Спосіб моделювання гострого болю у щурів

Спосіб моделювання гострого болю за допомогою електростимуляції кореня хвоста щурів, який відрізняється тим, що застосовують високу тривалість та інтенсивність впливу електричного струму, що дозволяє реєструвати такі зміни в організмі, які можна регулювати за допомогою лікарських засобів Корисна модель відноситься до медицини, а саме до визначення, виміру або реєстрами з дослідницькою метою, і може бути використаний в експериментальній медицині для дослідження та вивчення анальгетичної активності фармакологічних препаратів ПІДХОДІВ ДО визначення порогу больового реагування існує досить багато, в той час як способів моделювання болю, як гострого так і хронічного, недостатньо Так широко використовуються тести "запального процесу", "гарячої пластини", "tail flick", електричного подразнення КІНЦІВОК мишей, термічного подразнення хвоста щурів та ІНШІ [1, 2] Перший із названих тестів застосовується для скринінгових досліджень нових лікарських препаратів, ІНШІ тести можуть бути використані для вивчення центрального компонента анальгетичної ди лікарських препаратів Однак використання таких ноцицептивних тестів як "hot plate" і "tail flick" дозволяє оцінити лише зсув порогу відповідної реакції на ноцицептивний вплив і не завжди дає змогу реально визначити виваженість аналгезії, зокрема за наявності моторного дефіциту у тварин Існуючі моделі болю є переважно хронічними (периферична мононейропатія, ад'ювантний артрит, емоційно-больовий стрес, лапаротомія і т п ) [З, 4, 5], моделі же гострого болю або мають критерії оцінки, які не дозволяють оцінити центральний компонент (наприклад, модель вісцерального болю), або зміни в головному та спинному мозку реєструються технічно складними електрофізіологічними способами (моделювання соматичного болю шляхом подразнення периферичних нервових волокон) Біль Є інтегративною функцією організму, яка мобілізує різноманітні функціональні системи для захисту організму від патогенних факторів і критерієм м оцінки можуть виступати різноманітні гуморальні фактори [6], в тому числі й інтенсивність перекисного окислення ЛІПІДІВ в утвореннях головного мозку В основу пропонуємої корисної моделі поставлена задача розробити модель гострого болю, у формуванні якої беруть участь надсегментарні структури мозку і критеріями оцінки якої можуть служити нейрохімічні показники, в тому числі й активність процесів перекисного окислення ЛІПІДІВ в утвореннях мозку Дана модель дозволить проводити дослідження антиноцицептивної активності лікарських засобів і вивчати механізм цієї активності препаратів на нейрохімічному рівні Вищезазначений технічний результат досягається тим, що у відомому способі моделювання гострого болю, який здійснюється за допомогою електростимуляції кореня хвоста щурів, особливість полягає в тому, що біль створюється за допомогою електростимуляції кореня хвоста щурів, при цьому тривалість та інтенсивність впливу дискретно збільшується, в формуванні болю беруть участь надсегментарні структури мозку і критеріями оцінки можуть служити нейрохімічні показники, в тому числі й активність процесів перекисного окислення ЛІПІДІВ в утвореннях мозку Порівняльний аналіз заявленого рішення з прототипом [2] свідчить, що заявлений спосіб відрізняється ВІД ВІДОМОГО ТИМ, ЩО ВІН ДОЗВОЛЯЄ НЄ тільки визначити наявність центральної анальгетичної дії препаратів за допомогою голосової реакції, але і оцінити механізм цієї ди по наявності нейрохімічних змін у вогнище гострого болю в головному мозку, використовуючи різні схеми дискретної електростимуляції кореня хвоста щурів (22)17 02 2004 (24)15 07 2005 ю CM CD 7625 Таким чином, заявлений спосіб відповідає критерію винаходу "Новизна". Відомості, що підтверджують можливість здійснення заявленого об'єкта з досягненням вищезазначеного технічного результату полягають в наступному. Для здійснення способу залучають дорослих білих щурів, переважно самців лінії Вістар. Для оцінки больового порогу використовували метод електричного подразнення хвоста (M.N. СагоІІ, R.K.S. Lim., 1960). Поріг больової чутливості визначали по виникненню голосової реакції на поступово наростаюче електричне подразнення стимулятором ЕСЛ-1. Приклад. Для перевірки вищезазначеного технічного результату було поставлено експеримент. Гострий біль викликали подразненням кореня хвоста щура крізь стальні голчасті електроди поступово зростаючою амплітудою струму. При зміні амплітуди, частота (5Гц), тривалість (0,5мсек), затримка (0,5мсек) залишались незмінними. Використано 5 схем больової стимуляції, які відрізняються один від одного силою та тривалістю впливу (табл.1). Інтенсивність больової реакції корелювала з кількістю продукту перекисного окислення ліпідів малонового диальдегида (МДА) і активністю ферменту антиоксидантного захисту - супероксиддисмутази (СОД), які визначались в гомогенатах кори великих півкуль, стовбурі та гіппокампі мозку, що були отримані після стимуляції після негайної де капітації тварин (табл.2). Як показують результати експерименту спостерігається чітка кореляція між накопиченням продуктів окислення і силою больового впливу, при цьому найбільш значна та вірогідна зміна біохімічних показників виявляється при використанні схеми №5. Таким чином, моделювання стану гострого болю необхідно проводити в умовах, які відповідають способу №5, а саме: п'ятикратна електростимуляція кореня хвоста щурів тривалістю 50, 60, 80, 90 і 120 секунд з 5-ти секундними перервами, при цьому інтенсивність стимуляції збільшується у 1,8; 2,4; 2,8; 3,2; 3,6 разів по відношенню до вихідного порогу больового реагування. Отже, технічний результат проведених експериментальних досліджень заключається в тому, що одержаний новий спосіб моделювання гострого болю на основі відомого типу больового впливу і методу реєстрації больового порогу (голосова реакція на електрошкіряне подразнення кореня хвоста щурів) [2]. Дана модель може бути використана в експериментальній фармакології. Вона дозволяє не тільки реєструвати наявність антиноцицептивної активності у фармакологічних засобів, але й вивчати нейрохімічні зміни під впливом больового подразника і застосування лікарських препаратів. Таким чином, розроблений винахід відповідає умовам "промислова власність", "винахідницькій рівень" і може бути кваліфікований винаходом України. Таблиця 1 Характеристика схем електрошкіряного подразнення кореня хвоста щурів Умови 1* А 60 20 90 20 120 С D С D С D С D С 2 В 1х 1х 1х А ЗО 20 45 15 60 15 90 10 120 В 1х 1,1х 1,2х 1,4х 1,6х Способи моделювання 3 А В А ЗО 1,5х 50 10 5 45 1,6х 60 10 5 60 1,7х 80 5 5 1,9х 90 90 5 5 120 2х 120 4 5 В 1,5х 1,9х 2, їх 2,4х Зх А 50 5 60 5 80 5 90 5 120 В 1,8х 2,4х 2,8х 3,2х 3,6х Примітка: А - тривалість періодів стимуляції та її відсутність (сек.); В - інтенсивність стимуляції (В); С наявність стимуляції; D - відсутність стимуляції; X - поріг больової чутливості (В); * - стимуляція по першої схемі на рівні порогу вокалізації. Таблиця 2 Вплив електрошкіряної стимуляції кореня хвоста щурів на накопичення МДА і активність СОД в утвореннях головного мозку Структури Показник Інтактні тварини 1 2 3 Спосіб моде- Спосіб моделювання №1 лювання №2 4 5 Спосіб моделювання №3 Спосіб моделювання №4 Спосіб моделювання №5 6 7 8 7625 Продовження таблиці 2 1 3 4 МДА, нмоль/ мг білку 1,98 2,41 3,11 3,18 4,34 2,33 +0,32 +0,51 +0,28* +0,3* +0,46* +0,23 -15,0% +3,4% +33,5% +36,5% +86,4% 1,18 1,22 1,21 0,91 0,69 0,57 +0,12 +0,12 +0,31 +0,28 +0,15* +0,2* +3,4% Кора 2 +2,5% -22,8% -41,5 -51,7% 4,82+0,24 4,58+0,38 5,18+0,22* 5,43+0,47* 6,98+0,59* +16,1% +10,4% +24,8% +30,8% +68,3% 1,81 1,97 2,15 1,42 1,23 1.11 +0,15 +0,3 +0,25 +0,18 +0,14* +0,3* +8,8% +18,7% -21,5% -32,0% -38,6% 2,82+0,28 2,26+0,42 2,63+0,29 3,76+0,32* 3,86+0,26* 4,53+0,45* 1,53 -19,8% 1,66 -6,7% 1,61 +36,8% 1,33 +60,6% 0,91 +0,16 +0,33 +0,18 +0,2 +0,27 +0,21* +8,5% +5,2% -11,7% -13,1% -40,5% сод, умов, од/мг білку МДА, нмоль/ мг білку сод, умов, од/мг білку МДА, нмоль/ мг білку Гіппокамп сод, умов, од/мг білку 4,15+0,19 5 6 L_ +33,3% 1,35 7 8 Примітка: * - дані статистично вірогідні по відношенню до контролю Р