Спосіб визначення антимікробної активності ефірних олій

Спосіб визначення антимікробної активності ефірних олій (ЕО) шляхом дифузії ЕО в живильне середовище і затримки росту мікроорганізмів, який відрізняється тим, що ефірні олії розчиняють у димексиді, потім у визначеній концентрації з нейтральним барвником вносять у лунки живильного середовища і після добової інкубації по співвідношенню зон дифузії барвника і затримки росту мікроорганізмів оцінюють чутливість збудників інфекційного процесу Винахід відноситься до області експериментальної медицини, зокрема, мікробіологи Ефірні олії (ЕО) володіють вираженою бактеріцидною дією на різних представників мікроорганізмів Тому виникає необхідність проведення експериментальних досліджень, спрямованих на вивчення антимікробної £ активності ЕО і виявлення серед них найбільш активних для практичного використання Відомий спосіб дослідження антимікробної активності ЕО методом серійних розведень спиртового розчину олій у рідкому живильному середовищі (2) Недоліком спосібу серійних розведень у рідкій і ЩІЛЬНІЙ живильних середовищах є трудомісткість, що обмежує його використання в лабораторній практиці Найбільш близьким по технічній суті є спосіб визначення бактеріцидної активності антибіотиків методом дисків, насичених антимікробними препаратами, які вміщають на поверхню агара, засіяну досліджуваними мікробами, шляхом диффузм в агар антибіотиків відбувається затримка роста мікроорганизмів (1) Спосіб визначення чутливості за допомогою дисків є якісним, який дозволяє установити лише факт чутливості або СТІЙКОСТІ збудника інфекції до даного антибіотика Даний спосіб узятий як прототип В основу винаходу поставлена задача створення способу визначення антимікробної активності ЕО, що дозволить одержати надійні, точні дані, буде технічно простий у виконанні, дасть можливість КІЛЬКІСНО ОЦІНИТИ ступінь чутливості мікроорганізмів і підібрати ефективну концентрацію ЕО для лікування Поставлена задача вирішується тим, що у способі визначення антимікробної активності ЕО шляхом дифузії ЕО в живильне середовище і затримки росту мікроорганізмів, ВІДПОВІДНО ДО винаходу, ЕО розчиняють у димексиді, потім у визначеній концентрації з нейтральним барвником вносять у лунки на живильне середовище і після добової інкубації по співвідношенню зон дифузії барвника і затримці росту мікроорганізмів оцінюють чутливість збудників інфекційного процесу Спосіб здійснюється таким чином ЕО розчиняють у димексиді, потім готують водяні розведення навішень олій від 400мкг/мол і вище (200,100 і 50мкг/мол) На чашки Петрі з живильним середовищем, необхідним для росту визначеного мікроорганізму, газоном засівають тест-культуру У роботі ми використовували 4 тест-культури Candida albicans, Ureaplasma urealyticum, Mycoplasma homims, Tnhomonas vagmahs Посівна доза бактерій дорівнює 1000 мікробних клітин на 1мол живильного середовища У кожну лунку, зроблену в агарі, спеціальним пробійником діаметром 6мм, наносять по краплі робочих розведень ефірних олій з нейтральним барвником Є Контролями служать посіви на живильне середовище без ЕО ДОСЛІДНІ І контрольні проби шкубірують протягом 24 годин при температурі 37°С ю о (О 60475 використовували Ureaplasma urealyticum Установлено, що олія чайного дерева в концентрації 200мкг/мол досить активно діє на Ureaplasma urealyticum - співвідношення діаметрів зон дифузії барвника і затримки росту Ureaplasma urealyticum склало 1,5, що відповідає МІК рівної 200мкг/мол Олія евкаліпта виявляла бактерицидну активність тільки в концентрації 400мкг/мол - МІК, що відповідає коефіцієнту затримки росту 2,5 D1/D2 З приклада випливає, що чим менший коефіцієнт затримки росту, тим більша шпбіруюча активність ЕО Таким чином, запропонований спосіб відрізняється технічною простотою, точністю і надійністю Використання способу, що заявляється вивчення антимікробної активності ЕО дозволить виявити найбільш активно ДІЮЧІ ЕО, КІЛЬКІСНО 0,5 І І і І 1 1 І ОЦІНИТИ ступінь чутливості мікроорганізмів до ЕО і на основі цих даних підібрати ефективну 50 100 200 400 600 МИК концентрацію ЕО, розробити індивідуальну тактику (мкг/мл) лікування Джерела інформації, прийняті до уваги На малюнку зображено крива залежності між 1 Навашин С М Фоміна І П, Раціональна співвідношенням діаметра зони дифузії барвника антибютикотерапія (довідник) -М Медицина, 1982 до діаметра зони затримки росту мікроорганізмів і -496с мінімальною шпбіруючою концентрацією 2 Миколаївський В В , Єременко А Є , Іванов D1 - діаметр зони дифузії барвника І К Біологічна активність ефірних олій -М D2 діаметр зони затримки росту Медицина, 1987 -144с мікроорганізмів 3 Фаустова М Є Вивчення бактерицидної дії D1/D2 коефіцієнт затримки росту деяких ефірних олій на збудників гострих і мікроорганізмів хронічних запальних захворювань легень // МІК- мінімальна інпбіруюча концентрація ЕО Журнал мікробіологи, епідеміологи і імунобюлогп ВІДПОВІДНО ДО виявленої залежності, чим 1993 -№6-С117-118 більша бактерицидна активність ЕО, тим більше 4 Вишнякова Л А , Фаустова М Є , Кветна А С діаметр зони затримки росту мікроорганізмів Антимікробна дія ефірних олій на збудників наближається до діаметра зони дифузії барвника запальних захворювань легень / Актуальні Сутність способу, що заявляється визначення питання профілактики неспецифічних антимікробної активності ефірних олій захворювань легень Збірник наукових праць, пояснюється наступним прикладом Ленінград, 1985 -182с Вивчалася бактерицидна дія ЕО чайного дерева й евкаліпта У якості тест культури Антимікробний ефект, що виник завдяки дифузії ЕО у живильне середовище, враховують по розміру зон затримки росту мікроорганізмів навколо лунок Нами встановлена пряма корелятивна залежність між співвідношенням діаметра зони дифузії барвника до діаметра зони затримки росту мікроорганізмів і мінімальною шпбіруючою концентрацією (МІК) Комп'ютерна верстка О В Кураєв Підписне Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119