Тест-система “dia-hbsag-o” для одноетапного виявлення поверхневого антигену вірусу гепатиту b (hbsag)

Реферат: Тест-система для одноетапного виявлення поверхневого антигену вірусу гепатиту В (HBsAg), де як імуносорбент і кон'югат використовують моноклональні антитіла проти поверхневого антигену вірусу гепатиту В. На тверду фазу сорбовані моноклональні антитіла (МКА-В6) проти HBsAg вірусу гепатиту В, кон'югат-моноклональні антитіла (МКА 95Е1) проти інших епітопів HBsAg, мічені пероксидазою, в розчині з блокуючим агентом для підвищення чутливості та специфічності діагностичної системи, а проявник - однокомпонентний розчин хромогену. UA 72455 U (12) UA 72455 U UA 72455 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до біотехнології, імунохімії та медицини і може бути використана для аналізу сироватки або плазми крові людини на наявність поверхневого антигену вірусу гепатиту В (HBsAg) методом імуноферментного аналізу. В Україні розроблена і випускається тест-система для виявлення поверхневого антигену (HBsAg) вірусу гепатиту В (DIA-HBV) виробництва НВК Діапроф-Мед [1]. Також відома тестсистема "Monolisa Ag HBs PLUS" виробництва "Sanofi Diagnostics Pasteur" (Франція) для детекції HBsAg вірусу гепатиту В методом імуноферментного аналізу [2], в якій на полістироловий планшет сорбовані моноклональні анти-HBsAg антитіла, а як кон'югат використовують антитіла проти HBsAg, мічені пероксидазою. В основу корисної моделі поставлена задача створити імуноферментну тест-систему підвищеної чутливості для визначення HBsAg вірусу гепатиту В. Задачею корисної моделі є створення імуноферментної тест-системи, що діє за принципом одноетапного твердофазного імуноферментного аналізу "сандвіч"-варіанту для визначення поверхневого антигену вірусу гепатиту В. Поставлена задача вирішується тим, що шляхом використання імуносорбенту з сорбованими моноклональними антитілами (МКА-В6) проти HBsAg вірусу гепатиту В, кон'югатумоноклональних антитіл (МКА 95Е1) проти інших епітопів HBsAg, мічених пероксидазою, в розчині з блокуючим агентом для підвищення чутливості та специфічності діагностичної системи. Приклад 1. Визначення HBsAg вірусу гепатиту В у сироватці крові хворої І.,1979 року народження. Визначення проводять за відомою методикою [3] твердофазного імуноферментного аналізу. Для цього вносять у лунки імуносорбенту з фіксованими на ньому моноклональними антитілами проти HBsAg по 100 мкл досліджуваних зразків сироватки від хворої для виявлення поверхневого антигену вірусу гепатиту В та контрольні зразки: 2 позитивних і 3 негативних. Витримують 10 хв. при кімнатній температурі, а потім вносять в усі лунки по 50 мкл кон'югату моноклональних антитіл до інших епітопів HBsAg, мічених пероксидазою. Накривають планшет кришкою та інкубують при температурі 37 °C протягом 2 годин. При наявності в зразку HBsAg, він зв'язується як з антитілами на підложці так і з кон'югатом. Після відмивання 6 разів в лунки додають розчин проявника (однокомпонентний субстратний розчин з хромогеном) та інкубують при 18-22 °C у темряві 30 хв. Зупиняють кольорову реакцію, вносячи до всіх проб по 100 мкл стоп-реагенту. Не більш як через 5 хв. після зупинення кольорової реакції визначають оптичну густину (ОГ) в лунках у двохвильовому режимі за допомогою спектрофотометра. Значення ОГ зразка прямо пропорційне кількості HBsAg вірусу гепатиту В у сироватці. Досліджені сироватки хворої було ідентифіковано як позитивні на наявність HBsAg вірусу гепатиту В; з концентрацією HBsAg більше 100 пкг/мл. Приклад 2. Визначення чутливості та специфічності запропонованої тест-системи. Використовуючи набір "Monolisa Ag HBs PLUS" і запропоновану тест-систему, досліджували сироватки крові (по 20 достеменно позитивних та 100 достеменно негативних сироваток). Усі сироватки досліджували у двох повторностях кожною тест-системою за описаною методикою. Обидві тест-системи показали однакові результати: в 20 позитивних сироватках виявлено HBsAg вірусу гепатиту В. Мінімальна концентрація стандартного HBsAg, що була виявлена пропонованою тест-системою становила 0,1 пкг/мл. З 500 негативних сироваток від донорів, вагітних жінок та хворих на алергічні та імунні захворювання виявилися справді негативними 499 разків (специфічність - 99,8 %). Таким чином, пропонована тест-система забезпечує виявлення поверхневого антигену вірусу гепатиту В у досліджуваному матеріалі. Проста і надійна в роботі, проявляє високу чутливість та специфічність. Джерела інформації: 1. Деклараційний патент UA 68755 А. Тест-система імуноферментна для визначення поверхневого антигену (HBsAg) вірусу гепатиту В (DIA-HBV) Семіноженко В., Шевчук О. Α., Горлов Ю. І та ін. 15.07.2004. бюл № 7. 2. Инструкция по применению тест-системы "Monolisa Ag HBs PLUS" виробництва "Sanofi Diagnostics Pasteur" (Франція), 2002, 17 c. 3. Михайлов А. Т., Симирский В. Н. "Методы иммунохимического анализа в биологии развития". М. "Наука", 1981. 1 UA 72455 U ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 10 Тест-система для одноетапного виявлення поверхневого антигену вірусу гепатиту В (HBsAg), де як імуносорбент і кон'югат використовують моноклональні антитіла проти поверхневого антигену вірусу гепатиту В, яка відрізняється тим, що на тверду фазу сорбовані моноклональні антитіла (МКА-В6) проти HBsAg вірусу гепатиту В, кон'югат-моноклональні антитіла (МКА 95Е1) проти інших епітопів HBsAg, мічені пероксидазою, в розчині з блокуючим агентом для підвищення чутливості та специфічності діагностичної системи, а проявник - однокомпонентний розчин хромогену. Комп’ютерна верстка Л.Литвиненко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2