Тест-система імуноферментна для якісного та напівкількісного визначення антитіл класу igg до вірусів простого герпесу 2 типу, уніфікована “dia-hsv 2-igg-u”

Реферат: Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл класу IgG до вірусу простого герпесу 2 типу, уніфікована "DIA-HSV 2-IgG-u", в якій антигени вірусу простого герпесу з культури клітин використані в складі імуносорбенту. Як кон'югат застосовані антилюдські-антитіла проти IgG, зв'язані з пероксидазою. В тест-системі застосовується імуносорбент з рекомбінантним антигеном аналогом поверхневого білка G2 HSV2, сорбованим в лунки полістиролового планшета, а як кон'югат - моноклональні антитіла проти IgG людини, мічені пероксидазою, які виявляють за допомогою однокомпонентного розчину хромогену. UA 72439 U (12) UA 72439 U UA 72439 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Корисна модель належить до біотехнології, імунохімії та медицини і може бути використана для виявлення антитіл класу IgG до вірусу простого герпесу 2 типу (HSV2) в сироватці або плазмі крові людини методом імуноферментного аналізу. Інфекція, викликана HSV2, порівняно з вірусом простого герпесу 1 типу (HSV1) рецидивує частіше та перебігає з більш важкою патологією. HSV2 може призводити до онкогенної трансформації клітин, у вагітних - до викиднів та уродженим вадам розвитку плоду, є причиною несприятливого прогнозу неонатальної герпетичної інфекції у новонароджених. У ряді випадків генітальний герпес перебігає атипово або безсиптомно. В зв'язку з цим при обстеженні пацієнтів лабораторне дослідження з використанням сучасних серологічних методів має важливе значення. Специфічні IgG антитіла з'являються на 10-14 день після інфікування та зберігаються в організмі протягом всього життя і через те серологічні методи дозволяють діагностувати захворювання як в період активації вірусу, так і при латентному перебігу захворювання. Відома тест-система для виявлення в сироватках і плазмі крові людини імуноглобулінів класу G (IgG) проти вірусу простого герпесу 2 типу, який звичайно вражає генітальну область [1]. В основі тест-системи лежать: імуносорбент - полістироловий планшет, в лунках якого сорбовані антигени HSV2 з культури клітин, а як кон'югат застосовані антилюдські-антитіла проти IgG, зв'язані з пероксидазою. Суть корисної моделі в створенні імуноферментної тест-системи для визначення наявності антитіл класу IgG до вірусу простого герпесу 2 типу в сироватці або плазмі крові людини. Поставлена задача вирішується шляхом створення тест-системи, в основу роботи якої закладено принцип твердофазного імуноферментного аналізу, де імуносорбентом є рекомбінантний антиген - аналог поверхневого білка G2 HSV2, сорбований в лунки полістиролового планшета, а кон'югат - моноклональні антитіла проти IgG людини, мічені пероксидазою, які виявляють за допомогою однокомпонентного розчину хромогена. При внесенні в лунки зразків досліджуваних сироваток антитіла класу IgG до вірусу простого герпесу 2 типу, у випадку їх наявності, зв'язуються з рекомбінантним антигеном G2 HSV2, сорбованим на твердій фазі, утворюючи комплекси антиген-антитіло. Утворені комплекси виявляють за допомогою пероксидазного кон'югату моноклональних антитіл до імуноглобулінів класу IgG людини. Після відмивання незв'язаних компонентів в лунки додають проявник розчин однокомпонентного хромогена тетраметилбензидину (ТМБ). Пероксидазну реакцію зупиняють, додаючи стоп-реагент, і вимірюють оптичну густину суміші у лунках при довжині хвилі 450/620 нм, яка пропорційна концентрації специфічних IgG антитіл до HSV2 у зразках сироваток або плазми крові. Приклад 1. Визначення наявності антитіл до вірусу герпесу 2 типу в сироватці крові хворої К, 1989 року народження. Визначення проводять за відомою методикою [2] твердофазного імуноферментного аналізу. При внесенні в лунки по 100 мкл попередньо розведених 1:50 зразків досліджуваних сироваток антитіла класу IgG до вірусу герпесу 2 типу, у випадку їх наявності, зв'язуються з рекомбінантним антигеном G2 HSV2, сорбованими на твердій фазі, утворюючи комплекси антиген-антитіло. Утворені комплекси виявляють за допомогою пероксидазного кон'югату моноклональних антитіл до імуноглобулінів класу IgG людини. Після відмивання незв'язаних компонентів в лунки додають розчин однокомпонентного хромогену. Пероксидазну реакцію зупиняють, додаючи стоп-реагент, і вимірюють оптичну густину суміші у лунках при довжині хвилі 450/620 нм, яка пропорційна концентрації специфічних IgG антитіл до вірусу простого герпесу 2 типу у зразках сироваток або плазми крові. Для оцінки зміни рівня антитіл в динаміці результат аналізу оцінюється в одиницях DIA Units (DU) за формулою: DU=(ОГсироватки × 10):ГЗ. Результат кожного аналізу оцінюють наступним чином: 50 >10DU