Штам streptomyces recifensis var. lyticus – продуцент гідролітичного ферментного препарату

Штам Streptomyces recifensis var. l yticus IМВ Ас-5001 - продуцент гідролітичного ферментного препарату. (19) (21) 99063082 (22) 04.06.1999 (24) 15.02.2001 (33) UA (46) 15.02.2001, Бюл. № 1, 2001 р. (72) Тодосійчук Тетяна Сергіївна, Шинкаренко Любов Миколаївна, Жолнер Лілія Григорівна, Федо 34119 спендували в дистильованій воді (рН 7,0) до оптичної густини 0,7-0,8 при довжині хвилі 540 нм у кюветі 0,5 см. Реакційну суміш (4 мл суспензії тесткультури та 0,02 мл фугату культуральної рідини) інкубували при 50°С протягом 10 хв, потім за різницею оптичної густини суспензії, визначеної на спектрофотометрі, розраховували ЛА в од./мл за формулою: ЛА=(ОГ п-С ОГ к )N/0,001Т, де ОГ п, ОГ к - початкова та кінцева оптична густина суспензії; С - коефіцієнт автолізу; N - розведення проби у реакційній суміші; Т - час інкубації, хв; 0,001 - коефіцієнт перерахунку на одиницю активності. На основі проведених робіт отримано штам, рівень біосинтезу якого за накопиченням цільового продукту у 1,5-2 рази вищий за прототип, стабільність прояву ознаки зберігається на протязі всієї наступної роботи з продуцентом (більше 15 пасажів) в лабораторних та дослідно-промислових умовах культивування. Отриманий штам Streptomyces recifensis var. L yticus 2435/М депоновано в Національній колекції мікроорганізмів Інституту мікробіології та вірусології НАН України за номером ІМВ Ас-5001. Морфологічні ознаки культури Діаметр гіф повітряного міцелію 0,7-0,9 мкм. Спороносці короткі, неспіральні, майже прямі, у молодої культури ледь хвилясті з часто розміщеними розгалуженнями. Спори овальні, утворюються шляхом фрагментації. Культурально-морфологічні особливості штаму Штам вирощують при 28°С протягом 48-60 годин на модифікованому рідкому середовищі Чапека та підібраному ферментаційному середовищі. Наприкінці росту утворюється пластівцевовидний міцелій, що заповнює 2/3 об’єму середовища. Культуральна рідина легко розділяється при відстоюванні, має запах дусту. Фізіологічна характеристика Штам добре росте на середовищах для актиноміцетів: Красильнікова СР-1, Гаузе-мінеральна №1, модифіковане Чапека та деяких інших. Забарвлення субстратного міцелію коливається від світло-жовтого до світло-коричневого. Добре розвинутий повітряний міцелій з'являється на згаданих середовищах на 2-3 добу, на МП А пізніше. Штам синтезує літичні ферменти на 2-3 добу, протеолітичні — на 3-4 добу, розріджує желатин, створо джує молоко; помірно виявляє амілотітичну активність, слабко росте на клітковині без помітного її руйнування; відновлює нітрати в нітрити; не має тирозиназної активності. Зброджує: глюкозу, галактозу, ксилозу. Не зброджує: сорбіт, інозит, рафінозу, рамнозу. Слабко асимілює дульцит, лактозу. Оптимальна температура росту 28°С. Оптимальне значення рН середовища 7,5-8,2. Штам зберігається у вигляді ліофілізованої спорової суспензії при 0-4°С та на щільному середовищі Чапека. Дослідно-промислове культивування штаму, що заявляється (2435/М) та штаму-прототипу (2435 ) проводилося в наступних умовах: ферментатор об’ємом 1000 л, аерація 0,5 V/V хв, перемішування 200 об./хв, рН 7,8-8,2, ферментаційне середовище на основі середовища Чапека. Характеристика відмінностей біосинтетичної здібності штамів подана в таблиці. Таким чином, наведені дані свідчать, що одержаний мутантний штам Streptomyces recifensis var. l yticus 2435/М у 1,5-2,0 рази продуктивніший за відомий штам (за рівнем накопичення літичної активності), тривалість процесу біосинтезу якого значно скорочена (що позначається на економічності отримання ферментного препарату). В результаті мутагенної обробки досягнуто не лише інтенсифікацію біосинтетичних процесів культури, а й збільшення питомої активності ферментного комплексу, про що свідчить майже однаковий вміст білку в культуральній рідині поряд з підвищенням цільової активності. Встановлена стабільність закріплення набутих ознак на протязі більш ніж 15 пасажів дає підстави для використання отриманого штаму як промислового продуценту. Таблиця Параметр Термін накопичення максимальної цільової (літичної) активності в культуральній рідині Літична активність культуральної рідини Концентрація білку в культуральній рідині __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2001 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 2 Штам 2435 Штам 2435/М 50-60 годин 5000 од/мл 1,9 мг/мл 40-50 годин 10000 од/мл 2,0 мг/мл