Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл класу igg до treponema pallidum (dia-тrep-u)

Реферат: Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл класу IgG до Treponema pallidum (DIATrep-u) включає сорбовані на полістироловий планшет рекомбінантні антигени, а як кон'югат використані антитіла проти імуноглобулінів класу IgG людини. Як позитивні контролі використовують очищені імуноглобуліни класу IgG людини, специфічні до Т. pallidum. В розчин для розведення сироваток додають блокуючий агент для зняття неспецифічного реагування. Як пероксидазний кон'югат застосовують антивидові моноклональні антитіла проти імуноглобуліну класу G людини, мічені ферментом, в блокуючому розчині, який виявляють за допомогою однокомпонентного розчину хромогену. UA 74134 U (12) UA 74134 U UA 74134 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до біотехнології, імунохімії та медицини і може бути використана для аналізу сироватки або плазми крові людини на наявність антитіл класу IgG до збудника сифілісу Treponema pallidum. Відома тест-система для виявлення антитіл проти Т. pallidum у сироватках і плазмі крові людини при діагностиці сифілісу [1]. В основі тест-системи лежать антигени - рекомбінантні поліпептиди аналоги антигенів Т. pallidum, використані в складі імуносорбенту, а як кон'югат застосовують антилюдські-антитіла, пов'язані з пероксидазою. Суть корисної моделі в створенні імуноферментної тест-систем для аналізу сироватки або плазми крові людини на наявність антитіл класу IgG до збудника сифілісу "DIA-Trep-u". Поставлена задача вирішується шляхом використання імуносорбенту з сорбованими рекомбінантними поліпептидами Трр15, Трр17, Трр47 аналогами білків Т. pallidum. При внесенні в лунки імуносорбенту позитивного контролю - очищеного імуноглобуліну класу IgG людини, специфічного до Т. pallidum, негативного контролю, який не містить антитіл до Т. pallidum та зразків досліджуваних сироваток, в розчин для розведення яких додано блокуючий агент для зняття неспецифічного реагування, антитіла класу IgG до збудника сифілісу, у випадку їх наявності в зразках, зв'язуються з рекомбінантними антигенами Т. pallidum, сорбованими на твердій фазі, утворюючи комплекси антиген-антитіло, які виявляють за допомогою пероксидазного кон'югату антивидових моноклональних антитіл специфічних до IgG людини, і однокомпонентного проявника. Пероксидазну реакцію зупиняють, додаючи стоп-реагент, і вимірюють оптичну густину суміші у лунках при довжині хвилі 450/620 нм, яка пропорційна концентрації специфічних IgG антитіл до збудника сифілісу у зразках сироваток або плазми крові. Приклад 1. Визначення наявності антитіл до Т. pallidum в сироватці крові хворої К., 1988 року народження. Визначення проводять за відомою методикою [2] твердофазного імуноферментного аналізу. Для цього в лунки імуносорбенту з фіксованими на ньому рекомбінантними поліпептидами аналогами-антигенів Т. pallidum вносять по 80 мкл розчину для розведення сироваток з блокуючим агентом для зняття неспецифічного реагування, а потім по 20 мкл досліджуваних зразків та контролів. Накривають планшет кришкою та інкубують в термостаті при температурі (37±2) °С протягом 60 хв. Після закінчення інкубації промивають планшет 4 рази розчином для промивання і вносять в лунки по 100 мкл суміші кон'югатів. Знову інкубують планшет в термостаті в тих же умовах протягом 30 хв. Промивають планшет 6 разів розчином для промивання і вносять в лунки по 100 мкл однокомпонентного розчину проявника хромогену ТМБ. Накривають планшет кришкою та інкубують при температурі (18-25) °С в темному місці протягом 30 хв. Вносять в лунки по 100 мкл стоп-реагенту для зупинення кольорової реакції (в тій же послідовності внесення що й ТМБ). Не більше як через 5 хв. після зупинення кольорової реакції визначають оптичну густину (ОГ) в лунках у двохвильовому режимі (450 нм відносно 620 нм). рекомбінантні поліпептиди аналоги антигенів Т. pallidum, використані як в складі імуносорбенту, так і в кон'югаті, зв'язані з пероксидазою. Досліджений матеріал від хворої було ідентифіковано як позитивний на наявність антитіл до збудника сифілісу. Таким чином, пропонована тест-система забезпечує виявлення антитіл до Т. pallidum. Проста і надійна в роботі. Використана література: 1. Інструкція про використання тест-системи імуноферментної для виявлення антитіл до Treponema pallidum. HBK "Діапрф-Мед", 2010, с. 1-2. 2. А.Т. Михайлов, В.Н. Симирский "Методы иммунохимического анализа в биологии развития". Μ. "Наука", 1981. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл класу IgG до Treponema pallidum (DIATrep-u), в якій на полістироловий планшет сорбовані рекомбінантні антигени, а як кон'югат використані антитіла проти імуноглобулінів класу IgG людини, яка відрізняється тим, що як позитивні контролі використовують очищені імуноглобуліни класу IgG людини, специфічні до Т. pallidum, в розчин для розведення сироваток додають блокуючий агент для зняття неспецифічного реагування, а як пероксидазний кон'югат застосовують антивидові моноклональні антитіла проти імуноглобуліну класу G людини, мічені ферментом, в блокуючому розчині, який виявляють за допомогою однокомпонентного розчину хромогену. 60 1 UA 74134 U Комп’ютерна верстка А. Крулевський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2