Тест-система імуноферментна для якісного та напівкількісного виявлення антитіл класу igg до вірусів простого герпесу 1 і 2 типів уніфікована “dia-hsv1/2-igg-u”

Реферат: Тест-система імуноферментна для якісного та напівкількісного визначення антитіл класу IgG до вірусів простого герпесу 1 і 2 типів, уніфікована "DIA-HSV ½-IgG-u", в якій антигени вірусу простого герпесу з культури клітин використані в складі імуносорбенту, а як кон'югат застосовані антилюдські-антитіла проти IgG, зв'язані з пероксидазою. В тест-системі застосовують імуносорбент з рекомбінантними антигенами аналогами поверхневих білків G1 HSV1 і G2 HSV2, сорбованими в лунки полістиролового планшета. Як кон'югат - моноклональні антитіла проти IgG людини, мічені пероксидазою, які виявляють за допомогою однокомпонентного розчину хромогену. UA 72441 U (12) UA 72441 U UA 72441 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Корисна модель належить до біотехнології, імунохімії та медицини і може бути використана для виявлення антитіл класу IgG до вірусів простого герпесу 1 (HSV1) і 2 (HSV2) типів в сироватці або плазмі крові людини методом імуноферментного аналізу. Вірус простого герпесу (Herpes Simplex Virus) належить до родини Herpesviridae і є ДНКвмісним вірусом розміром 150-200 нм в діаметрі. Відомі два серотипи вірусу HSV1 і HSV2, які мають спільний групоспецифічний нуклеокапсидний антиген і різні типоспецифічні антигени, зв'язані з нуклеокапсидом і ліпопротеїновою оболонкою. HSV1 переважно вражає шкіру обличчя, слизову ротової порожнини, роговицю ока. HSV2 - генітальну область. У інфікованої людини вірус зберігається протягом всього життя. Більший період часу вірус знаходиться в латентній формі та не викликає клінічних проявів захворювання. Активація вірусу відбувається при зниженні імунітету, перегріванні та переохолодженні організму. Специфічні IgG антитіла з'являються на 10-14 день після інфікування та зберігаються в організмі протягом всього життя, і через те серологічний метод дозволяє виявляти як активний вірус, так і пасивну інфекцію. Відома тест-система для виявлення в сироватках і плазмі крові людини імуноглобулінів класу G (IgG) проти вірусів простого герпесу 1 і 2 типів [1]. В основі тест-системи лежать: імунособент - полістироловий планшет, в лунках якого сорбовано суміш антигенів HSV1 і HSV2 з культури клітин, а як кон'югат застосовані антилюдські-антитіла проти IgG, зв'язані з пероксидазою. Суть корисної моделі в створенні імуноферментної тест-системи для визначення наявності антитіл класу IgG до вірусів простого герпесу 1 і 2 типів в сироватці або плазмі крові людини. Поставлена задача вирішується шляхом створення тест-системи, в основу роботи якої закладено принцип твердофазного імуноферментного аналізу, де імуносорбентом є суміш рекомбінантних антигенів аналогів поверхневих білків G1 HSV1 і G2 HSV2, сорбовані в лунки полістиролового планшета, а кон'югат - моноклональні антитіла проти IgG людини, мічені пероксидазою, які виявляють за допомогою однокомпонентного розчину хромогену. При внесенні в лунки зразків досліджуваних сироваток антитіла класу IgG до вірусів простого герпесу 1 і 2 типів, у випадку їх наявності, зв'язуються з рекомбінантним антигеном G1 HSV1 або G2 HSV2, сорбованими на твердій фазі, утворюючи комплекси антиген-антитіло. Утворені комплекси виявляють за допомогою пероксидазного кон'югату моноклональних антитіл до імуноглобулінів класу IgG людини. Після відмивання незв'язаних компонентів в лунки додають проявник - розчин однокомпонентного хромогену тетраметилбензидину (ТМБ). Пероксидазну реакцію зупиняють, додаючи стоп-реагент, і вимірюють оптичну густину суміші у лунках при довжині хвилі 450/620 нм, яка пропорційна концентрації специфічних IgG антитіл до HSV1 або HSV2 у зразках сироваток або плазми крові. Приклад 1. Визначення наявності антитіл до вірусів герпесу в сироватці крові хворої К, 1989 року народження. Визначення проводять за відомою методикою [2] твердофазного імуноферментного аналізу. При внесенні в лунки по 100 мкл попередньо розведених 1:50 зразків досліджуваних сироваток антитіла класу IgG до вірусів герпесу, у випадку їх наявності, зв'язуються з рекомбінантним антигенами G1 HSV1 або G2 HSV2, сорбованими на твердій фазі, утворюючи комплекси антиген-антитіло. Утворені комплекси виявляють за допомогою пероксидазного кон'югату моноклональних антитіл до імуноглобулінів класу IgG людини. Після відмивання незв'язаних компонентів в лунки додають розчин однокомпонентного хромогену. Пероксидазну реакцію зупиняють, додаючи стоп-реагент, і вимірюють оптичну густину суміші у лунках при довжині хвилі 450/620 нм, яка пропорційна концентрації специфічних IgG антитіл до вірусу простого герпесу у зразках сироваток або плазми крові. Для оцінки зміни рівня антитіл в динаміці результат аналізу оцінюється в одиницях DIA Units (DU) за формулою: DU=(ОГ сироватки × 10):ГЗ Результат кожного аналізу оцінюють наступним чином: >10DU