виявляють за допомогою однокомпонентного розчину хромогену. 1 UA 72440 U Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2