Спосіб визначення кислотоутворюючої активності lactobacillus

Реферат: Спосіб визначення кислотоутворюючої активності Lactobacillus шляхом внесення в лунки на щільному м'ясо-пептонному агарі з 1 % метиленовим синім на молоці суспензії лактобацил, виділених з піхви жінок, та вимірювання зони просвітлення навколо лунки з лактобацилами, розмір якої визначає ступінь активності кислотоутворення, аналіз результатів проводять в порівнянні з контролем. Причому якщо діаметр зони просвітлення від 10 до 20 мм - Lactobacillus проявляють високу кислотоутворюючу активність, а якщо діаметр зони просвітлення від 6 до 9 мм - Lactobacillus проявляють слабку кислотоутворюючу активність. UA 76040 U (54) СПОСІБ ВИЗНАЧЕННЯ КИСЛОТОУТВОРЮЮЧОЇ АКТИВНОСТІ LACTOBACILLUS UA 76040 U UA 76040 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до медицини, зокрема до клінічної мікробіології, і може бути використана для раціонального застосування пробіотичних препаратів при лікуванні дисбіотичних порушень статевих шляхів у жінок. Молочнокислі бактерії є важливою складовою нормальної мікрофлори генітальних органів жінки. В нормі ці бактерії пригнічують ендогенну флору, підтримують низькі значення рН, а також синтезують антимікробні субстанції (бактеріоцини, лізоцим). Всі види лактобацил продукують перекис водню, органічні кислоти. Активне кислотоутворення розглядається як один з важливих факторів антагонізму по відношенню до транзиторних мікроорганізмів. В основі механізму антагоністичної активності лактобацил по відношенню до патогенної та умовно-патогенної мікрофлори лежить реакція кисломолочного бродіння, що призводить до того, що в процесі життєдіяльності молочнокислих культур відбувається закислення середовища і створюються неблагоприємні умови для розмноження патогенних бактерій. Але серед антагоністично активних штамів молочнокислих бактерій зустрічаються слабкі кислотоутворювачі, які проявляють себе як слабкі антагоністи. В літературних джерелах описаний спосіб визначення активності кислотоутворення молочнокислих бактерій за методом Тернера, оснований на визначені титрованої кислотності в середовищі (Захарова Ю.В., Сухих А.С., Марковская А.А. Биологические свойства доминантных и ассоциативных микросимбионтов кишечника у ВИЧ-инфицированных детей // Фундаментальные исследования. - 2011. - № 11; Ивашкина Н.Ю., Ботина С.Г. Оригинальный отечественный пробиотик аципол: молекулярно биологический и метаболические характеристики // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2009. - № 2. - Т. 19). Відомий спосіб є біохімічним та дозволяє визначати активність кислотоутворення молочнокислих бактерій титрометричним методом. Недоліками способу є те, що даний спосіб потребує тривалої підготовки, складних реактивів та спеціального обладнання для постановки дослідження. В патентних та науково-медичних джерелах аналогів та прототипу способу, що заявляється, не виявлено. В основу корисної моделі, що заявляється, поставлено задачу виявлення у жінок з дисбіозом піхви штамів Lactobacillus зі зниженою кислотоутворюючою активністю. Одержані дані можуть бути використані як критерій до призначення пробіотиків та інших комерційних препаратів, які містять Lactobacillus, що забезпечує підвищення ефективності лікування дисбіотичних порушень статевих шляхів у жінок. Поставлена задача способу визначення кислотоутворюючої активності Lactobacillus вирішується шляхом внесення в лунки на щільному м'ясо-пептонному агарі з 1 % метиленовим синім на молоці суспензії лактобацил, виділених з піхви жінок, та вимірювання зони просвітлення навколо лунки з лактобацилами, розмір якої визначає ступінь активності кислотоутворення, аналіз результатів проводять в порівнянні з контролем, причому: - якщо діаметр зони просвітлення від 10 до 20 мм - Lactobacillus проявляють високу кислотоутворюючу активність, - якщо діаметр зони просвітлення від 6 до 9 мм - Lactobacillus проявляють слабку кислотоутворюючу активність. Спосіб визначення кислотоутворюючої активності Lactobacillus здійснюється наступним чином: з чистої культури Lactobacillus, виділених з жіночих статевих органів та музейних штамів Lactobacillus та Streptococcus faecalis готують суспензію бактерій за стандартом мутності 5 ОД (ГІСКу ім. Л.О. Тарасевича). З робочої зависі готують серію десятикратних розведень на 6 фізіологічному розчині. При дослідженні використовують розведення 10 ступені. На щільному м'ясо-пептонному агарі з 1 % метиленовим синім на молоці роблять лунки діаметром 5 мм, в які вносять 0,2 мл суспензії Lactobacillus, виділених з піхви жінок з дисбіотичними порушеннями статевих шляхів. В контрольні лунки вносять по 0,2 мл суспензії музейних штамів Lactobacillus acidophilus В-5863, що має високу кислотоутворюючу активність, Lactobacillus plantarum 8P-A3 з низькою кислотоутворюючою активністю, Streptococcus faecalis, для якого позитивний тест з метиленовим синім на молоці є диференціюючою ознакою та фізіологічний розчин хлориду натрію. Чашки інкубують в термостаті при t 37 °C протягом 24 годин. Після інкубації в термостаті вимірюють діаметри зон просвітлення навколо дослідних та контрольних лунок з лактобацилами. Діаметри зон вимірюють в міліметрах (мм). Діаметр зони просвітлення від 10 до 20 мм свідчить, що лактобацили мають високу кислотоутворюючу активність, при діаметрі зони від 6 до 9 мм - слабку кислотоутворюючу активність. Суть способу пояснюється прикладами: 1 UA 76040 U 5 10 15 20 25 Приклад 1. Хвора І., 32 роки, знаходилась на лікуванні у відділенні планування сім'ї ДУ "ІПАГ НАМИ України". Клінічний діагноз: вагініт. При мікробіологічному дослідженні виділень виявлено суттєве зниження концентрації Lactobacillus - до 10 КУО/мл. Вивчення кількісного рівня умовно-патогенної флори свідчило про 6 4 активну контамінацію піхви грибами роду Candida - 10 КУО/мл, S. epidermidis - 10 КУО/мл. Оцінка кислотоутворюючої активності Lactobacillus свідчить, що діаметр зони просвітлення навколо лунки з Lactobacillus, виділених з піхви хворої І. становив 7 мм, що вказує про слабку кислотоутворюючу активність Lactobacillus, навколо контрольних лунок діаметр зони просвітлення становив: Lactobacillus acidophilus В-5863 - 18 мм, Lactobacillus plantarum 8P-A3 7мм, Streptococcus faecalis - 17мм, навколо лунки з фізіологічним розчином хлориду натрію зони просвітлення не спостерігалось. Приклад 2. Хвора Д., 26 роки, знаходилась на лікуванні у відділенні планування сім'ї ДУ "ІПАГ НАМН України". Клінічний діагноз: вагініт. При мікробіологічному дослідженні виділень виявлено бактерії роду Lactobacillus в 4 концентрації 10 КУО/мл. Вивчення кількісного рівня умовно-патогенної флори свідчило про 4 активну контамінацію піхви Е. соli - 10 КУО/г та грибами роду Candida - 10 КУО/г. Оцінка кислотоутворюючої активності Lactobacillus свідчить, що діаметр зони просвітлення навколо лунки з Lactobacillus, виділених з піхви хворої Д. становив 8 мм, що свідчить про слабку кислотоутворюючу активність Lactobacillus, навколо контрольних лунок діаметр зони просвітлення становив: Lactobacillus acidophilus В-5863 - 20 мм, Lactobacillus plantarum 8P-A3 - 9 мм, Streptococcus faecalis - 18 мм, навколо лунки з фізіологічним розчином хлориду натрію зони просвітлення не спостерігалось. Таким чином, спосіб визначення кислотоутворюючої активності Lactobacillus сприяє вияву штамів Lactobacillus зі зниженою кислотоутворюючою активністю у жінок з дисбіотичними порушеннями статевих шляхів та може бути використаний як критерій до призначення пробіотиків та комерційних препаратів, що містять Lactobacillus з високою кислотоутворюючою активністю. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 30 35 Спосіб визначення кислотоутворюючої активності Lactobacillus шляхом внесення в лунки на щільному м'ясо-пептонному агарі з 1 % метиленовим синім на молоці суспензії лактобацил, виділених з піхви жінок, та вимірювання зони просвітлення навколо лунки з лактобацилами, розмір якої визначає ступінь активності кислотоутворення, аналіз результатів проводять в порівнянні з контролем, причому якщо діаметр зони просвітлення від 10 до 20 мм - Lactobacillus проявляють високу кислотоутворюючу активність, а якщо діаметр зони просвітлення від 6 до 9 мм - Lactobacillus проявляють слабку кислотоутворюючу активність. Комп’ютерна верстка А. Крулевський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2